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成人骨髓间充质干细胞体外培养及其生物学特性鉴定

         
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目的 探讨并优化成人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)体外分离培养方法,鉴定其生物学特性,为BMSCs应用奠定技术基础.方法 将手术弃骨无菌条件下用无血清培养液(α MEM培养基、100 u/ml 青霉素,100 u/ml 链霉素)冲出骨髓,采用密度梯度离心法结合贴壁筛选法分离纯化hBMSCs,通过传代培养,扩增hBMSCs.倒置光学显微镜下观察细胞形态及生长情况,细胞计数法绘制细胞生长曲线,并分析冻存细胞复苏后的生长特性,免疫荧光染色测定hBMSCs表面标志,成骨诱导试剂盒检测hBMSCs向成骨分化的潜能.结果 倒置显微镜下观察hBMSCs呈梭形、多角形成纤维细胞样形态,大小均一,漩涡状生长.细胞生长曲线分析细胞贴壁2 d基本无增殖,处于潜伏期,对数增殖期为3～6 d,第7 天后进入平台期,细胞出现接触抑制现象.冻存细胞复苏后细胞生长特性无明显改变.免疫荧光染色结果显示,第3代hBMSCs 小鼠IgG、 CD34、CD45表达阴性;CD29、CD90、CD166表达阳性,均为胞浆着色,细胞表型稳定.成骨诱导试剂诱导细胞10d后hBMSCs表现成骨细胞特性,且碱性磷酸酶活性明显增高.结论 密度梯度离心法结合贴壁筛选法分离纯化的hBMSCs纯度高,增殖活性强,传代培养生长旺盛且生物学特性稳定;可为组织细胞工程和基因治疗提供理想的种子细胞.

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