牛轮状病毒和牛冠状病毒双重TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立及应用

彭志豪; 范京惠; 韩荞忆; 崔明江; 范葶莉; 刘莹; 王梦佳; 马玉忠; 左玉柱; 任玉红

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为建立一种同时检测牛轮状病毒(BRV)和牛冠状病毒(BCV)的方法,本研究根据GenBank中登录的BRV VP6基因保守序列和BCVN基因保守序列设计引物和探针,通过方阵法优化体系后,建立了一种可以同时检测BRV和BCV的双重TaqMan荧光定量PCR方法.该方法与牛病毒性腹泻病毒、牛细小病毒、牛肠道病毒、牛传染性鼻气管炎病毒均无交叉反应,特异性强;敏感性试验结果显示,该方法对BRV和BCV重组质粒标准品的最低检测限分别为41.8拷贝/μL和3.55拷贝/μL,敏感性高;组内和组间变异系数均小于2％,表明该方法重复性较好.利用建立的该方法对本实验室于2019年3月～9月在河北省内采集的72份牛腹泻粪便样品进行检测,结果显示BRV的阳性率为50.0％(36/72),BCV的阳性率为75.0％(54/72),BRV和BCV共感染率为33.3％(24/72);而常规PCR的上述检测结果分别为47.2％(34/72)、70.8％(51/72),共感染率为29.1％(22/72),二者对BRV和BCV检测结果的阳性符合率分别为97.2％、96.8％,表明该方法可以用于临床样品的检测.本研究建立的双重TaqMan荧光定量PCR方法对BRV和BCV的检测和流行病学调查具有重要意义.

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来源
《中国预防兽医学报》 |2020年第10期|1009-1013|共5页
作者
彭志豪; 范京惠; 韩荞忆; 崔明江; 范葶莉; 刘莹; 王梦佳; 马玉忠; 左玉柱; 任玉红;
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作者单位

河北农业大学动物医学院河北保定071001;

河北农业大学动物医学院河北保定071001;

河北农业大学动物医学院河北保定071001;

河北省畜牧总站河北石家庄050035;

沧州职业技术学院河北沧州061000;

河北农业大学动物医学院河北保定071001;

河北农业大学动物医学院河北保定071001;

河北农业大学动物医学院河北保定071001;

河北农业大学动物医学院河北保定071001;

河北农业大学动物医学院河北保定071001;

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正文语种 chi
中图分类家畜免疫学;
关键词
牛轮状病毒; 牛冠状病毒; 双重TaqMan荧光定量PCR;

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