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应用CRISPR/Cas9敲除HeLa细胞DDX21基因对新城疫病毒复制的影响

         

摘要

解旋酶家族是一类对所有生物都至关重要的酶,主要功能是基因解旋,DEAD/H-box家族RNA解旋酶是一类重要的解旋酶.DEAD-box RNA解旋酶DDX21被证实可能调控宿主细胞先天性免疫.新城疫病毒(NDV)是一种对养禽业危害严重的病原,NDV能够通过多种手段调控宿主先天性免疫,为了探讨DDX21如何调控NDV复制,本研究应用CRISPR/Cas9系统建立DDX21基因敲除的HeLa细胞系,并验证其对NDV复制的影响.针对DDX21基因共设计6条sgRNA,构建敲除载体并电转染细胞,通过药物筛选、亚克隆筛选后,以PCR和Westernblot进行敲除效率的双重鉴定,并比较野生型和DDX21敲除细胞中NDV的复制效率.结果 显示,由于DDX21对细胞生长至关重要,因此仅获得一株DDX21杂合子敲除细胞,Western blot结果显示DDX21表达量被显著抑制,NDV对在敲除细胞上的复制滴度明显低于野生型细胞,说明DDX21发挥正调控NDV复制的作用,本试验为DDX21调控抗病毒先天性免疫研究奠定了基础.

著录项

  • 来源
    《畜牧兽医学报》 |2019年第7期|1433-1440|共8页
  • 作者单位

    中国农业科学院上海兽医研究所;

    上海200241;

    中国农业科学院上海兽医研究所;

    上海200241;

    福建农林大学动物科学学院;

    福州350002;

    中国农业科学院上海兽医研究所;

    上海200241;

    中国农业科学院上海兽医研究所;

    上海200241;

    中国农业科学院上海兽医研究所;

    上海200241;

    中国农业科学院上海兽医研究所;

    上海200241;

    中国农业科学院上海兽医研究所;

    上海200241;

    中国农业科学院上海兽医研究所;

    上海200241;

    中国农业科学院上海兽医研究所;

    上海200241;

  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 chi
  • 中图分类 S852.659.5;
  • 关键词

    CRISPR/Cas9; DDX21; 新城疫病毒; 复制;

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