靶向Arnt的RNAi慢病毒载体的构建及其在HCCLM6中对Arnt基因表达的影响

梁英; 吴伟忠; 李薇薇; 张宁; 孙惠川; 王鲁; 夏景林

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目的:构建并鉴定Arnt基因特异性RNAi慢病毒栽体,将其导入HCCLM6肝癌细胞中,筛选有效抑制ARNT表达的稳定细胞株.方法:针对已经筛选确定的Arnt基因RNAi有效靶序列,合成靶序列的OligoDNA,退火形成双链DNA,与经HpaⅠ和XhoⅠ酶切后的pLVTHM载体连接[含U6启动子和绿色荧光蛋白(GFP)]产生LV-shArnt慢病毒载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定.用LV-shArnt载体,pCMV-dR8.74载体,pMD2G载体三质粒共转染包装细胞293T细胞,包装产生慢病毒,以293T细胞GFP蛋白表达水平测定病毒滴度,挑选细胞克隆,收获病毒上清,将病毒上清转染HCCLM6中,经过GFP筛选得到稳定抑制Arnt表达的HCCLM6细胞株.通过RT-PCR鉴定抑制Arnt表达的效果.结果:双酶切与测序鉴定证实成功构建了Arnt shRNA的慢病毒栽体,转染包装病毒细胞株获得的病毒上清成功转染了HCCLM6,并且抑制了Arnt的表达.结论:运用pLVTHM载体构建的LV-shArnt慢病毒载体可有效抑制Arnt在肝癌细胞株HCCLM6中的表达,为观察转染shRNA慢病毒表达载体的肿瘤细胞的恶性生物学行为变化奠定了实验基础.

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来源
《中国临床医学》 |2008年第6期|879-882|共4页
作者
梁英; 吴伟忠; 李薇薇; 张宁; 孙惠川; 王鲁; 夏景林;
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作者单位

复旦大学附属中山医院肝癌研究所,上海,200032;

复旦大学附属中山医院肝癌研究所,上海,200032;

复旦大学附属中山医院肝癌研究所,上海,200032;

复旦大学附属中山医院肝癌研究所,上海,200032;

复旦大学附属中山医院肝癌研究所,上海,200032;

复旦大学附属中山医院肝癌研究所,上海,200032;

复旦大学附属中山医院肝癌研究所,上海,200032;

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正文语种 chi
中图分类肝肿瘤;
关键词
Arnt; RNA干扰; 慢病毒载体;

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