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GDF11对小鼠神经干细胞增殖及TGF-β/Smads、Wnt/β-连环蛋白信号通路的影响

         

摘要

目的探讨生长分化因子11(GDF11)对小鼠神经干细胞增殖及转化生长因子-β(TGF-β)/Smads、Wnt/β-连环蛋白信号通路关键蛋白表达的影响。方法分离培养及诱导分化孕14 d CD1胎鼠大脑侧脑室下区的神经干细胞,采用免疫荧光染色鉴定神经干细胞特异性蛋白巢蛋白、SOX2,以及在诱导分化后鉴定神经元标志物神经核抗原(NeuN)和星型胶质细胞标志物胶质纤维酸性蛋白(GFAP)。取第3代神经干细胞分为实验组和对照组,实验组添加GDF11(终浓度40ng/mL),对照组添加等体积完全培养液。采用EdU法检测2组细胞增殖情况,采用Western blotting于培养1 h、6h时检测2组细胞Smad2/3、磷酸化(p)-Smad2/3、Smad4、β-连环蛋白表达。结果免疫荧光染色显示90%以上细胞呈巢蛋白和SOX2阳性,诱导分化后部分细胞呈NeuN或GFAP阳性。细胞增殖实验显示:与对照组EdU阳性细胞比例(0.24±0.03)相比,实验组EdU阳性细胞比例(0.34±0.08)明显提高,差异有统计学意义(P<0.05)。Western blotting结果显示:实验组p-Smad2/3、Smad4和β-连环蛋白表达在培养1 h、6h时均明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 GDF11可在体外促进小鼠神经干细胞增殖,其机制可能与TGF-β/Smad、Wnt/β-连环蛋白信号通路激活有关。

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