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人pEGFP-C2-PRDX3真核表达载体构建与在人髓母细胞瘤DAOY细胞中表达

         
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目的 构建人pEGFP-C2-PRDX3真核表达载体,并检测其在人髓母细胞瘤DAOY细胞中的表达.方法 从人髓母细胞瘤DAOY细胞中提取总RNA,采用RT-PCR法对编码PRDX3的基因片段进行扩增,应用基因重组技术,将目的 片段亚克隆到pEGFP-C2真核表达载体,经PCR、酶切和测序鉴定后,用脂质体法将重组质粒转染入DAOY细胞,分别采用RT-PCR法、Western blot法检测PRDX3在DAOY细胞中的表达.结果 双酶切及测序结果验证PRDX3片段正确插入pEGFP-C2质粒,转染后的PRDX3基因mRNA及蛋白质水平均明显上调.结论 成功构建了具有报告基因-增强绿色荧光蛋白(EGFP)基因的真核表达载体pEGFP-C2-PRDX3,为进一步研究PRDX3基因在人髓母细胞瘤中的生物学功能奠定了基础.%Purpose To construct a human cukaryotie expression vector pEGFP-G2-PRDX3 and to investigate its expression in human modulloblastoma DAOY ceils. Methods Total RNA was extracted from human medullohlastoma DAOY cells and then the target se-qnenee of human PRDX3 gene was amplified by reverse transcription-polymerase chain reaction ( RT-PCR ). With the technique of gem re-arrangement, PRDX3 gene was subelonod into pEGFP-C2 plasmid. After identification with PCR, restriction enzyme digestion and sequence analysis, the reeomhinant plasmid was transfeetcd into DAOY ceils with the cationic loposome. RT-PCR, Western blotting were used to detect the PRDX3 mRNA and protein expression of DAOY cells. Results Correct construction of pEGFP-C2-PRDX3 was ieie:ntified by means the double digestion and sequeneing. The expression of mRNA and protoin of PRDX3 gene was significantly up-regulated after transfction. Conclusions The eukaryeitic expression vector pEGFP-C2-PRDX3 with a reporter gene-enhanee green flu oreseent protoin ( EGFP) gene is sueecssfully eonstrueted and would eontribute to the further studies on the role of PRDX3 in human medulloblastoma.

著录项

  • 来源
    《临床与实验病理学杂志》 |2012年第12期|1325-1328|共4页
  • 作者

    王晓玫; 刘汉勇; 金红涛; 成志强; 彭全洲; 胡锦涛; 高利昆; 许静; 张石芬; 曾照成;

  • 作者单位

    深圳市人民医院病理科;

    暨南大学第二临床医学院;

    深圳;

    518020;

    深圳市人民医院病理科;

    暨南大学第二临床医学院;

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    暨南大学第二临床医学院;

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    518020;

  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 chi
  • 中图分类 肿瘤学实验研究;颅内肿瘤及脑肿瘤;
  • 关键词

    pEGFP-C2质粒; PRDX3; DAOY细胞; 真核表达载体;

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