HCV 5’NCR调控抑制活性的反义寡核苷酸的筛选

王升启; 王小红; 管伟; 李梦东

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HCV 5’NCR调控抑制活性的反义寡核苷酸的筛选

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目的寻找高效特异的新型抗HCV药物,探讨针对HCV基因的硫代修饰反义寡核苷酸（S－ASODNs）最佳作用靶序列。方法参考HCV5＇NCR计算机预测的二级结构图,设计合成了15条S-ASODN、3条正义寡核苷酸及1条随机序列，采用HCV5＇NCR调控荧光素酶基因的瞬时表达系统，将S－ASODN与pHCV－neo4共转染，通过荧光素酶活性表达高低，反映S－ASODN对HCV调控基因的抑制活性。结果5条S－ASODN即HCV65、HCV279、HCV363、HCV349及HCV352在25～100nmol／L浓度范围内，对HCV调控基因具有特异性的剂量依赖性抑制活性。当浓度为100nmol／L时，这些ASODN的抑制率可达80％以上，IC50值提示HCV363的抑制活性最强。通过阴性对照实验包括正义寡核苷酸、随机序列及不含HCV序列的靶载体pGL3提示ASODN仅存在轻度非特异性作用。此外，实验结果还提示不同作用靶位的ASODN之间具有一定的协同作用。结论HCV5＇NCR第二茎环结构Ⅱa、第三茎环结构Ⅲd和翻译起始区可能是ASODN作用的重要靶序列。

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来源
《中华肝脏病杂志》 |2000年第5期||共页
作者
王升启; 王小红; 管伟; 李梦东;
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作者单位

军事医学科学院放射医学研究所!北京100850;

第三军医大学西南医院全军传染病中心;

军事医学科学院放射医学研究所!北京100850;

第三军医大学西南医院全军传染病中心;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类病理生理学;
关键词
肝炎病毒.丙型; 寡核苷酸.反义; 转基因; 荧光素酶;

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