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沉默TLR4基因下调NF-κB表达抑制脑胶质瘤细胞增殖

         

摘要

目的探讨Toll样受体(TLR)4调控脑胶质瘤细胞增殖作用。方法构建沉默TLR4基因的shRNA质粒,脂质体法转染人脑胶质瘤U-87MG细胞;流式细胞术检测细胞转染率;实时荧光定量-聚合酶链反应(PCR)检测转染细胞中TLR4、核因子(NF)-κB及细胞周期蛋白(Cyclin)D1基因表达;嘌呤霉素筛选出稳定转染细胞;流式细胞术检测转染细胞周期及EdU表达。结果TLR4-sh2转染率最高。U-87MG细胞转染TLR4-sh2及阴性对照质粒48 h后,嘌呤霉素筛选出稳定转染细胞分别命名为U-87MG-Sh及U-87MG-NC细胞,转染率分别为(95.05±0.17)%及(94.75±0.72)%。U-87MG-Sh细胞中TLR4、NF-κB及CyclinD1基因及Edu表达水平显著低于U-87MG-NC及U-87MG细胞中的表达水平(P<0.01)。U-87MG-Sh细胞中G0/1期细胞显著高于U-87MG-NC及U-87MG细胞(P<0.01),而细胞增殖指数显著降低(P<0.01)。结论抑制TLR4基因可以下调下游靶基因NF-κB表达,从而导致CyclinD1基因表达水平降低,抑制脑胶质瘤细胞增殖。

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