牛星状病毒、牛病毒性腹泻病毒1型、牛冠状病毒和牛轮状病毒四重实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

刘梦瑶; 王展慧; 吴浩; 谷月; 吴文学

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利用多重荧光定量RT-PCR(real-time RT-PCR)方法,提高对多病原检测的速度和灵敏度,促进对犊牛腹泻的快速诊断和及时治疗.分别在牛星状病毒(BAstV)OR F2基因,牛病毒性腹泻病毒1型(BVDV-1)5'端非编码区,牛冠状病毒(BCV)Npro基因和牛轮状病毒(BRV)VP6基因的保守基因序列设计、合成并试验筛选了四对有效的特异性引物和探针.进一步利用含4种病毒目的片段的重组质粒,对引物和探针的浓度以及反应条件进行了优化,建立了 Real-time RT-PCR标准曲线,并对四重Real-time PCR方法的特异性、敏感性、重复性和各种临床样本的适用性进行了评价.结果显示:Real-time RT-PCR最适退火温度和时间分别为50.0°C和45 s,BAstV、BVDV-1、BCV和BRV的引物浓度分别为300、300、400和500 nmol·L-1,探针浓度分别为250、150、100和300 nmol·L-1.对BVDV-1、BCV和BRV的最低检测限均为102copies·μL-1,对BAstV的最低检测限为103 copies·μL-1,具有良好的特异性和重复性.该方法对临床采集的粪样的阳性检出率高于PCR方法.上述结果表明,建立的四重Real-time RT-PCR方法可以用于犊牛腹泻常见病原BAstV、BVDV-1、BCV和BRV的快速鉴别诊断.

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来源
《畜牧兽医学报》 |2021年第7期|1942-1952|共11页
作者
刘梦瑶; 王展慧; 吴浩; 谷月; 吴文学;
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作者单位

中国农业大学动物医学院北京100193;

中国农业大学动物医学院北京100193;

中国农业大学动物医学院北京100193;

中国农业大学动物医学院北京100193;

中国农业大学动物医学院北京100193;

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正文语种 chi
中图分类 S858.235.3;
关键词
牛星状病毒; 牛病毒性腹泻病毒; 牛冠状病毒; 牛轮状病毒; 实时荧光定量RT-PCR;

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