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新生大鼠慢性脑缺血损伤中氯离子通道ClC2的表达及其与白质发育影响作用的研究

         

摘要

目的 探讨新生大鼠缺血缺氧损伤后氯离子(Cl)通道ClC2表达及其阻断剂DIDS对脑白质发育的影响作用.方法 采用新生3-5 d SD大鼠,以改良Levine法建立慢性脑缺血缺氧模型.运用RT-PCR、活性氧检测和Western Blot检测结合髓鞘卢卡斯快蓝与免疫组织化学染色等技术,对比观察新生缺血缺氧脑损伤前后白质中ClC2的表达变化;分析其与氧化应激、炎症反应的相关性;对比观察损伤前后及损伤后应用DIDS阻断ClC2表达对脑白质髓鞘发育和细胞凋亡的影响.结果 ①新生缺血缺氧脑损伤后白质中ClC2 mRNA和蛋白表达均显著增高(P<0.01);伴白质组织活性氧浓度显著升高(P<0.01);和iNOS、TNF-α mRNA的表达增加(P<0.01).在胼胝体等白质区髓鞘染色较正常明显浅淡,促凋亡蛋白caspase-3与ClC2阳性双标细胞数目则明显增多(P<0.01).②损伤早期应用DIDS后,ClC2 mRNA和蛋白、活性氧浓度、iNOS、TNF-α mRNA的表达以及caspase-3表达等均较损伤组明显降低(P<0.05);白质区髓鞘特异染色逐渐加深.结论 新生缺血缺氧脑损伤后白质区Cl通道表达升高与氧化应激、炎症反应呈正相关;可导致由脑白质中caspase-3介导的细胞凋亡增多和髓鞘发育受阻.伤后早期应用DIDS阻断Cl-通道可降低caspase-3介导的凋亡发生,提示早期使用DIDS可部分保护缺血缺氧损伤后的OLs细胞.

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