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甲基乙基酮-细胞外信号调节蛋白激酶信号传导通路在哺乳期乳腺摄碘中的作用

         
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目的观察不同浓度17β-雌二醇（17β-estradiol,E2）或甲基乙基酮（MEK）信号通路抑制剂U0126对小鼠哺乳期乳腺细胞MEK、细胞外信号调节蛋白激酶（ERK）和钠/碘同向转运体（NIS）mRNA和蛋白表达,探讨MEK-ERK信号传导通路在哺乳期乳腺细胞摄碘中的作用。方法采用细胞体外培养的方法,对Balb/C小鼠哺乳期乳腺细胞进行传代培养,观察不同含量（0.000 8、0.004 0、0.020 0、0.100 0、0.500 0 mg/L）E2刺激后,小鼠哺乳期乳腺细胞MEK、ERK和NIS mRNA表达;细胞分组为U0126+E2组[加入MEK的抑制剂U0126（20μmmol/L）30 min后,再加入E2（0.1 mg/L）]、E2组和对照组,培养24 h后,收集样本。用实时荧光定量PCR方法检测小鼠乳腺原代细胞中MEK、ERK和NIS mRNA表达;蛋白质免疫印迹（Western blot）方法检测小鼠乳腺原代细胞总ERK、磷酸化ERK和NIS蛋白表达。结果在E2刺激试验中,随着E2含量的不断升高,哺乳期乳腺细胞ERK、NIS mRNA的表达量逐渐增加（F=28.23、18.37,P均＜0.05）。在MEK抑制实验中,E2组NIS mRNA的表达量（1.90±1.36）较U0126+E2组（0.90±0.39）和对照组（0.76±0.18）高,组间比较差异均有统计学意义（t=3.218、2.737,P均＜0.05）;在总ERK蛋白表达中,E2组（1.62±0.30）最高,与U0126+E2组（1.19±0.32）和对照组（1.25±0.27）比较,差异均有统计学意义（t=2.401、2.246,P均＜0.05）;ERK磷酸化后,E2组磷酸化ERK蛋白表达（0.97±0.02）比U0126+E2组（0.76±0.18）高,组间比较差异有统计学意义（t=-2.840,P＜0.05）;E2组NIS蛋白表达（0.49±0.08）比U0126+E2抑制组（0.37±0.04）和对照组（0.41±0.03）高,组间比较差异均有统计学意义（t=3.286、2.294,P均＜0.05）。结论 E2激活MEK-ERK信号通路,上调哺乳期乳腺细胞ERK、NIS mRNA及蛋白的表达。抑制该通路后,ERK、NIS mRNA与蛋白表达均呈明显降低的趋势;MEKERK可能是哺乳期乳腺摄碘的一条重要信号传导通路。

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