间质干细胞

摘要： 目的检测转导Octamer转录因子4(OCT4)的人毛囊间充质干细胞(hHFMSC)衍生的贴壁和悬浮亚群转录组去分化差异,探讨OCT4诱导hHFMSC去分化的作用机制以及去分化程度对细胞形态及黏附性的影响。方法收集hHFMSC、贴壁亚群和悬浮亚群3组细胞并提取总RNA,进行转录组测序,分析差异基因的组织特异性生物功能,并检测组织特异性基因的表达变化。结果OCT4转导后hHFMSC中下调基因显著富集于毛囊、表皮及皮肤附属器发育的生物过程,且毛囊发育、皮肤分化相关基因(MYSM1、KRT15及RBPJ等)显著下调;与贴壁亚群相比,悬浮亚群中MYSM1及FZD6等毛囊发育基因进一步下调。结论过表达OCT4可能通过调控毛囊、表皮及皮肤附属器发育基因的表达诱导hHFMSC去分化,且细胞形态及黏附性可能与组织特异性基因表达谱有关。

摘要： 目的探讨氟伐他汀对过氧化氢诱导的骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖凋亡的影响及作用机制。方法用400μmol/L的过氧化氢处理BMSCs作为模型组;BMSCs用400μmol/L的过氧化氢培养的同时分别加入0.01、0.1、1μmol/L氟伐他汀作为干预组;未添加任何物质正常培养的细胞作为正常组;将si-NC、si-Sirt3转染至BMSCs中再用400μmol/L的过氧化氢、0.1μmol/L氟伐他汀处理作为干预组2+si-NC组、干预组2+si-Sirt3组。蛋白质印迹(WesternBlotting)法检测Sirt3蛋白表达水平;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡。结果与正常组相比,模型组BMSCs细胞存活率降低[(41.57±4.32)%比(100.40±10.23)%],细胞凋亡率升高[(38.57±4.04)%比(8.28±0.92)%],Sirt3表达水平降低[(0.31±0.03)比(1.01±0.10)],均差异有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,氟伐他汀干预组细胞存活率明显升高细胞凋亡率降低,Sirt3表达水平升高,均差异有统计学意义(P<0.05)。提示抑制Sirt3能逆转氟伐他汀对过氧化氢诱导的BMSCs细胞增殖抑制和凋亡促进作用。结论氟伐他汀能抑制过氧化氢诱导的BMSCs细胞凋亡,其机制可能与上调Sirt3有关。

摘要： 目的本实验将具有多向分化潜能的人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)作为种子细胞,诱导分化为组织工程脂肪,探讨其在脂肪移植中提高脂肪存活率的能力。方法选取健康雄性BALB/c裸鼠30只,随机分为7、14、28 d组,每组10只;选取健康雄性SD大鼠10只,脱椎处死后按照常规方法提取肠系膜、腹股沟处脂肪颗粒。培养hUC-MSCs并进行成脂诱导后混合大鼠脂肪颗粒移植于3组裸鼠左侧腹部筋膜下作为实验侧,将相同剂量的单纯脂肪颗粒移植于右侧腹部筋膜下作为对照侧。移植后对3组裸鼠的移植脂肪进行组织病理学检测,并比较移植脂肪组织的质量维持率。结果7、14及28 d组裸鼠间,实验侧移植脂肪组织质量维持率逐渐降低(F=58.47,P<0.05),对照侧移植脂肪组织质量维持率也逐渐降低(F=225.28,P<0.05);在3组裸鼠中,实验侧移植脂肪组织质量维持率均显著高于对照侧(F=1490.66~2142.95,P<0.05)。结论hUC-MSCs来源的脂肪细胞与天然的脂肪细胞颗粒混合后移植可以有效提高移植后脂肪细胞的存活率。本研究为以hUC-MSCs作为种子细胞的组织工程脂肪在脂肪移植中的应用奠定了实验基础。

摘要： 目的 研究人脐带源间充质干细胞(hUC-MSCs)移植对CCl_(4)所致肝硬化大鼠的治疗及抗氧化作用。方法 皮下注射CCl_(4)橄榄油溶液制备大鼠肝硬化模型,造模成功后尾静脉注射hUC-MSCs,并于hUC-MSCs移植后第8周处死大鼠并检测大鼠血清谷氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)和清蛋白(ALB)等肝功能指标,以及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)和丙二醛(MDA)等氧化应激指标,应用苏木精-伊红染色和MASSON三色染色评估肝细胞炎性浸润及纤维沉积。结果 hUC-MSCs移植可以改善CCl_(4)所致肝硬化大鼠的肝功能,改善大鼠切片病理学炎症评分以及纤维组织沉积;hUC-MSCs移植可升高CCl_(4)所致肝硬化大鼠SOD、GSH、GPx表达,降低MDA表达。结论 hUC-MSCs移植可改善CCl_(4)所致肝硬化大鼠的肝功能,改善肝硬化大鼠肝细胞炎性浸润及纤维化沉积,抗氧化作用可能是其作用机制。

摘要： 骨质疏松症(osteoporosis,OP)的发生与成骨细胞介导的骨形成和破骨细胞介导的骨吸收之间的平衡被打破密切相关,而骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cell,BMSC)成骨分化对维持二者平衡至关重要。物理疗法治疗OP具有疗效好、安全性高等特点,在临床上逐渐被广泛使用。多项研究表明,多种物理疗法治疗OP的作用机制与调控BMSC成骨分化密切相关。本文对运动疗法、全身振动、脉冲电磁场、体外冲击波等物理疗法调控BMSC成骨分化治疗OP的研究进展进行了综述。

摘要： 目的探究低氧处理的人脂肪间充质干细胞(hAMSCs)外泌体对巨噬细胞M1/M2分型的影响及其分子机制。方法提取低氧处理的hAMSCs外泌体与M1巨噬细胞共培养,采用流式细胞术检测共培养后巨噬细胞表型M1/M2比例,实时荧光定量PCR(qPCR)检测炎症相关因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、一氧化氮合酶2(NOS-2)和白细胞介素12(IL-12)的表达,Western blot检测核因子κB(NF-κB)通路中P65和p-P65蛋白的表达。结果加入低氧处理的hAMSCs外泌体后,巨噬细胞M1型比例下降,M2型比例增加(t=3.293、10.242,P<0.05),炎症相关因子TNF-α、IL-1β、NOS-2以及IL-12的表达下调(F=10.820~222.942,P<0.05),p-P65/P65蛋白表达比值下降(F=375.634,P<0.05)。结论低氧处理的hAMSCs外泌体能够通过抑制NF-κB通路使巨噬细胞表型由M1型向M2型转化。

摘要： 目的 探讨基于中日友好医院(China-Japan Friendship Hospital,CJFH)分型的保髋手术疗效的影响因素.方法 2012年6月至2016年9月接受保髋手术治疗的非创伤性股骨头坏死患者325例432髋.依据CJFH分型行髓芯减压自体骨髓单个核细胞移植141髋(髓芯减压组)和头颈部开窗减压病灶清除植骨术291髋(开窗减压组).采用Harris髋关节功能评分评估临床疗效,摄X线片观察坏死修复、股骨头塌陷及关节退变.临床失败定义为末次随访时Harris评分较术前评级降低和(或)影像学上股骨头塌陷进展(ARCO分期增加).终点事件为疼痛明显加重、Harris评分为差(＜70分)和(或)股骨头进行性塌陷.采用Cox比例回归模型分析临床失败的危险因素.结果 髓芯减压组67髋临床失败(47.5％,67/141),其中CJFH分型C+M型3髋(13.0％,3/23)、L1型24髋(38.1％,24/63)、L2型14髋(82.4％,14/17)、L3型26髋(68.4％,26/38).开窗减压组 106髋临床失败(36.4％,106/291),C+M型 1 髋(33.3％,1/3)、L1 型41 髋(31.3％,41/131)、L2型22髋(84.6％,22/26)、L3型42髋(32.1％,42/131).髓芯减压组中不同年龄(x2=3.887,P=0.049)、不同术前CJFH分型(X2=40.943,P=0.000)的临床失败率的差异有统计学意义;Cox回归模型分析显示年龄≥40岁[HR=2.325,95％CI(1.398,3.866),P=0.000]、术前 Harris 评分70～80分[HR=2.163,95％CI(1.140,4.105),P=0.018]和＜70分[HR=2.597,95％CI(1.173,5.749),P=0.019]、术前CJFH分型 L2型[HR=35.052,95％CI(7.721,159.133),P=0.000)和 L3型[HR=13.242,95％CI(3.104,56.491),P=0.000]是临床失败的危险因素.开窗减压组中不同年龄(x2=8.437,P=0.004)、不同术前Harris评分(x2=19.737,P=0.000)、不同术前CJFH分型(X2=29.265,P=0.000)的临床失败率的差异有统计学意义;Cox回归模型分析显示术前 Harris 评分＜70分[HR=5.102,95％CI(2.339,11.129),P=0.000]、术前 CJFH 分型 L2型[HR=32.761,95％CI(6.165,43.507),P=0.000]是临床失败的危险因素.结论 股骨头坏死保髋手术治疗效果受年龄、术前Harris评分和CJFH分型的影响;术前临床症状越明显,受累股骨头负重关节面及外侧柱支撑结构未得到有效重建,保髋手术的预后越差.

摘要： 目的 通过组织学分析、免疫荧光染色、电生理检测和感觉运动功能评价等实验方法,探讨3D打印水凝胶支架联合骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)促进脊髓损伤功能恢复的有效性.方法 将10％的GelMA水凝胶和106U的BMSCs悬液配置成的生物墨水,通过3D打印平台组建仿生脊髓支架,置人培养基中并在37°C的CO2培养箱环境培养.通过扫描电镜观察支架的微观结构,大体观察BMSC在支架中的分布;利用CAM/PI染色和共聚焦显微镜观察干细胞在支架中的存活,测定支架的生物相容性;将支架植入大鼠背部皮下组织,利用HE染色测定皮下组织以检测支架的免疫原性;制备大鼠脊髓损伤半切模型,移植支架进行治疗,利用共聚焦显微镜评估脊髓损伤局部的神经元和轴突的再生情况;采用BBB评分进行运动功能评价;机械疼痛评分进行感觉功能评价;表面电极检测法评价电生理恢复效果.结果 支架内部呈现网状疏松结构,长梭形的间充质于细胞在支架内外均匀分布;支架生物相容性良好,制备的支架在打印24h后细胞存活率达到96％;皮下移植支架28 d后,免疫排斥反应轻微,免疫原性低;脊髓移植支架28 d后,通过HE染色观察到,与损伤组相比,治疗组的再生脊髓组织明显增多,其中广泛分布着细胞,通过免疫组化染色证实再生细胞部分为神经元;免疫荧光染色共聚焦显微镜观察到,与损伤组对比,支架治疗组损伤部位的再生神经元和轴突明显增多.BBB评分中,支架治疗组第一周10分,损伤组仅1分左右,差异有统计学意义(P＜0.05);支架治疗组第4周为17分,损伤组仅恢复至4分左右,差异有统计学意义(P＜0.05);治疗组的斜板支撑角度恢复至40°,而损伤组仅恢复至22°;治疗组的疼痛阈值降至18.5分,与损伤组无统计学差异;治疗组电生理的潜伏期恢复效果同假手术组,优于损伤组.结论 3D打印水凝胶支架具有疏松网状结构适宜细胞存活增殖、生物性良好、细胞毒性低、免疫原性低等优良特性,促进损伤局部的神经元再生并伸出轴突,从而有效促进脊髓损伤后的运功功能、感觉功能和神经电信号传导速率的恢复.

摘要： 目的 制备125I标记的CD90单克隆抗体(mAb),探讨其示踪间充质干细胞(MSCs)的可能性.方法 采用氯胺T法对CD90 mAb进行125I标记,测定标记率.(1)体外实验:检测MSCs和125I-CD90 mAb孵育后上清液和沉淀的放射性计数,分别计算6个不同时间点的细胞结合率.(2)体内实验:构建荷瘤BALB/c裸鼠,采用完全随机法分为4组(每组3只),a组经腹腔注射MSCs,b组经腹腔注射生理盐水,c组经瘤内注射MSCs,d组经瘤内注射生理盐水.每只荷瘤裸鼠尾静脉注射125I-CD90 mAb(3.7 MBq/0.2 mL)后行Micro-SPECT/CT显像,测定并计算在4个不同时间点肿瘤及主要器官和组织的放射性摄取值[每克组织百分注射剂量率(％ID/g)].2组均数之间的比较采用独立样本t检验.结果 125I-CD90 mAb标记率为54.4％,放射化学纯度为98.79％.(1)在10 min、30 min、1h、2h、6h、8h时, 125I-CD90 mAb与MSCs的结合率分别为0.86％、1.73％、1.88％、5.67％、12.20％、10.69％,6h时最高.(2)荷瘤裸鼠的肿瘤长至150～200 mm3时用于实验.在注射后6h、1d、2d、3d时,Micro-SPECT/CT显示125I-CD90 mAb在荷瘤裸鼠的肿瘤及主要器官和组织中有着不同程度的分布,其中a组肿瘤组织的放射性摄取值分别为(3.66±1.69)、(2.35±1.30)、(1.36±0.95)、(1.33±0.84)％ID/g,均高于b组的(2.93±1.74)、(1.92±1.15)、(1.12±0.78)、(1.03±0.72) ％ID/g,但差异均无统计学意义(t=0.35～0.52,均P＞0.05);c组肿瘤组织的放射性摄取值分别为(5.75±1.30)、(3.75±0.77)、(2.70-0.44)、(1.88±0.48)％ID/g,均高于d组的(3.17±0.75)、(2.03±0.54)、(1.44±0.39)、(1.38±0.27) ％ID/g,且差异均有统计学意义(t=1.59～3.70,均P＜0.05).结论 成功制备的125I-CD90mAb具有良好的与MSCs结合的能力,有潜力作为核素探针示踪MSCs.

摘要： 目的 探讨微孔化羊脱细胞真皮基质(ADM)复合人脐带间充质干细胞(hUCMSC)促进全层损伤皮肤创面愈合的治疗机制.方法 将hUCMSC种植于微孔化羊ADM上共培养,形成复合生物敷料.选用72只裸鼠制作成皮肤全层损伤模型,按随机数字表法分为3组,每组24只,hUCMSC种植于微孔化羊ADM上治疗全层损伤创面组(hUCMSC+微孔化羊ADM组);羊ADM治疗全层损伤组(羊ADM组);碘伏纱布治疗全层损伤创面组(碘伏纱布组).术后14、21、28 d检测各组裸鼠创面愈合率,运用qRT-PCR技术检测创面组织中Bax和Bcl-2的mRNA的表达,免疫组织化学染色检测创面愈合相关蛋白细胞胶原蛋白Ⅰ和血管内皮生长因子(VEGF)的表达.数据比较采用单因素方差分析和t检验.结果 术后14 d,hUCMSC+微孔化羊ADM组的愈合率为(65.34±14.72)％,明显高于碘伏纱布组[(37.54±10.21)％],也高于羊ADM组[(49.08±11.16)％],差异均有统计学意义(t=19.52、14.72,P＜0.05).随着损伤创面的逐步愈合,术后28 d,hUCMSC+微孔化羊ADM组的愈合率为(98.63±15.41)％,明显高于羊ADM组[(81.74±16.27)％]和碘伏纱布组[(63.47±14.80)％],差异均有统计意义(t=-16.42、20.35,P＜0.05).Bax在hUCMSC+微孔化羊ADM组的创面组织中的表达显著降低,尤其在术后21 d的表达量为0.25 ±0.06,明显低于碘伏纱布组(0.53±0.16)和羊ADM组(0.41±0.12),差异均有统计学意义(t=3.52、-2.83,P＜0.05).Bcl-2在hUCMSC+微孔化羊ADM组的表达显著高于其他2组,尤其是在术后21 d的表达量为0.63±0.19,明显高于碘伏纱布组(0.34±0.09)和羊ADM组(0.46±0.13),差异均有统计学意义(t=5.31、-6.07,P＜0.05).免疫组织化学技术检测发现hUCMSC+微孔化羊ADM组胶原蛋白Ⅰ和VEGF的表达深棕色细胞虽然比羊ADM组和碘伏纱布组稍微有所增多,但是效果并不显著.结论 hUCMSC+微孔化羊ADM复合敷料,通过携带hUCMSC更能促进皮肤全层损伤的愈合并减少凋亡细胞的产生.

摘要： 前期研究中从胃癌患者肿瘤组织中分离得到间质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)样细胞,并证实这一类细胞具有肿瘤相关成纤维细胞的基本特性,能够体内外促进肿瘤生长,但机制尚不清楚.本研究主要探讨胃癌来源的MSCs是否通过诱导中性粒细胞的促瘤型极化而促进胃癌生长.研究结果表明,胃癌间质干细胞(GC-MSCs)具有募集和保护中性粒细胞的作用,能够抑制其自发性凋亡.GC-MSCs上清诱导中性粒细胞高表达IL8,CCL2和TNFá等炎症因子.GC-MSCs活化的中性粒细胞通过细胞接触依赖的方式促进胃癌细胞转移,但对胃癌细胞增殖无明显作用.GC-MSCs上清活化的中性粒细胞体外还能够促进内皮细胞形成管状结构.发现GC-MSCs上清主要通过激活中性粒细胞内ERK信号通路而发挥上述作用.进一步揭示GC-MSCs分泌高水平的IL6,而拮抗IL6/IL6R结合明显抑制GC-MSCs对中性粒细胞的活化作用.此外,还发现中性粒细胞被GC-MSCs活化后,其上清能诱导正常MSCs向肿瘤相关成纤维细胞分化,高表达其标志物á-SMA和波形蛋白.结果表明:GC-MSCs具有调节中性粒细胞的趋化、存活和活化作用.GC-MSCs与中性粒细胞间的双向相互作用共同促进胃癌进展.本研究揭示了MSCs在胃癌发生发展中的新作用机制,为胃癌的治疗干预提供了潜在靶点.

摘要： 采用Ⅰ型胶原酶消化兔腹股沟皮下脂肪组织,分离培养脂肪间质干细胞,并用免疫组化和体外诱导分化的方法对其表面分子标志和多向分化潜能进行鉴定.结果显示,兔脂肪组纵中能够分离培养出脂肪间质干细胞,该类细胞表达CD29、CD44和CD105,不表达CD34、CD45及HLA-DR等农面分子标记,并具有可分化为脂肪细胞、神经细胞和成骨细胞等细胞类型的多向分化潜能.证实,兔脂肪组织中存在具有多向分化潜能的间质干细胞.

摘要： 胃肠道间质瘤(GIST)，胃肠道间质瘤(GIST)是一种较少见的肿瘤，是一组独立起源于胃肠壁间质干细胞、由未分化或多能的梭形或上皮样细胞组成、免疫组化多数过度表达CD117和(或)CD34的肿瘤。它既不同于典型平滑肌瘤亦不同于雪旺氏瘤。目前认为GIST是最常见的消化道间叶性肿瘤。本文介绍了胃肠道间质瘤的流行病学和病理，阐述了其临床表现，提出了诊断和治疗方法。

摘要： 胃肠道间质瘤(GIST)是指一类独立起源于胃肠道原始间质干细胞并呈非定向分化的消化道间叶肿瘤。1983年Mazur和Clark首次提出了胃肠道间质瘤这一概念以来，随着组织化学、免疫组织化学、电镜及分子生物学技术的应用，GIST的本质逐步被人们所认识。rn 本文介绍了胃肠道间质瘤的概念及其演变，阐述了胃肠道间质瘤的病理学特征，浅谈了胃肠道间质瘤的分子生物学研究情况，分析了胃肠道间质瘤的诊断方法及其评价，提出了胃肠道间质瘤的治疗方法，探讨了胃肠道间质瘤的预后情况。

摘要： 目的：研究旨在探索诊断超声击破自制脂质体微泡无创、靶向开放大鼠血脑屏障(BBB)促MSCs归巢并修复大鼠脑缺血的可行性与有效性. 方法：诊断超声直接经大鼠颅骨辐照,并将实验大鼠分为对照组(脑缺血组)、超声+微泡组、静脉移植MSCs组及超声+微泡+MSCs组.微泡与MSCs经静脉注入,通过伊文斯兰与硝酸镧外渗评价超声联合微泡辐照后大鼠BBB开放情况;荧光示踪定位MSCs经血管跨BBB迁移归巢脑实质全过程,分别在MSCs移植后1,4,7及14天观察并计数各组MSCs数量,进行组间统计学分析与比较.在不同时间点采用HE染色对超声辐照脑缺血局部血管密度进行计数以评价血管新生情况.通过前肢肌力实验、平衡木实验等对超声联合微泡促MSCs移植后脑缺血大鼠的神经功能与行为学进行评分，并进行组间统计学比较，P<0.05为差异具有统计学意义。 结果：超声辐照侧大鼠脑缺血区可见一定程度的硝酸镧与EB外渗，提示大鼠BBB得到靶向和有效开放。荧光显微镜观察发现MSCs主要位于超声辐照侧脑缺血部位的大脑皮层、海马等区域，超声联合微泡介导MSCs移植组荧光细胞数量显著性高于单纯经静脉MSCs移植组（P<0.05）。荧光显微镜记录了MSCs自血管跨BBB进入脑组织的全过程包括粘附贴壁、迁移及跨过血管壁等。诊断超声击破微泡后脑缺血区新生血管密度高于其余各组，神经功能得到有效改善，组间比较差异具有统计学意义，P<0.05。 结论：诊断超声击破自制脂质体微泡经大鼠颅骨辐照能无创有效开放BBB并成功促MSCs颅内靶向转运，在超声生物学效应与MSCs共同作用下促进脑缺血区血管新生及神经功能改善，有望为颅内疾病的安全有效治疗提供新思路。

摘要： 目的：研究旨在探索诊断超声击破自制脂质体微泡无创、靶向开放大鼠血脑屏障(BBB)促MSCs归巢并修复大鼠脑缺血的可行性与有效性. 方法：诊断超声直接经大鼠颅骨辐照,并将实验大鼠分为对照组(脑缺血组)、超声+微泡组、静脉移植MSCs组及超声+微泡+MSCs组.微泡与MSCs经静脉注入,通过伊文斯兰与硝酸镧外渗评价超声联合微泡辐照后大鼠BBB开放情况;荧光示踪定位MSCs经血管跨BBB迁移归巢脑实质全过程,分别在MSCs移植后1,4,7及14天观察并计数各组MSCs数量,进行组间统计学分析与比较.在不同时间点采用HE染色对超声辐照脑缺血局部血管密度进行计数以评价血管新生情况.通过前肢肌力实验、平衡木实验等对超声联合微泡促MSCs移植后脑缺血大鼠的神经功能与行为学进行评分，并进行组间统计学比较，P<0.05为差异具有统计学意义。 结果：超声辐照侧大鼠脑缺血区可见一定程度的硝酸镧与EB外渗，提示大鼠BBB得到靶向和有效开放。荧光显微镜观察发现MSCs主要位于超声辐照侧脑缺血部位的大脑皮层、海马等区域，超声联合微泡介导MSCs移植组荧光细胞数量显著性高于单纯经静脉MSCs移植组（P<0.05）。荧光显微镜记录了MSCs自血管跨BBB进入脑组织的全过程包括粘附贴壁、迁移及跨过血管壁等。诊断超声击破微泡后脑缺血区新生血管密度高于其余各组，神经功能得到有效改善，组间比较差异具有统计学意义，P<0.05。 结论：诊断超声击破自制脂质体微泡经大鼠颅骨辐照能无创有效开放BBB并成功促MSCs颅内靶向转运，在超声生物学效应与MSCs共同作用下促进脑缺血区血管新生及神经功能改善，有望为颅内疾病的安全有效治疗提供新思路。

摘要： 目的：研究旨在探索诊断超声击破自制脂质体微泡无创、靶向开放大鼠血脑屏障(BBB)促MSCs归巢并修复大鼠脑缺血的可行性与有效性. 方法：诊断超声直接经大鼠颅骨辐照,并将实验大鼠分为对照组(脑缺血组)、超声+微泡组、静脉移植MSCs组及超声+微泡+MSCs组.微泡与MSCs经静脉注入,通过伊文斯兰与硝酸镧外渗评价超声联合微泡辐照后大鼠BBB开放情况;荧光示踪定位MSCs经血管跨BBB迁移归巢脑实质全过程,分别在MSCs移植后1,4,7及14天观察并计数各组MSCs数量,进行组间统计学分析与比较.在不同时间点采用HE染色对超声辐照脑缺血局部血管密度进行计数以评价血管新生情况.通过前肢肌力实验、平衡木实验等对超声联合微泡促MSCs移植后脑缺血大鼠的神经功能与行为学进行评分，并进行组间统计学比较，P<0.05为差异具有统计学意义。 结果：超声辐照侧大鼠脑缺血区可见一定程度的硝酸镧与EB外渗，提示大鼠BBB得到靶向和有效开放。荧光显微镜观察发现MSCs主要位于超声辐照侧脑缺血部位的大脑皮层、海马等区域，超声联合微泡介导MSCs移植组荧光细胞数量显著性高于单纯经静脉MSCs移植组（P<0.05）。荧光显微镜记录了MSCs自血管跨BBB进入脑组织的全过程包括粘附贴壁、迁移及跨过血管壁等。诊断超声击破微泡后脑缺血区新生血管密度高于其余各组，神经功能得到有效改善，组间比较差异具有统计学意义，P<0.05。 结论：诊断超声击破自制脂质体微泡经大鼠颅骨辐照能无创有效开放BBB并成功促MSCs颅内靶向转运，在超声生物学效应与MSCs共同作用下促进脑缺血区血管新生及神经功能改善，有望为颅内疾病的安全有效治疗提供新思路。

摘要： 目的：研究旨在探索诊断超声击破自制脂质体微泡无创、靶向开放大鼠血脑屏障(BBB)促MSCs归巢并修复大鼠脑缺血的可行性与有效性. 方法：诊断超声直接经大鼠颅骨辐照,并将实验大鼠分为对照组(脑缺血组)、超声+微泡组、静脉移植MSCs组及超声+微泡+MSCs组.微泡与MSCs经静脉注入,通过伊文斯兰与硝酸镧外渗评价超声联合微泡辐照后大鼠BBB开放情况;荧光示踪定位MSCs经血管跨BBB迁移归巢脑实质全过程,分别在MSCs移植后1,4,7及14天观察并计数各组MSCs数量,进行组间统计学分析与比较.在不同时间点采用HE染色对超声辐照脑缺血局部血管密度进行计数以评价血管新生情况.通过前肢肌力实验、平衡木实验等对超声联合微泡促MSCs移植后脑缺血大鼠的神经功能与行为学进行评分，并进行组间统计学比较，P<0.05为差异具有统计学意义。 结果：超声辐照侧大鼠脑缺血区可见一定程度的硝酸镧与EB外渗，提示大鼠BBB得到靶向和有效开放。荧光显微镜观察发现MSCs主要位于超声辐照侧脑缺血部位的大脑皮层、海马等区域，超声联合微泡介导MSCs移植组荧光细胞数量显著性高于单纯经静脉MSCs移植组（P<0.05）。荧光显微镜记录了MSCs自血管跨BBB进入脑组织的全过程包括粘附贴壁、迁移及跨过血管壁等。诊断超声击破微泡后脑缺血区新生血管密度高于其余各组，神经功能得到有效改善，组间比较差异具有统计学意义，P<0.05。 结论：诊断超声击破自制脂质体微泡经大鼠颅骨辐照能无创有效开放BBB并成功促MSCs颅内靶向转运，在超声生物学效应与MSCs共同作用下促进脑缺血区血管新生及神经功能改善，有望为颅内疾病的安全有效治疗提供新思路。

摘要： 目的：研究旨在探索诊断超声击破自制脂质体微泡无创、靶向开放大鼠血脑屏障(BBB)促MSCs归巢并修复大鼠脑缺血的可行性与有效性. 方法：诊断超声直接经大鼠颅骨辐照,并将实验大鼠分为对照组(脑缺血组)、超声+微泡组、静脉移植MSCs组及超声+微泡+MSCs组.微泡与MSCs经静脉注入,通过伊文斯兰与硝酸镧外渗评价超声联合微泡辐照后大鼠BBB开放情况;荧光示踪定位MSCs经血管跨BBB迁移归巢脑实质全过程,分别在MSCs移植后1,4,7及14天观察并计数各组MSCs数量,进行组间统计学分析与比较.在不同时间点采用HE染色对超声辐照脑缺血局部血管密度进行计数以评价血管新生情况.通过前肢肌力实验、平衡木实验等对超声联合微泡促MSCs移植后脑缺血大鼠的神经功能与行为学进行评分，并进行组间统计学比较，P<0.05为差异具有统计学意义。 结果：超声辐照侧大鼠脑缺血区可见一定程度的硝酸镧与EB外渗，提示大鼠BBB得到靶向和有效开放。荧光显微镜观察发现MSCs主要位于超声辐照侧脑缺血部位的大脑皮层、海马等区域，超声联合微泡介导MSCs移植组荧光细胞数量显著性高于单纯经静脉MSCs移植组（P<0.05）。荧光显微镜记录了MSCs自血管跨BBB进入脑组织的全过程包括粘附贴壁、迁移及跨过血管壁等。诊断超声击破微泡后脑缺血区新生血管密度高于其余各组，神经功能得到有效改善，组间比较差异具有统计学意义，P<0.05。 结论：诊断超声击破自制脂质体微泡经大鼠颅骨辐照能无创有效开放BBB并成功促MSCs颅内靶向转运，在超声生物学效应与MSCs共同作用下促进脑缺血区血管新生及神经功能改善，有望为颅内疾病的安全有效治疗提供新思路。

摘要： 本发明提供一种将多能干细胞分化为瓣膜内皮细胞与瓣膜间质细胞的分化方法，包括以下步骤：准备用于分化的培养瓶或培养皿；准备iPSCs；D0接种细胞；D1‑D4分化；D5‑D6分化；CD144阳性细胞磁珠分选；瓣膜内皮细胞及瓣膜间质细胞的培养与传代。本发明提供的将多能干细胞分化为瓣膜内皮细胞与瓣膜间质细胞的分化方法，可稳定高效的获得大量均一的瓣膜内皮细胞与瓣膜间质细胞，可满足组织工程瓣膜应用于临床对种子细胞的要求，而且本发明方案同样可用于胚胎干细胞的分化，可用于心脏瓣膜疾病发病基质的研究。

摘要： 本发明提供一种从人或动物多能干细胞提取间质性干细胞的方法及药物，该方法包括步骤：A.基于人或动物多能干细胞取样，利用酶类消化液对样品进行消化，其中所述酶类消化液包括中性蛋白酶和Ⅳ型胶原酶；B.在分离的单细胞中加入间质性干细胞条件培养液，进行细胞接种并培养；C.对培养后的细胞进行贴壁纯化处理，并通过磁珠分选得到间质性干细胞。以解决现有技术中存在的间质性干细胞产出率较低、产量小、纯度低、衰老快和细胞批间质量不稳定的问题。

摘要： 本发明中涉及的方法浓缩脐带血中的间质干细胞，将浓缩的间质干细胞使用特定的因子不分化地增殖。

摘要： 本发明提供了人脐带间质干细胞外泌体的分离纯化方法和人脐带间质干细胞外泌体的应用，属于医药技术领域。本发明用无血清培养基培养人脐带间质干细胞，收集上清液，经过离心和超滤浓缩，得到浓缩液移至30％蔗糖重水密度垫上采用蔗糖密度离心进一步纯化，得到人脐带间质干细胞外泌体。本发明通过分离纯化得到人脐带间质干细胞外泌体有效降低免疫反应性，使用时保证剂量可控。所述人脐带间质干细胞外泌体通过提高二型糖尿病动物模型胰岛素信号通路的活化程度，抑制肝糖原合成分解，从而实现葡萄糖代谢稳态的调节，同时提高二型糖尿病动物模型对胰岛素的敏感性及胰岛β细胞的胰岛素分泌功能降低血糖浓度，实现制备治疗二型糖尿病的药物的应用。

摘要： 本发明关于一种人类间质干细胞体外快速增生佐剂，用以解决习知人类间质干细胞培养时细胞扩增效率不佳的问题。本发明的人类间质干细胞培养添加佐剂包括至少一种抗氧化剂、一第二型纤维母细胞生长因子（FGF‑2）。借此，将前述佐剂加入包含人类间质干细胞的培养基中，于常氧环境（约21%氧分压）培养后，出现细胞快速分裂、细胞周期合成期（S phase）比例提高、减少老化及提高分化潜能等现象，使本发明不仅可快速地扩增人类间质干细胞并获取生长因子，且仍可保有干细胞多功能性的特征，作为人类间质干细胞的培养及扩增的用途。

摘要： 本发明提供了人脐带间质干细胞外泌体的分离纯化方法和人脐带间质干细胞外泌体的应用，属于医药技术领域。本发明用无血清培养基培养人脐带间质干细胞，收集上清液，经过离心和超滤浓缩，得到浓缩液移至30％蔗糖重水密度垫上采用蔗糖密度离心进一步纯化，得到人脐带间质干细胞外泌体。本发明通过分离纯化得到人脐带间质干细胞外泌体有效降低免疫反应性，使用时保证剂量可控。所述人脐带间质干细胞外泌体通过提高二型糖尿病动物模型胰岛素信号通路的活化程度，抑制肝糖原合成分解，从而实现葡萄糖代谢稳态的调节，同时提高二型糖尿病动物模型对胰岛素的敏感性及胰岛β细胞的胰岛素分泌功能降低血糖浓度，实现制备治疗二型糖尿病的药物的应用。

摘要： 本发明中涉及的方法浓缩脐带血中的间质干细胞，将浓缩的间质干细胞使用特定的因子不分化地增殖。

摘要： 本发明关于一种人类间质干细胞体外快速增生佐剂，用以解决习知人类间质干细胞培养时细胞扩增效率不佳的问题。本发明的人类间质干细胞培养添加佐剂包括至少一种抗氧化剂、一第二型纤维母细胞生长因子（FGF-2）。借此，将前述佐剂加入包含人类间质干细胞的培养基中，于常氧环境（约21%氧分压）培养后，出现细胞快速分裂、细胞周期合成期（Sphase）比例提高、减少老化及提高分化潜能等现象，使本发明不仅可快速地扩增人类间质干细胞并获取生长因子，且仍可保有干细胞多功能性的特征，作为人类间质干细胞的培养及扩增的用途。

摘要： 本发明属于干细胞与免疫学领域，涉及间质干细胞与造血干细胞联合移植促进造血重建和免疫重建的应用。本发明可用于大鼠和病人的造血重建和免疫重建时，包括以下步骤：A、间质干细胞的分离、鉴定与传代扩增；B、间质干细胞与同种异体造血干细胞联合移植；C、移植后造血重建、免疫重建及GVHD的检测。本发明不仅明显促进骨髓移植(BMT)后造血重建和免疫重建；也可降低GVHD的发生率及其严重程度，从而极大地提高造血干细胞移植的治疗效果。

摘要： 一种从人间质干细胞制备造血干细胞的方法。该方法包括以下步骤：(1)提供没有造血干/祖细胞污染的人间质干细胞；(2)提供胎肝条件培养液；(3)将人间质干细胞培养于胎肝条件培养液7～14天，人间质干细胞诱导分化为造血干/祖细胞。本发明用胎肝条件培养液诱导间质干细胞分化为造血干/祖细胞，将会部分或全部代替现行的骨髓移植或脐血移植的造血干细胞数量不足，加上间质干细胞免疫原性低，导致的移植后免疫反应弱甚至没有，将会给为造血干细胞移植治疗带来巨大的改观。另外间质干细胞配合骨髓或脐血移植时具有降低移植物抗宿主反应，促进干细胞定居骨髓，促进细胞免疫功能和血小板恢复的作用。