恶性疟原虫乳酸脱氢酶基因克隆、可溶性表达及突变体活性分析

徐小玲; 杨瑞仪; 杨雪芹; 冯丽玲; 曾庆平

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恶性疟原虫乳酸脱氢酶基因克隆、可溶性表达及突变体活性分析

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为了建立以代谢酶类为靶点的新型抑制剂乃至抗疟药高通量筛选和体外评价平台,从恶性疟原虫海南株FCC1中扩增出乳酸脱氢酶基因(PfLDH).利用融合表达载体pGEX-2TK和pET-29a(+)将PfLDH基因导入大肠杆菌B121和BL21(DE3)中高效表达,结果成功地在菌体裂解上清液中检测到高酶促活性的PfLDH.以pGEX-2TK为载体的PfLDH基因主要以包涵体形式表达,以pET-29a(+)为载体的PfLDH基因则能大量表达可溶性PtLDH,表明后者更适合用来大量制备重组PfLDH.同时,根据SDS-PAGE图谱并结合序列分析结果,对基因扩增中随机产生的PfLDH截短序列进行了筛选和克隆,从中获得4个携带终止突变并分别编码45、80、149和263个氨基酸残基的"提早成熟"基因PfLDH-△271、-△236、-△167和-△53.通过基因表达及酶促活性测定,评价了提前终止突变对PfLDH活力的影响,为探讨PfLDH结构与功能的关系提供了依据.

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来源
《生物工程学报》 |2007年第4期|593-597|共5页
作者
徐小玲; 杨瑞仪; 杨雪芹; 冯丽玲; 曾庆平;
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作者单位

广州中医药大学热带医学研究所生物技术研究室,广州,510405;

广州中医药大学热带医学研究所生物技术研究室,广州,510405;

广州中医药大学热带医学研究所生物技术研究室,广州,510405;

广州中医药大学热带医学研究所生物技术研究室,广州,510405;

广州中医药大学热带医学研究所生物技术研究室,广州,510405;

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正文语种 chi
中图分类基因工程（遗传工程）;
关键词
PfLDH; 融合表达; 终止突变; 酶促活性;

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