巨噬细胞

摘要： 背景:介孔生物活性玻璃纳米颗粒与甲基丙烯酸明胶合成的仿生骨膜可在骨缺损局部释放钙硅磷离子,促进成骨。其中硅离子还有调控巨噬细胞极化表型的作用,因此仿生骨膜对骨缺损局部炎症微环境的影响仍需探索。目的:通过体、内外实验探讨无机离子仿生骨膜调控炎症微环境与促进骨修复之间的联系。方法:①体外实验:将介孔生物活性玻璃纳米颗粒与甲基丙烯酸明胶共混后光交联得到无机离子仿生骨膜,通过电感耦合等离子体光谱检测仿生骨膜浸泡于人体模拟体液中7 d内的Si^(4+)释放。将骨髓间充质干细胞分别接种于甲基丙烯酸明胶水凝胶与仿生骨膜复合水凝胶中,以单纯培养的细胞为对照,进行活死荧光染色与碱性磷酸酶染色。将骨巨噬细胞分别接种于甲基丙烯酸明胶水凝胶与仿生骨膜复合水凝胶中,以单纯培养的细胞为对照,进行一氧化氮合成酶(巨噬细胞M1表型)和CD206(巨噬细胞M2表型)免疫荧光染色。②体内实验:建立大鼠颅骨缺损模型,将甲基丙烯酸明胶水凝胶和仿生骨膜复合水凝胶分别植入骨缺损处,术后7 d,通过RT-PCR检测骨缺损局部巨噬细胞表型;术后8周,通过骨缺损处苏木精-伊红染色检测仿生骨膜的成骨性能。结果与结论:①体外实验:仿生骨膜24 h内释放Si^(4+)达到最大浓度,在之后6 d内缓慢释放。共培养3 d后的活死荧光染色显示,各组干细胞生长良好,有较好的细胞活性,无明显死亡。共培养7 d后的免疫荧光染色显示,仿生骨膜组巨噬细胞多为M2型,甲基丙烯酸明胶水凝胶组和对照组多为M1型。共培养7 d后的碱性磷酸酶染色显示,仿生骨膜组染色强于甲基丙烯酸明胶水凝胶组和对照组。②体内实验:RT-PCR检测结果显示,仿生骨膜组骨缺损局部巨噬细胞大多呈M2型,空白组和GelMA水凝胶组大多呈M1型。苏木精-伊红染色显示,仿生骨膜组骨缺损处新生骨多于空白组和甲基丙烯酸明胶水凝胶组。③结果表明:无机离子仿生骨膜通过Si^(4+)释放促进了炎症局部的巨噬细胞M2极化,可抑制炎症、促进成骨。

摘要： 背景:目前,缺乏有效的治疗方法促进糖尿病患者的皮肤创面愈合。人脐带间充质干细胞已被证明对皮肤再生具有多种治疗作用,可注射水凝胶具有良好的生物相容性和可调节性,可以提高干细胞治疗的效果。目的:以负载人脐带间充质干细胞的水凝胶为切入点,观察其对小鼠糖尿病皮肤创面的疗效,并探索可能的作用机制。方法:①链脲佐菌素溶液连续腹腔注射5 d构建C57BL/6J小鼠糖尿病模型,经尾静脉采血测血糖值评估模型是否建立成功。②造模成功后,利用打孔器建立小鼠背部皮肤损伤模型,水凝胶组给予纯水凝胶敷胶治疗,复合水凝胶组给予负载有人脐带间充质干细胞的水凝胶治疗,对照组给予等量生理盐水治疗,治疗第7,14天观察创面愈合情况。结果与结论:①敷胶后的14 d内,水凝胶组、复合水凝胶组小鼠皮肤创面面积明显低于对照组(P<0.05),复合水凝胶组的皮肤创面面积明显低于水凝胶组(P<0.05);②苏木精-伊红染色结果显示:复合水凝胶组创面肉芽组织新生率明显高于水凝胶组和对照组(P<0.05);③Masson染色结果显示:与对照组和水凝胶组相比,复合水凝胶组创面组织胶原沉积率明显增加(P<0.05);④免疫组化CD31染色结果显示:复合水凝胶组创面组织中新生微血管数量明显高于水凝胶组和对照组(P<0.05);⑤免疫组化CD45染色结果显示:与对照组和水凝胶组相比,复合水凝胶组创面组织中炎症面积明显减少(P<0.05);⑥免疫荧光染色和qRT-PCR结果显示:与对照组和水凝胶组相比,复合水凝胶组创面组织中M2巨噬细胞及其标志性因子白细胞介素10表达显著升高,且M1巨噬细胞及其标志性因子白细胞介素6表达明显降低(P<0.05);⑦上述结果提示:负载人脐带间充质干细胞的氯化壳聚糖-β-甘油磷酸钠复合水凝胶通过促进糖尿病创面肉芽组织和微血管形成,减轻炎症反应,从而促进创面愈合。

摘要： 背景:近年来通过生物支架材料修复组织缺损的方式被学者们广泛关注,作为外来植入物植入体内后引发的机体炎症反应对材料与组织的整合过程至关重要,其中巨噬细胞是炎症反应的重要参与者与调节者。因此了解生物支架与巨噬细胞之间的相互影响十分必要,将对今后设计新型支架材料具有重要的指导意义。目的:对生物支架与巨噬细胞之间的相互作用以及二者之间动态平衡的调控相关研究进行综述。方法:利用PubMed、Web of Science和中国知网数据库检索1971-2021年发表的相关文献。英文检索词:“macrophage polarization,M2,foreignbody,tissue engineering,scaffolds,mediation,bone,degradation”;中文检索词:“巨噬细胞极化、M2、异物反应、组织工程、支架、调控、骨、降解”。对筛选出该领域最新研究进展的76篇文献进行归纳分析。结果与结论:①免疫反应在组织再生与修复中发挥不可或缺的作用。②巨噬细胞是炎性反应的重要调节剂,它会根据不同微环境刺激极化为如促炎型或抗炎型等不同表型。一方面在炎性反应的不同阶段巨噬细胞极化的失调都将阻碍生物支架材料的整合与组织修复;促炎型巨噬细胞在生物材料植入早期的高度表达有助于材料的整合,而在炎症后期生物材料行使功能的过程中,促炎型巨噬细胞的持续高表达会阻碍新骨形成。另一方面,生物支架材料的性质(组成成分、硬度、粗糙度、表面几何形状、亲水性等)会影响巨噬细胞极化方向,如调节支架表面形貌可以在不改变支架理想理化性能的基础上,有效促进巨噬细胞向抗炎表型的巨噬细胞极化,促进组织修复。③目前,通过改变支架组成成分、制备方法、调节物理化学性能等可影响生物支架与巨噬细胞的相互作用,但如何高效并按照应用需求调控这一动态平衡,仍是今后重点关注的方向,尤其是如何将体外基础研究的理想结果成功转化到体内实际运用方面还在进一步探索。

摘要： 背景:脊髓缺血再灌注损伤后炎性微环境的变化影响着损伤修复和预后。目的:对脊髓缺血再灌注损伤后炎性微环境研究进展进行综述。方法:以“spinal cord ischemia-reperfusion,inflammaion,Microglia,Astrocytes,Macrophages,Crosstalk”为英文检索词,以“脊髓缺血再灌注损伤,炎症,小胶质细胞,星形胶质细胞,巨噬细胞,细胞交互”为中文检索词,检索发表在PubMed、CNKI、万方数据库的相关文献,最终纳入42篇文献进行综述分析。结果与结论:免疫炎性微环境的变化对脊髓缺血再灌注损伤后神经细胞损伤和修复具有调控作用,如小胶质细胞通过活化为M1/M2表型来调控炎症反应抵御传染源、清除凋亡和受损细胞、重塑不适当的神经连接从而帮助神经系统恢复稳态;星形胶质细胞在炎症因子的刺激下通过活化为A1/A2表型调控免疫过程来维持中枢神经系统稳态和神经元功能;以及巨噬细胞通过活化为M1/M2型来调控免疫过程修复损伤的脊髓组织,它们互相影响着彼此,如小胶质细胞和星形胶质细胞彼此也相互影响,如脊髓损伤时,小胶质细胞最先活化并释放炎症因子诱导星形胶质细胞激活,释放相应的细胞因子、趋化因子、Ca2+等来调节小胶质细胞的表型和功能,通过维持免疫炎性微环境稳态才是脊髓缺血再灌注损伤治疗的关键。

摘要： 背景:随着机械信号在骨骼中的作用研究逐渐增多,作为力学敏感因子的YAP/TAZ也逐渐受到大众关注。现有研究发现YAP/TAZ可能在骨形成的过程中作为一个重要介质参与其中,但具体机制尚不清楚。目的:对YAP/TAZ参与骨形成的最新研究进展进行综述。方法:第一作者以“Hippo pathway,YAP/TAZ,Bone,Osteogenesis”为英文检索词,以“Hippo信号通路、YAP/TAZ、骨骼、成骨”为中文检索词,检索PubMed数据库和中国知网2016年至2022年3月发表的相关文献,对筛选出的文献进行归纳分析。最终纳入56篇相关文献进行综述。结果与结论:①YAP/TAZ作为Hippo通路的核心因子,在其功能调控上具有特殊性,除了在分子水平上可以调控其活性,细胞微环境的改变,如细胞浓度、细胞形状和细胞外基质的刚度也可以促使其活性改变从而发挥不同功能作用。②YAP/TAZ参与成骨信号传导,并且调控也受细胞微环境影响。过表达或沉默细胞中的YAP/TAZ会促使或抑制成骨信号的传导,从而改变细胞分化结局。③YAP/TAZ参与骨组织细胞的成骨过程,并对不同类型的骨组织细胞有不同功能。但对于过表达或沉默YAP/TAZ方法不同,选择观察细胞种属类型差异较大,结果难以统一量化。④动物实验中证实YAP/TAZ对正常骨骼形态及颌面部形态的正常发育有着至关重要的作用,并且在不同成骨分化阶段有着不同的功能。然而对于实验动物敲除YAP/TAZ条件基因不统一、观察时机不一致导致实验成果难以相互比较。YAP/TAZ在骨形成中有着重要地位,但对于其作用机制还有待深入研究,期待后续有学者深入探索其作用机制,并利用其特性在骨性疾病中发挥作用。

摘要： 背景:牙周炎是发生在牙周支持组织的炎症,具体表现为牙龈的炎症及牙槽骨吸收。巨噬细胞可通过M1,M2极化在牙周炎发生发展中发挥作用,影响牙周炎的病情进展。目的:通过对巨噬细胞极化与牙周炎的关系及其相关机制进行综述,为牙周炎的临床治疗提供思路。方法:第一作者利用Pub Med和中国知网数据库检索1991-2022年发表的相关文献,以“macrophage polarization,M1/M2 macrophage”等为英文检索词,以“巨噬细胞极化、M1/M2巨噬细胞、牙周炎”等为中文检索词,阅读每篇文献的文题、摘要进行初筛,最终筛选出97篇文献进行归纳分析。结果与结论:①巨噬细胞作为人体固有免疫细胞,在炎症发生发展过程中起重要作用。巨噬细胞在环境刺激下会发生极化,且巨噬细胞极化是一个复杂的过程。②JAK/STAT、TLRs/核转录因子κB、PI3K/Akt等信号通路,炎症因子如肿瘤坏死因子α、干扰素γ、白细胞介素4和白细胞介素13等,以及表观遗传学等均可影响其极化。③巨噬细胞M1型极化促进炎症进展,巨噬细胞M2型极化发挥抗炎作用。④不同极化类型的巨噬细胞通过各种信号通路及分泌炎性因子等在牙周炎疾病过程中发挥促炎或抗炎作用,且通过多种途径影响骨吸收与骨形成,进而影响牙周炎的进展。⑤巨噬细胞通过相关机制进行极化,极化后的巨噬细胞又可以在牙周炎过程中发挥抗炎或促炎作用,对牙周炎进展产生影响。⑥研究巨噬细胞极化在牙周炎发病过程中的作用及机制对牙周炎治疗有重要意义,但目前对于巨噬细胞极化机制不完全明确,因此发现其极化的潜在机制,并将其与牙周炎治疗结合,促进牙周炎过程中巨噬细胞向M2型转化及其所占比例或者抑制或减少M1型巨噬细胞表达,对未来牙周炎治疗有重要意义;将表观遗传与巨噬细胞极化及牙周炎联合,从基因和蛋白水平上治疗牙周炎,可能成为临床上治疗牙周疾病的一种有效的方法。

摘要： 随着对生物材料、免疫系统与骨骼系统关系研究的不断深入,依据骨免疫学,通过合理设计材料的性质可调节植入材料引起的宿主反应,具有免疫调节性骨组织工程支架可诱导巨噬细胞及时从促炎M1型转换为抗炎M2型,促进骨整合。水凝胶在骨组织工程中备受关注,水凝胶组成的不同,包括来源、组分含量及分子量、偶联连接蛋白、使用交联剂等均会影响免疫反应,对水凝胶的理化性质进行改性亦可影响免疫反应,如软光刻等处理水凝胶形成的不同表面微形貌,加入酶敏感序列、酯键及使用动态共价化学等避免水凝胶降解过快或过慢,添加制孔剂、3D打印等制备具有互通大孔的水凝胶,柔软可注射水凝胶等,可减少促炎因子表达,促进巨噬细胞分化为M2型及减少异物反应,促进骨再生。然而骨免疫反应机制尚未阐明,需要进一步研究不同理化性质的水凝胶对免疫调节的具体机制。

摘要： 背景:机械敏感通道蛋白Piezo1是机械应力刺激的重要靶蛋白,能将物理的机械力转化成生物电信号,从而调控骨形成与骨吸收,在抗骨质疏松中发挥着重要作用。目的:总结机械应力刺激在抗骨质疏松中的作用机制、Piezo1分子生物学研究进程及Piezo1在骨质疏松中的研究进展。方法:使用计算机在中国知网、万方、维普、PubMed及Web of Science数据库进行文献检索,中文检索词为“骨质疏松、Piezo1、机械应力、骨”,英文检索词为“osteoporosis,Piezo1,mechanical,osteoblast,osteoclast,chondrocyte,bone”,根据纳排标准对文献进行筛选,最终纳入65篇文献进行综述。结果与结论:①机械敏感通道蛋白Piezo1的蛋白结构在冷冻电镜技术突破中不断得到新的解析,目前研究表明Piezo1蛋白基于三叶螺旋桨状三维构造主体,在静默和应激状态下可表现出不同的结构变化;②Piezo1介导的机械应力刺激能通过调控成骨细胞、软骨细胞、内皮细胞、肠道细胞的功能影响骨形成,同时调控破骨细胞的功能影响骨吸收,进而在抗骨质疏松中发挥重要作用;③Piezo1介导的机械应力刺激主要通过Wnt/β-catenin信号通路调控成骨细胞功能影响骨形成;而其对破骨细胞功能的调节,因机械力的类型、大小、作用时间的不同而对骨吸收有双向调节作用,需进一步量化的研究;④未来基于Piezo1在骨质疏松中的临床研究、骨质疏松动物模型研究、破骨细胞的相关机制及新型复合材料研究仍需更多的关注。

摘要： [目的]探究髓系细胞血管紧张素1型受体(Mye AT1R)在盐敏感性高血压小鼠血管胰岛素抵抗和血管损伤中的作用。[方法]采用左肾切除和去氧皮质酮乙酸酯(DOCA)缓释药片包埋术将C57BL/6J雄性小鼠(野生型,WT)和Mye AT1R敲除小鼠(Mye AT1R^(-/-))诱导为盐敏感性高血压小鼠模型,随机分为WT组、DOCA盐敏感性高血压组(简称DOCA组)、Mye AT1R^(-/-)组和Mye AT1R^(-/-)/DOCA组,每组8只。采用尾套袖法测量小鼠收缩压,HE染色观察主动脉壁厚度,免疫荧光检测主动脉F4/80(单核/巨噬细胞标志物),RT-PCR和Western blot检测AT1R、促炎细胞因子和胰岛素信号通路分子的mRNA和蛋白表达,离体血管灌流系统测定乙酰胆碱和胰岛素介导的内皮依赖性血管舒张功能。[结果]与WT组相比,DOCA组收缩压升高37%,主动脉壁厚度增加57%,乙酰胆碱和胰岛素介导的内皮依赖性血管舒张功能分别下降32%和36%(P<0.05),主动脉F4/80阳性细胞数量增多195%,单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、磷酸化c-Jun氨基端激酶(p-JNK)蛋白表达升高42%、45%、32%,胰岛素蛋白激酶B(Akt)/内皮型一氧化氮合酶(eNOS)信号通路受损,p-Akt和p-eNOS的蛋白表达水平下降均为36%(P<0.05)。敲除Mye AT1R,主动脉壁厚度降低14%,F4/80阳性细胞数减少44%,乙酰胆碱和胰岛素介导的内皮依赖性血管舒张功能增加21%和17%,MCP-1、TNF-α和p-JNK蛋白表达水平降低52%、41%和17%,可修复受损的胰岛素PI3K/Akt/eNOS信号通路,p-Akt和p-eNOS的蛋白表达水平升高48%和42%(P<0.05),但收缩压没有明显降低。[结论]敲除Mye AT1R可减轻盐敏感性高血压引起的血管胰岛素抵抗和血管损伤,其机制可能与抑制巨噬细胞在血管壁浸润引起的血管炎症有关。

摘要： 动脉粥样硬化(As)作为泛血管疾病的慢性动脉壁炎症反应,是导致心脑血管疾病的主要原因之一。目前,越来越多研究表明环状RNA(circRNA)可介导微小RNA(microRNA,miRNA)调控靶基因信使RNA(mRNA)的表达,通过复杂信号传导通路调控内皮细胞(EC)、血管平滑肌细胞(VSMC)和巨噬细胞的增殖、迁移、分化、凋亡及炎症等过程,参与As形成与发展的病理生理过程。文章就circRNA/miRNA/mRNA的生物学功能及其对As的影响进行综合分析,以期为动脉粥样硬化性疾病的诊治提供新思路。

摘要： 目的：观察髓样细胞表达的触发受体1(TREM-1)对脂多糖(LPS)应激下巨噬细胞自噬相关基因表达的影响. 方法：观察LPS应激下的巨噬细胞TREM-1蛋白的表达.分别选用TREM-1的激动剂(MAB1187)和TREM-1的拮抗剂(LR12)作用于巨噬细胞,利用qPCR检测巨噬细胞自噬相关基因ATG7、ATG5、ATG12及自噬标志蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)mRNA的表达;采用Western Blot检测巨噬细胞TREM-1、LC3Ⅱ/Ⅰ、ATG7蛋白的表达;采用免疫荧光检测在LPS应激与TREM-1激活的情况下,巨噬细胞的自噬标志蛋白LC3表达. 结果：LPS(400ng/mL、1000ng/mL)应激下巨噬细胞TREM-1蛋白表达明显增加;LPS(1000ng/mL)作用巨噬细胞24h,巨噬细胞TREM-1蛋白表达达到峰值.LPS应激的巨噬细胞自噬基因ATG7、ATG5、ATG12及自噬标志分子LC3mRNA表达均降低;当给予TREM-1拮抗剂后,巨噬细胞的ATG7、ATG5、ATG12、LC3mRNA表达均升高,而采用TREM-1激动剂后,自噬基因表达被抑制.western Blot检测结果显示,TREM-1可抑制LPS应激下巨噬细胞LC3Ⅱ/Ⅰ、ATG7蛋白的表达.免疫荧光检测表明TREM-1激动剂可使巨噬细胞胞内的LC3蛋白表达量减少. 结论：巨噬细胞胞膜上TREM-1激活后,可使巨噬细胞自噬减弱,提示LPS应激下的巨噬细胞TREM-1可能通过抑制巨噬细胞的正常自噬从而发挥炎症放大作用.

摘要： 目的：探讨抑制NLRP3炎症小体活化对二氧化硅粉尘致巨噬细胞炎性反应的影响. 方法：大鼠肺泡巨噬细胞为细胞模型,分为空白对照组、染尘组、NLRP3抑制剂组、木犀草素组.染尘组加入50mg/L的矽尘,NLRP3抑制剂组加入50mg/L的矽尘和20μmol/L的NLRP3抑制剂,木犀草素组加入50mg/L的矽尘和20μmol/L的木犀草素.培养12h,24h,48h收集样本,MTT法检测细胞生长情况,检测肺组织中IL-1β、IL-18、TGF-β1、NLRP3、Caspase-1表达情况. 结果：NLRP3抑制剂组及木犀草素组的染尘巨噬细胞三个时间点的存活率高于染尘组(P＜0.05),在12h和24h时木犀草素组高于抑制剂组(P＜0.05).与染尘组相比,抑制剂组与木犀草素组的IL-1β、IL-18、TGF-β1、NLRP3、Caspase-1表达降低(P＜0.05).与抑制剂组相比,三个时间点木犀草素组IL-1β水平均降低,而IL-18、TGF-β1水平只有在48h时降低(P＜0.05),NLRP3和Caspase-1表达水平只有在24h时降低(P＜0.05). 结论：抑制NLRP3炎症小体活化可以降低SiO2粉尘引起的巨噬细胞炎性反应.木犀草素也具有同样的作用,提示其可能与NLRP3炎症小体抑制剂有相似作用机制.

摘要： 目的：分离纯化猪苓多糖,观察猪苓多糖对人巨噬细胞的形态和免疫功能的影响,并进行机制分析. 方法：甲醇脱脂、水提醇沉提取猪苓粗多糖,经过滤、Savage法去蛋白、冷冻干燥、DEAE-Cellulose及Sephadex G-100柱层析分离猪苓均一多糖(PPS);Ficoll法分离新生儿脐带血PBMC,并通过CD14磁珠分选及M-CSF诱导入M2型巨噬细胞;观察猪苓多糖对M2形态的影响;FACS检测细胞表型(CD14、CD68、CD86及CD206)、主要组织相容性复合体2(MHCⅡ)与程序性细胞死亡蛋白1(PD1)表达量;ELISA分析细胞因子[白细胞介素(IL)-1β、IL-2、IL-6、IL-8、IL-10、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素γ(IFN-γ)、转化生长因子-β(TGF-β)及重组人巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)]含量;检测猪苓多糖对M2和肿瘤细胞共培养的杀伤能力;Western bolt分析TLR2、TLR4及NF-κB蛋白表达;RT-PCR测定层黏连蛋白(LN)、纤维黏连蛋白(FN)、Ⅲ型胶原蛋白(COLⅢ)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和巨噬细胞表面分子抗原(MAC-1)mRNA水平. 结果：分离纯化得到PPS;PPS影响巨噬细胞的黏附和诱变细胞形态;极化M1表型,降低PD1表达(P＜0.01),升高MHCⅡ分子表达(P＜0.05,P＜0.01);促进细胞因子IL-1β、IL-6、1L-8、IL-10及TNF-α分泌(P＜0.01);增强M2巨噬细胞对肿瘤杀伤的能力(P＜0.05);升高TLR2、TLR4和NF-κB蛋白的表达(P＜0.05,P＜0.01);降低FN、COLⅢ和ICMA-1转录水平(P＜0.05,P＜0.01). 结论：PPS抑制M2巨噬细胞的黏附和伪足生成,且具有显著的免疫增强作用,其机制与激活TLR2/TLR4-NF-κB信号通路、下调黏附蛋白和因子有关.

摘要： 为了探究自噬作用对布鲁氏菌(Brucella)在巨噬细胞(MΦ)内增殖活力的影响,本研究首先将体外培养的MΦ细胞分组,分别采用自噬激活剂-雷帕霉素(Ra)或抑制剂-3-MA处理细胞,并在不同处理的细胞组中接种表达绿色荧光的重组猪种布鲁氏菌(rB.suis-GFP),在接种后0.5～24h后,一方面通过细胞中LC3-Ⅱ含量及MΦ内B.suis数量的测定,另一方面通过激光共聚焦显微镜观察LC3-Ⅱ与B.suis共定位情况.结果显示,感染B.suis后0.5h,MΦ即可发生自噬作用,并且Ra+MΦ+B.suis组LC3-Ⅱ含量显著高于其他组,显示B.suis的感染能够促进MΦ内LC3-Ⅱ的形成,增强MΦ的自噬作用;另一方面,Ra+MΦ+B.suis组胞内B.suis数量均显著高于3-MA+MΦ+B.suis组与MΦ+B.suis组,显示自噬作用能够促进B.suis在MΦ内的增殖;但随着胞内B.suis数量的增加,各组LC3-Ⅱ的水平却逐渐下降,这表明MΦ感染B.suis数量达饱和后,MΦ虽然启动自噬作用而杀灭了部分B.suis,但却不能完全抑制B.suis在MΦ内大量增殖.

摘要： 巨噬细胞(Macrophage,MΦ)是布鲁氏菌(Brucella,Bru)的主要宿主细胞,为了探明Bru感染与MΦ泛素-蛋白酶体功能之间的关系,本研究在应用蛋白酶体抑制剂Lactacystin与促进剂IFN-γ的基础上,对MΦ感染Bru后细胞上清中泛素、蛋白酶体及胞内Bru数量进行了检测.结果显示,IFN-γ与Lactacystin对MΦ泛素的表达均有明显的促进作用,且IFN-γ效果显著优于Lactacystin;其次IFN-γ有效促进了MΦ蛋白酶体的表达,而Lactacystin显著抑制了MΦ蛋白酶体的表达.在此基础上,将Bru感染不同状态的MΦ,在0.5h～24h分别进行胞内Bru计数,研究表明,一方面Bru的感染促进了MΦ泛素及蛋白酶体的表达;另一方面,泛素蛋白酶体系统功能的增强,显著降低了Bru的早期感染,但对于Bru感染中后期作用不明显,而感染后期抑制MΦ蛋白酶体功能,却可显著降低Bru的胞内增殖能力.

摘要： 目的：研究不同亚型巨噬细胞对内皮细胞凋亡的影响及通心络的干预作用. 方法：实验分为5组：对照组、PMA组、M2组、M1组、通心络组.采用PMA(5μg·L-1)分别联合IL-4(100μg-L-1)、LPS(200μg·L-1)诱导THP-1细胞分别向M2、M1型巨噬细胞极化并给以通心络(TXL,300mg?L-1)进行干预,采用酶联免疫吸附方法检测其标志分子白介素-10(interleukin-10,IL-10)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)的表达.取巨噬细胞培养上清作为条件培养基培养内皮细胞,采用流式细胞仪检测内皮细胞凋亡率、蛋白免疫印迹方法检测凋亡相关蛋白(caspase3、bax、bcl-2)的表达. 结果：与正常组比较,M2组细胞培养上清中IL-10水平升高(P＜0.01);M1组细胞培养上清中IL-10水平明显降低,IL-6、TNF-α水平明显升高(P＜0.01);与M1组比较,通心络组细胞培养上清中IL-10水平升高,IL-6、TNF-α水平下降(P＜0.01).与M2组内皮细胞比较,M1型巨噬细胞细胞培养的内皮细胞凋亡率显著升高(P＜0.01),促凋亡蛋白caspase3、bax的表达显著升高(P＜0.05,P＜0.01),抗凋亡蛋白bcl-2的表达降低(P＜0.01),与M1组比较,通心络组内皮细胞的凋亡率显著降低(P＜0.01),促凋亡蛋白caspase3、bax的表达降低(P＜0.05,P＜0.01),抗凋亡蛋白bcl-2的表达升高(P＜0.01). 结论：通心络可以抑制巨噬细胞向M1型极化.M2型巨噬细胞培养上清对内皮细胞的凋亡无明显影响,M1型巨噬细胞培养上清可以促进内皮细胞凋亡;通心络预培养的M1型巨噬细胞培养上清培养的内皮细胞凋亡率显著下降.

摘要： 目的：研究通心络对巨噬细胞向M2、M1型极化的影响及其对Notch信号通路的作用. 方法：采用PMA分别联合IL-4、LPS诱导THP-1细胞分别向M2、M1型巨噬细胞极化并给以通心络进行干预,检测其标志分子IL-10、TNF-α、IL-6的表达及巨噬细胞极化相关Notch信号通路蛋白的表达. 结果：M2组细胞培养上清中IL-10水平升高,IL-6、TNF-α的水平无统计学差异;M1组细胞培养上清中IL-10水平明显降低,IL-6、TNF-α水平明显升高;通心络组细胞培养上清中IL-10水平升高,IL-6、TNF-oα水平下降.M2组细胞active Notch-1、DLL4、Hes-1蛋白表达与对照组比较无统计学差异,M1组细胞active Notch-1、DLL4、Hes-1蛋白表达明显升高,通心络组细胞active Notch-1、DLI4、Hes-1蛋白表达显著降低,各组Notch-1蛋白表达无统计学差异. 结论：通心络可抑制巨噬细胞向M1型极化,其机制可能与抑制Notch-1信号通路活化有关.

摘要： 目的：研究食管癌细胞外泌体中miR-21-5p对巨噬细胞的极化作用,并探讨其对食管癌转移的影响,为食管癌的早期发生发展寻找生物标志物,提供基础研究依据. 方法：应用Western blot检测外泌体标志蛋白的表达;应用Cy3荧光标记miR-21-5p验证巨噬细胞对外泌体中miRNA的摄取;建立食管癌细胞与巨噬细胞的共培养体系,通过qRT-PCR验证miR-21-5p及M1、M2型巨噬细胞标志物表达水平;应用共培养后巨噬细胞培养上清作用与新的食管癌细胞,分别采用transwell穿膜法,Western blot检测食管癌细胞的迁移、侵袭能力及EMT相关分子表达. 结果：诱导人急性单核白血病细胞THP-1贴壁形成巨噬细胞;共聚焦显微镜拍摄结果显示,Cy3标记miR-21-5p可以通过外泌体进入受体细胞中;qRT-PCR结果显示共培养后,巨噬细胞(受体细胞)中miR-21-5p表达水平升高,且M2型巨噬细胞标志物表达升高(P＜0.05);巨噬细胞上清液作用于EC109后,发现细胞的迁移、侵袭能力与对照组相比提高(P＜0.05),EMT相关分子检测结果,实验组E-cadherin蛋白表达水平降低,N-cadherin、snail蛋白表达水平升高. 结论：肿瘤细胞分泌外泌体中,高峰度表达的miR-21-5p可诱导巨噬细胞M2型极化,进而促进食管癌细胞的转移,可作为食管癌转移的早期生物标志物.

摘要： 布鲁氏菌是可以感染包括人类在内的多种哺乳动物的胞内病原,对发展中国家的畜牧业和人类健康构成威胁.迄今为止,在布鲁氏菌中已经鉴定出许多与细胞内运输和增殖有关的基因,然而,布鲁氏菌是如何使用转录后精细的基因表达调控从而适应环境的变化并逃避宿主细胞抵御尚不完全清楚.细菌sRNAs在转录后调控中起着重要作用,这在许多细菌中已经得到证实,但是sRNAs在布鲁氏菌中的作用仍然不明确.在本研究中,在布鲁氏菌中鉴定了多个sRNAs,发现,当过表达这些sRNAs后,其中一个sRNA,初步称为BASI74,可以导致布鲁氏菌在巨噬细胞内毒力改变.将牛种布鲁氏菌2308培养于酸性培养基中,其BASI74表达量增加.此外,BASI74影响布鲁氏菌细胞在最小营养培养基和缺铁培养基中的生长率.使用双质粒报告系统,鉴定了四个基因可能为BASI74的靶标.其中一个靶基因BABI1154被预测编码胞嘧啶-N4特异性DNA-甲基转移酶,该酶保护布鲁氏菌细胞DNA不受限制性内切酶的影响.这些结果提示BASRCⅠ74可能是通过调控环境应激相关基因或影响限制-修饰系统而对牛种布鲁氏菌在巨噬细胞内的毒力发挥调控作用.本研究为揭示sRNA相关的转录后调控及布鲁氏菌致病机理的解读提供了重要的依据.

摘要： 目的：本试验旨在细胞水平上探究丹参多糖的抗炎作用. 方法：MTT测定丹参多糖对RAW264.7细胞活性的影响,ELISA法测定丹参多糖对RAW264.7分泌TNF-α,IL-6,IL-1β的影响,Griss法测定丹参多糖对RAW264.7分泌NO的影响.RT-PCR测定相应细胞因子的mRNA的表达,Western Bolt测定丹参多糖对RAW264.7中NF-κB通路表达的影响. 结果：LPS刺激小鼠巨噬细胞RAW264.7能显著性升高TNF-α,IL-6,IL-1β,NO的分泌量及其mRNA的表达量(P＜0.01);并能提高小鼠巨噬细胞RAW264.7NF-κB通路中p65和IκBα的蛋白磷酸化水平(P＜0.01).而丹参多糖各剂量组(2,1,0.5mg/ml)均对细胞活性无毒副作用.并能显著性抑制LPS诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7中TNF-α,IL-6,IL-1β,NO的分泌量及其mRNA表达量的升高(P＜0.01或P＜0.05).与LPS组相比,丹参多糖亦能显著性降低小鼠巨噬细胞RAW264.7NF-κB通路中p65和IκBα的蛋白磷酸化水平(P＜0.01). 结论：丹参多糖具有较好的抗炎作用,其机制可能是通过调节炎症通路NF-κB中p65和IκBα的蛋白磷酸化水平,进而抑制促炎因子的表达来达到抗炎的作用.

摘要： 本发明提供了一种巨噬细胞专属嵌合抗原受体、表达该受体的可控极化单核/巨噬细胞及其制备方法和应用，涉及生物技术领域。本发明提供了一种嵌合抗原受体，包括依次连接的胞外抗原结合域、跨膜结构域和胞内激活结构域，其中胞外抗原结合域包括信号肽和/或scFv，能够异性识别GBM特异表达的细胞膜表面蛋白EGFRvIII；跨膜结构域包括CD8α，链接胞外抗原结合域和胞内激活结构域；胞内激活结构域包括TIR、CD3ZETA或GM‑CSFRα/β，促进巨噬细胞向M1型极化，将本发明的嵌合抗原受体引入到巨噬细胞中，赋予了该巨噬细胞对GBM的靶向杀伤作用，有效的促进并维持其M1极化状态。

摘要： 本发明提供了一种嵌合性抗原受体及表达其的巨噬细胞、调节巨噬细胞极化的方法和应用，涉及生物技术领域。该嵌合性抗原受体的胞内结构域中含有IFN‑γ受体，表达该嵌合性抗原受体的免疫细胞对IFN‑γ的响应能力增强。表达该嵌合性抗原受体的巨噬细胞可以相对较长时间保持M1型状态，增强肿瘤细胞抗原与嵌合性抗原受体结合后巨噬细胞M1型活性。

摘要： 本发明公开了一种检测巨噬细胞中RFX1表达水平的试剂在制备巨噬细胞分型检测制剂中的应用。通过巨噬细胞中RFX1的表达水平判断巨噬细胞分化类型，在M1型巨噬细胞中RFX1的表达水平高于M0和M2型巨噬细胞。提示该基因可作为M1型巨噬细胞的生物标志物，在巨噬细胞的分型鉴定中具有较好的应用价值。

摘要： 本发明公开了烟草花叶病毒在刺激巨噬细胞极化为M1型巨噬细胞中应用。在该用途中，烟草花叶病毒可以促进巨噬细胞向M1型极化，使其具有杀伤作用，为肿瘤免疫治疗提供治疗方案。

摘要： 本发明公开了一种巨噬细胞消化液及专用于巨噬细胞的消化方法，包括下列组份：乙二胺四乙酸3‑6份、乙二醇双(2‑氨基乙基醚)四乙酸4‑8份、胎牛血清8‑12份和磷酸缓冲缓冲液90‑100份，一种专用于巨噬细胞的消化方法，消化方法包括如下步骤：配置成消化液原液，过滤后低温保存6个月，然后得到巨噬细胞消化液；将巨噬细胞培养瓶中加入巨噬细胞消化液；将加入巨噬细胞消化液的巨噬细胞培养瓶摇晃，使得巨噬细胞消化液均匀覆盖培养瓶；将DMEM培养基加入到静置后的巨噬细胞培养瓶中，对巨噬细胞消化液进行中和，转移到离心管中；将转移到离心管中的溶液进行室温离心3min；离心后，在离心管中加入DMEM培养基完成巨噬细胞的消化。本发明使巨噬细胞消化率高、分化率低。

摘要： 本发明涉及生物材料合成及应用技术领域，具体公开了一种仿生靶向巨噬细胞光学成像剂的制备方法及其在巨噬细胞相关疾病诊断的应用，制备方法包括以下步骤：步骤a：合成聚集诱导发光效应的2‑(2’‑羟基苯基)苯并唑类化合物(AIEgen)；步骤b：提取主要成分为β‑1,3‑D的酵母微囊(GPs)；步骤c：将步骤a中的AIEgen溶于无水乙醇中配置1mM母液，4°C保存，将步骤b中GPs溶于PBS配置成10mg/mL的混悬液，孵育1h，随后，以体积比1:10的比例将AIEgen与GPs混匀，孵育24h，离心，洗涤，收集样品。该系统通过模拟真菌感染途径可被体内巨噬细胞特异性吞噬，受病变部位急剧增多趋化因子的招募，携载酵母微囊光学成像剂的巨噬细胞会大量迁移至病变部位，实现巨噬细胞相关疾病的无创诊断。

摘要： 本发明涉及一种巨噬细胞的CRISPR/Cas9表观编辑系统、方法、编辑后的巨噬细胞和应用，属于抗肿瘤技术领域。本发明所述巨噬细胞的CRISPR/Cas9表观编辑系统包括以下组分：PCP‑EZH2、sgRNA‑X‑PP7和dCas9；所述PCP‑EZH2为PCP基因和EZH2基因的融合基因；所述sgRNA‑X‑PP7为用于插入sgRNA的含PP7适配子茎环的基因，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明所述编辑系统能够从多方面增强巨噬细胞的抗肿瘤效应，促进T细胞等免疫应答，抑制肿瘤生长，显著改善肿瘤的治疗效果。

摘要： 本发明提供了一种巨噬细胞专属嵌合抗原受体、表达该受体的可控极化单核/巨噬细胞及其制备方法和应用，涉及生物技术领域。本发明提供了一种嵌合抗原受体，包括依次连接的胞外抗原结合域、跨膜结构域和胞内激活结构域，其中胞外抗原结合域包括信号肽和/或scFv，能够异性识别GBM特异表达的细胞膜表面蛋白EGFRvIII；跨膜结构域包括CD8α，链接胞外抗原结合域和胞内激活结构域；胞内激活结构域包括TIR、CD3ZETA或GM‑CSFRα/β，促进巨噬细胞向M1型极化，将本发明的嵌合抗原受体引入到巨噬细胞中，赋予了该巨噬细胞对GBM的靶向杀伤作用，有效的促进并维持其M1极化状态。

摘要： 本发明公开了一种检测巨噬细胞中RFX1表达水平的试剂在制备巨噬细胞分型检测制剂中的应用。通过巨噬细胞中RFX1的表达水平判断巨噬细胞分化类型，在M1型巨噬细胞中RFX1的表达水平高于M0和M2型巨噬细胞。提示该基因可作为M1型巨噬细胞的生物标志物，在巨噬细胞的分型鉴定中具有较好的应用价值。

摘要： 本发明提供了一种嵌合性抗原受体及表达其的巨噬细胞、调节巨噬细胞极化的方法和应用，涉及生物技术领域。该嵌合性抗原受体的胞内结构域中含有IFN‑γ受体，表达该嵌合性抗原受体的免疫细胞对IFN‑γ的响应能力增强。表达该嵌合性抗原受体的巨噬细胞可以相对较长时间保持M1型状态，增强肿瘤细胞抗原与嵌合性抗原受体结合后巨噬细胞M1型活性。