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针刀调节Ca^(2+)抑制膝骨关节炎大鼠软骨细胞凋亡的实验研究

         

摘要

目的本研究以针刀疗法调节膝软骨细胞内Ca^(2+)为切入点,探讨针刀抗KOA大鼠膝软骨细胞凋亡的作用机制。方法将SD大鼠72只随机分为正常组、模型组、药物组和针刀组各18只,采用膝关节腔药物注射法建立膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)大鼠模型,造模后药物组给予双氯芬酸二已胺乳胶剂局部涂抹用药,针刀组给予针刀治疗连续干预4周。运用HE染色和电镜观察膝关节软骨细胞的形态,细胞流式仪检测膝关节软骨细胞内Ca^(2+)浓度,免疫荧光法检测膝关节软骨的钙调蛋白(Calmodulin)、钙蛋白酶(Calpain)、钙网蛋白(Calreticulin)表达量,荧光定量PCR和Western blot分别检测膝关节软骨的Caspase-3、Caspase-9、Caspase-12表达水平。结果病理检测表明,模型组大鼠膝软骨细胞数量少且排列紊乱,在药物组和针刀组数量增多且排列整齐。电镜检测表明,模型组大鼠膝关节软骨细胞核染色质边集于核膜,细胞核皱缩;药物组和针刀组的细胞核染色质有少数边集,核膜光滑;与模型组比较,针刀组和药物组的Ca^(2+)荧光强度、Calmodulin、Calpain、Caspase-3、Caspase-9、Caspase-12表达水平降低而Calreticulin水平增高(P<0.05);与药物组比较,针刀组对上述指标的调节作用更显著(P<0.05)。结论针刀干预KOA大鼠膝关节软骨细胞凋亡,可能与调节Ca^(2+)释放、抑制Caspase家族的激活有关。

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