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凝血酶智能响应型纳米探针用于动脉血栓性疾病诊断的实验研究

         
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目的 应用凝血酶智能响应型纳米探针,实现颈动脉血栓的体内可视化预测,为血栓形成的早期诊断提供新策略.方法 将超顺磁性氧化铁与凝血酶响应肽及Cy5.5-N-羟基琥珀酰亚胺酯(Cy5.5 NHS)共价偶联构建探针.检测不同浓度探针(0μg/ml、10 μg/ml、20 μμg/ml、50 μg/ml、100 μg/ml、200 μμg/ml)对人脐静脉内皮细胞的毒性.近红外荧光成像分析加入不同浓度凝血酶的探针荧光强度(实验组:凝血酶浓度分别为0.5 U/ml、1 U/ml、10 U/ml、50 U/ml;空白对照组为0 U/ml;阴性对照组为50 U/ml,并加入100 μg比伐芦定).制备小鼠颈动脉血栓模型,并对血栓组和对照组小鼠颈动脉组织切片进行免疫荧光染色,以探究探针的凝血酶靶向性.结果 不同探针浓度的细胞存活率比较无统计学差异(P＞0.05).不同浓度实验组探针荧光强度分别为空白对照组的17.64、34.24、55.01和64.65倍(P＜0.01),阴性对照组与空白对照组探针荧光强度比较无显著差异(P＞0.05).血栓组小鼠病变局部凝血酶水平较对照组显著升高.结论 本研究成功构建凝血酶智能响应型纳米探针,实现颈动脉血栓的早期精准识别,为血栓形成的可视化预测提供了新策略.

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