化脓隐秘杆菌肝素结合蛋白的提取及铁结合蛋白的黏附特性分析

沈克飞; 许国洋; 付利芝; 杨柳; 牟豪; 张素辉

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肝素可剂量依赖性地抑制化脓隐秘杆菌(Trueperella pyogenes)黏附宿主细胞。本研究旨在认识化脓隐秘杆菌肝素结合蛋白及其黏附特性,采用肝素琼脂糖凝胶从化脓隐秘杆菌裂解物中提取蛋白,运用蛋白质质谱和免疫印迹对所提取的蛋白质进行鉴定。采用免疫印迹检测所提取蛋白质与自然感染化脓隐秘杆菌山羊血清的反应原性。制备重组蛋白,对重组蛋白的的肝素结合活性及肝素、抗血清对肝素结合活性的抑制作用进行了分析,对重组蛋白细胞黏附活性和抗血清抑制化脓隐秘杆菌黏附宿主细胞活性进行了分析。结果表明,提取到包含铁结合蛋白(iron-binding protein,IBP)在内的多种ATP结合盒(ATP binding cassette)转运体的底物结合蛋白(substrate binding proteins)。在自然感染山羊血清中检测到抗IBP的IgG抗体,表明IBP在化脓隐秘杆菌感染过程中表达。SDS-PAGE结果显示,rIBP能结合肝素琼脂糖凝胶,生理浓度的NaCl能部分解离与肝素琼脂糖凝胶结合的rIBP。免疫印迹结果显示肝素能剂量依赖性地抑制rIBP结合肝素琼脂糖凝胶,表明rIBP特异性结合肝素。rIBP能黏附MDBK细胞。免疫印迹显示rIBP抗血清不能明显抑制rIBP结合肝素,但活菌计数结果显示能抑制化脓隐秘杆菌黏附MDBK细胞。本研究为深入认识化脓隐秘杆菌肝素结合蛋白及其在化脓隐秘杆菌黏附宿主细胞过程中的作用奠定了基础。

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来源
《畜牧兽医学报》 |2022年第1期|241-249|共9页
作者
沈克飞; 许国洋; 付利芝; 杨柳; 牟豪; 张素辉;
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作者单位

重庆市畜牧科学院;

重庆402460;

重庆市兽用生物制品工程技术研究中心;

重庆402460;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类病原细菌;
关键词
化脓隐秘杆菌; 肝素结合蛋白; 铁结合蛋白; 黏附; 肝素;

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