鼠ho-1真核表达载体的构建、鉴定及其在骨髓来源的内皮祖细胞中的表达

王三明; 王花; 张辉; 刘祥厦; 刘勇; 王冕; 李雯; 王深明

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目的制备高效表达的血红素氧合酶（HO）-1基因修饰的骨髓来源的内皮祖细胞（EPCs）。方法应用基因重组的方法构建ho-1真核表达质粒pCMV-Tag 2B/ho-1,用脂质体将其转入骨髓来源的EPCs,用荧光显微镜和Western blot等方法检测HO-1蛋白的表达。结果（1）逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）产物电泳结果,质粒菌落PCR鉴定、酶切鉴定和测序鉴定结果证实ho-1真核表达质粒构建成功;（2）根据体外培养的骨髓来源的EPCs形态学变化,细胞的CD133、CD34和VWF免疫组织化学染色鉴定,VEGF诱导后LDL、UEA双染鉴定等证实所分离的细胞为EPCs;（3）vegfa转染P3代EPCs后细胞内荧光明显增强,Western blot检测显示转染细胞HO-1蛋白抗体结合蛋白出现明显印迹条带。结论成功制备表达外源性基因ho-1的骨髓来源的EPCs,制备方法可行。

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来源
《中华实验外科杂志》 |2009年第5期||共页
作者
王三明; 王花; 张辉; 刘祥厦; 刘勇; 王冕; 李雯; 王深明;
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作者单位

1. 中山大学第一附属医院血管外科 2. 中山大学第一附属医院外科实验室;

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正文语种 chi
中图分类 R346;
关键词
内皮祖细胞; 血红素氧合酶-1; 转染;

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