直接逆转录原位PCR检测实验性汉坦病毒感染乳鼠脑组织中病毒RNA及其与原位分子杂交的比较

杨守京; 刘彦仿; 贺宏印; 刘俊彬

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出生后２～３ｄ的昆明种乳鼠，经腹腔接种１００个半数致死量的陈株汉坦病毒，每只０．０５ｍｌ，于接种后１、２、４、６、８、１０、１２、１４ｄ处死动物，每个时间点３～６只不等，取其脑组织固定于４％的多聚甲醛中，石蜡包埋制备５μｍ的连续组织切片，每时间点取１～２例组织切片，用逆转录原位ＰＣＲ（ＲＴ－ＩＳＰＣＲ）方法检测组织中病毒Ｓ片段ＲＮＡ，组织脱蜡后，经ＤＮａｓｅ、蛋白酶Ｋ、消化等予处理，用汉坦病毒ＲＮＡＳ片段特异的一对引物，在组织切片上进行病毒ＲＮＡ的逆转录和ＰＣＲ过程，直接将ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ－１１－ｄＵＴＰ掺入到扩增产物中，经过３０个ＰＣＲ循环后，用碱性磷酸酶标记的抗ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ抗体免疫组化检测扩增产物，连续组织切片用ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ标记的汉坦病毒Ｍ片段Ｇ２编码区ＲＴ－ＰＣＲ扩增产物的和Ｓ片段特异性探针进行原位分子杂交并与ＲＴ－ＩＳＰＣＲ结果进行比较，另外应用免疫组化检测该基因表达产物病毒核抗原（ＮＰ），结果，ＲＴ－ＩＳＰＣＲ在病毒感染１ｄ的乳鼠脑组织中检测到病毒ＲＮＡ扩增产物，扩增产物定位于神经细胞胞浆内，而原位分子杂交和免疫组化检测阴性。在病毒感染２ｄ及２ｄ以后的乳鼠脑组织中ＲＴ－Ｉ?

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来源
《中国组织化学与细胞化学杂志》 |1997年第4期|P.29-36|共8页
作者
杨守京; 刘彦仿; 贺宏印; 刘俊彬;
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作者单位

第四军医大学病理学教研室;

西京医院传染科;

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正文语种 chi
中图分类 R346;
关键词
汉坦病毒; 逆转录原位聚合酶链式反应; 原位杂交; 小鼠; 脑;

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