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首页> 中文期刊> 《中华实验眼科杂志》 >黄连素对高糖培养的大鼠视网膜Müller细胞的抗凋亡和抗炎作用及其机制

黄连素对高糖培养的大鼠视网膜Müller细胞的抗凋亡和抗炎作用及其机制

         
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目的探讨黄连素对高糖培养大鼠离体视网膜Müller细胞的影响及其作用机制。方法将体外培养的Sprague Dawley(SD)大鼠视网膜Müller细胞分为正常对照组、高糖组、高糖+10μmol/L黄连素组和高糖+25μmol/L黄连素组,正常对照组和高糖组细胞分别采用5 mmol/L葡萄糖和25 mmol/L葡萄糖培养,后2个组分别采用25 mmol/L葡萄糖+相应浓度黄连素处理,培养后72 h采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法及实时荧光定量PCR法分别检测细胞培养液上清中炎性因子肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-8(IL-8)和环氧合酶2(COX-2),L-谷氨酸-L-天冬氨酸转运体(GLAST)及相关蛋白的表达情况,采用Western blot法检测细胞质中GLAST、镁离子依赖的蛋白磷酸酶1A(PPM1A)、核因子-κB(NF-κB)和cleaved caspase-3及细胞核中NF-κB蛋白的表达情况。结果正常对照组、高糖组、高糖+10μmol/L黄连素组和高糖+25μmol/L黄连素组细胞凋亡率分别为(1.37±0.21)%、(17.67±1.17)%、(10.60±0.17)%和(5.57±0.35)%,总体比较差异有统计学意义(F=375.97,P<0.01),其中高糖组细胞凋亡率较正常对照组明显升高,高糖+10μmol/L黄连素组和高糖+25μmol/L黄连素组细胞凋亡率较高糖组明显降低,高糖+25μmol/L黄连素组较高糖+10μmol/L黄连素组细胞凋亡率明显降低,差异均有统计学意义(均P<0.01)。ELISA检测结果显示,各组细胞中TNF-α、IL-8、COX-2质量浓度总体比较差异均有统计学意义(F=28.36、35.88、41.59,均P<0.01),其中高糖组细胞中TNF-α、IL-8和COX-2质量浓度均明显高于正常对照组,高糖+10μmol/L黄连素组和高糖+25μmol/L黄连素组细胞中TNF-α和COX-2质量浓度明显低于高糖组,高糖+25μmol/L黄连素组细胞中TNF-α和IL-8浓度明显低于高糖+10μmol/L黄连素组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。实时荧光定量PCR结果显示,各组间Müller细胞中GLAST mRNA的相对表达量总体比较差异有统计学意义(F=268.60,P<0.01),其中高糖组GLAST mRNA的相对表达量明显低于正常对照组、高糖+10μmol/L黄连素组和高糖+25μmol/L黄连素组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。Western blot分析结果显示,各组Müller细胞质中GLAST、PPM1A、cleaved caspase-3和NF-κB蛋白相对表达量以及细胞核中NF-κB蛋白相对表达量总体比较差异均有统计学意义(F=135.20、156.98、80.96、128.07、47.36,均P<0.01),其中高糖组Müller细胞质中GLAST、PPM1A和NF-κB蛋白的相对表达量明显低于正常对照组、高糖+10μmol/L黄连素组和高糖+25μmol/L黄连素组,细胞质中cleaved caspase-3和细胞核中NF-κB蛋白的相对表达量明显高于正常对照组、高糖+10μmol/L黄连素组和高糖+25μmol/L黄连素组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论高糖可诱导SD大鼠视网膜Müller细胞发生凋亡及炎症反应,而黄连素能有效抑制高糖诱发的细胞凋亡及炎症反应,其可能是通过抑制NF-κB的核易位和转录活性,从而抑制炎性因子的表达来发挥保护作用。

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