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Slit2/Robo4信号通路对小鼠心肌微血管内皮细胞增殖和迁移的影响

         

摘要

目的检测分泌型细胞外基质糖蛋白Slit2及其受体Robo4蛋白在小鼠心室肌的血管组织中的表达情况,探讨Slit2/Robo4信号通路对小鼠心肌微血管内皮细胞增殖及迁移的影响。方法免疫组织化学法检测小鼠心室肌的血管组织中Slit2、Robo4蛋白的表达情况。从小鼠心室肌分离出微血管内皮细胞,通过免疫荧光和酶联免疫法分别检测小鼠心肌微血管内皮细胞中Robo4和Slit2蛋白的表达情况。利用CCK-8试剂盒,观察不同浓度外源性的Slit2对小鼠心肌微血管内皮细胞增殖的影响。利用transwell小室,设计对照组、VEGF组、Slit2组(100 ng/ml Slit2),Slit2+VEGF组(100 ng/ml Slit2+10 ng/ml VEGF),观察外源性Slit2对小鼠心肌微血管内皮细胞迁移的影响。结果免疫组织化学结果显示小鼠心室肌的血管组织中Slit2、Robo4蛋白均有表达。RT-PCR及免疫荧光检测结果显示小鼠心肌微血管内皮细胞中有Robo4 mRNA及其蛋白的表达。酶联免疫法检测结果显示小鼠心肌微血管内皮细胞中有Slit2蛋白的表达。在细胞增殖实验中,不同浓度的Slit2组450 nm处的吸光度值与阴性对照组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。在细胞迁移实验中,Slit2组小鼠心肌微血管内皮细胞迁移数为(22.1±2.8)与对照组的(23.2±3.8)比较差异无统计学意义(P>0.05),Slit2组小鼠心肌微血管内皮细胞迁移数为(22.1±2.8),Slit2组小鼠心肌微血管内皮细胞迁移数为(22.1±2.8)与VEGF组的(65.3±3.8),Slit2+VEGF组的(29.2±3.4)之间比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论 Slit2、Robo4蛋白均表达于小鼠心室肌组织,Robo4蛋白表达于小鼠心肌微血管内皮细胞,不同浓度的外源性Slit2对小鼠心肌微血管内皮细胞的增殖没有影响。100 ng/m1外源性Slit2可抑制VEGF诱导的小鼠心肌微血管内皮细胞迁移。

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