多重调控病毒-基因载体的构建及其体外抗肿瘤活性

刘永靖; 陈飞虎; 苏长青; 王星华; 张琪; 李林芳; 钱炎珍; 钱其军

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多重调控病毒-基因载体的构建及其体外抗肿瘤活性

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目的构建一种新型的病毒-基因治疗载体。方法通过克隆技术将人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）基因插入质粒载体pBHGE3的E3区,得到由主要晚期启动子（MLP）调控的腺病毒质粒pPE3-hTRAIL,再通过与质粒pSG500在293细胞中进行位点特异性重组得到E1A、E1B基因分别受hTERT启动子与HRE启动子双重调控的重组增殖型腺病毒,用TCID50方法测定病毒滴度。通过增殖实验观察重组病毒的选择性增殖能力。利用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测人TRAIL基因的表达。并进行噻唑蓝（MTT）比色法实验检测其杀伤肿瘤细胞的能力。结果CNHK500-hTRAIL的病毒滴度为2.39×1010pfu/ml,增殖实验结果证实CNHK500-hTRAIL可以选择性地在端粒酶阳性的人肺癌细胞A549中增殖,其所携带的人TRAIL基因在A549中的表达量（183.12μg/L）明显高于携带该基因的非增殖型腺病毒载体Ad-hTRAIL（24.53μg/L,P＜0.01）。MTT显示CNHK500-hTRAIL对A549的杀伤能力明显高于携带该基因的非增殖型腺病毒载体Ad-hTRAIL,其半数抑制MOI值分别为17.825、0.197（P＜0.01）。结论CNHK500-hTRAIL是一种具备治疗肺癌潜力的新型病毒-基因治疗系统。

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来源
《中华实验外科杂志》 |2009年第3期||共页
作者
刘永靖; 陈飞虎; 苏长青; 王星华; 张琪; 李林芳; 钱炎珍; 钱其军;
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作者单位

1. 解放军第105医院胸心外科 2. 安徽医科大学药学院 3. 第二军医大学东方肝胆外科医院病毒-基因实验室;

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正文语种 chi
中图分类肿瘤学;
关键词
肺癌; 腺病毒; 基因治疗; TRAIL;

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