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低氧条件下B淋巴细胞瘤-2/腺病毒E1B 19 000相互作用蛋白3对人真皮微血管内皮细胞迁移和运动性的影响及其机制

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目的 探讨低氧条件下B淋巴细胞瘤-2/腺病毒E1B 19 000相互作用蛋白3(BNIP3)对人真皮微血管内皮细胞(HDMEC)迁移和运动性的影响及其机制.方法 采用实验研究方法 .(1)取HDMEC,采用随机数字表法(下同)分成行常规培养的常氧组及采用体积分数2％氧气低氧处理相应时间点的低氧6、12、24 h组,采用蛋1质印迹法检测细胞中BNIP3及微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3 Ⅱ)的蛋白表达.(2)取HDMEC,分成常氧+空载组、常氧+BNIP3敲减组、低氧+空载组、低氧+BNIP3敲减组,分别转染空载病毒或BNIP3敲减病毒并进行常氧或低氧处理6 h,采用蛋白质印迹法和免疫荧光染色法检测BNIP3的蛋白表达;采用划痕试验检测划痕后24 h的划痕面积,并计算划痕愈合率;在活细胞工作站测算3h内细胞运动的曲线距离,计算运动速度.(3)取HDMEC,同实验(2)分组及处理,采用蛋白质印迹法和免疫荧光染色法检测LC3 Ⅱ的蛋白表达.以上实验样本数均为3.对数据行单因素方差分析及LSD检验.结果 (1)与常氧组比较,低氧6、12、24 h组细胞BNP3及LC3 Ⅱ的蛋白表达量显著增加(P ＜0.01).(2)培养6 h,与低氧+空载组比较,常氧+空载组和低氧+BNIP3敲减组细胞BNIP3的蛋白表达量显著下降(P ＜0.05或P ＜0.01).常氧+空载组和常氧+BNIP3敲减组细胞中表示BNIP3蛋白表达的红色荧光较弱,低氧+空载组细胞红色荧光较强,低氧+BNIP3敲减组细胞中红色荧光较低氧+空载组明显减弱.划痕后24 h,低氧+空载组细胞划痕基本愈合,其他3组细胞剩余划痕面积较大.常氧+空载组、常氧+BNIP3敲减组、低氧+空载组、低氧+BNIP3敲减组细胞划痕愈合率分别为(61 ±4)％、(58 ±4)％、(88 ±4)％、(57 ±4)％.低氧+空载组细胞划痕愈合率明显高于常氧+空载组(P ＜0.01)和低氧+BNIP3敲减组(P ＜0.05).观察3h内,低氧+空载组细胞运动范围较常氧+空载组显著增大,低氧+BNIP3敲减组细胞运动范围较低氧+空载组明显缩小;低氧+空载组细胞曲线运动速度较常氧+空载组和低氧+BNIP3敲减组明显增加(P ＜0.01).(3)培养6 h,与低氧+空载组比较,常氧+空载组和低氧+BNIP3敲减组细胞LC3 Ⅱ的蛋白表达量显著下降(P ＜0.05或P ＜0.01).培养6 h,常氧+空载组和常氧+BNIP3敲减组细胞中表示LC3蛋白表达的红色荧光较弱,低氧+空载组细胞红色荧光明显增强,低氧+BNIP3敲减组细胞红色荧光被显著抑制.结论 低氧条件下BNIP3可促进HDMEC的迁移和运动性,且自噬可能参与BNIP3对HDMEC迁移和运动性的调节.

著录项

  • 来源
    《中华烧伤杂志》 |2021年第1期|9-16|共8页
  • 作者

    张均辉; 张琼; 贾杰只; 李红梅; 张灿; 胡炯宇; 张东霞; 黄跃生;

  • 作者单位

    陆军军医大学(第三军医大学)第一附属医院内分泌科 重庆400038;

    陆军军医大学(第三军医大学)第一附属医院全军烧伤研究所 创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室 重庆400038;

    陆军军医大学(第三军医大学)第一附属医院全军烧伤研究所 创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室 重庆400038;

    陆军军医大学(第三军医大学)第一附属医院肿瘤科 重庆400038;

    陆军军医大学(第三军医大学)第一附属医院整形外科 重庆400038;

    陆军军医大学(第三军医大学)第一附属医院内分泌科 重庆400038;

    陆军军医大学(第三军医大学)第一附属医院全军烧伤研究所 创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室 重庆400038;

    深圳市人民医院南方科技大学第一附属医院暨南大学第二临床医学院创面修复科 创面修复研究所 518020;

  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 chi
  • 中图分类
  • 关键词

    细胞低氧; 细胞迁移分析; 细胞运动; 自噬; 人真皮微血管内皮细胞; B淋巴细胞瘤-2/腺病毒E1B 19 000相互作用蛋白3;

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