肿瘤坏死因子α诱导位点特异性DNA去甲基化促进基质金属蛋白酶9的表达

凌厉; 任萌; 黎锋; 杨川; 严励

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目的研究肿瘤坏死因子α（TNF-α）诱导位点特异性DNA去甲基化促进人表皮角质细胞基质金属蛋白酶9（MMP9）的表达。方法用10 ng/ml的TNF-α或2.5μmol/L的5-氮杂-2’-脱氧胞苷（1DAC）联合300 nmol/L的曲古菌素A（TSA）处理人表皮角质细胞株HaCaT细胞,采用实时荧光定量PCR（Real-time RT-PCR）检测各组细胞MMP9 mRNA水平,采用蛋白质印迹（Western Blot）及酶联免疫吸附法（ELISA）检测MMP9蛋白的表达水平。应用亚硫酸氢钠修饰后测序法（BSP）及甲基化敏感性高分辨率熔解曲线法（Ms-HRM）检测TNF-α干预细胞后MMP9启动子区DNA甲基化改变差异最大的CpG位点。构建不同位点甲基化的MMP9启动子-荧光素酶报告基因重组质粒,检测特异性位点的:DNA甲基化状态改变对MMP9启动子转录活性的影响。结果各培养时间点,TNF-α干预组均较相应PBS对照组HaCaT细胞的MMP9表达量升高,且差异均有统计学意义（P＜0.05）;经实时RT-PCR、蛋白质印迹和ELISA三种方法分别检测到的MMP9 mRNA和蛋白表达量随干预时间的变化趋势一致,均为先升高后下降。TNF-仅干预后MMP9启动子区的10个CpG位点均发生不同程度的DNA去甲基化改变,其中-36 bp位点改变的差异有统计学意义（P＜0.05）。-36 bp位点去甲基化后,MMP9转录活性明显提高。TNF-α干预后MMP9启动子区的10个CpG位点均发生不同程度的DNA去甲基化改变,其中-36 bp位点改变的差异有统计学意义（P＜0.05）。-36 bp位点去甲基化后,MMP9转录活性明显提高。结论TNF-α通过诱导HaCaT细胞MMP9基因启动子-36 bp位点DNA去甲基化上调MMP9表达。

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来源
《中华内分泌代谢杂志》 |2016年第8期||共页
作者
凌厉; 任萌; 黎锋; 杨川; 严励;
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作者单位

1. 广东医学院附属深圳南山医院内分泌科 2. 中山大学孙逸仙纪念医院内分泌科;

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正文语种 chi
中图分类糖尿病性昏迷及其他并发症;
关键词
表皮角质细胞; DNA; 去甲基化; 肿瘤坏死因子α; 金属基质蛋白酶9;

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