大鼠GLUT3基因重组腺病毒载体的构建及鉴定

李方成; 李军亮; 吴中华; 张培峰; 黄文林; 刘然义

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大鼠GLUT3基因重组腺病毒载体的构建及鉴定

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目的构建携带大鼠葡萄糖转运体3(GLUT3)基因的复制缺陷型重组腺病毒载体,为研究GLUT3的生物学功能提供工具.方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法获取大鼠GLUT3基因全长cDNA片段,将其克隆至穿梭质粒pShuttle中构建穿梭质粒pShuttle-GLUT3,经酶切后与线性化的腺病毒骨架质粒pAdeno-X体外连接并转化大肠杆菌DH5α,构建重组腺病毒质粒pAd-GLUT3,酶切线性化重组腺病毒质粒后转染293细胞包装成重组病毒颗粒,重组腺病毒在293细胞中反复扩增数代后,分别用聚合酶链反应(PCR)及免疫印记法(western blot)的方法从基因和蛋白表达水平鉴定重组的腺病毒.结果经DNA测序和PCR分析显示GLUT3 cDNA序列正确.成功筛选出重组腺病毒质粒pAd-GLUT3后在HEK293细胞中成功包装出重组病毒,包装后冻融细胞行PCR及western blot检测表明重组腺病毒包装成功.结论本研究成功构建了携带大鼠GLUT3基因的复制缺陷型重组腺病毒载体.

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来源
《中华神经医学杂志》|2006年第11期|1086-1089|共4页
作者
李方成; 李军亮; 吴中华; 张培峰; 黄文林; 刘然义;
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作者单位

510120 广州,中山大学附属第二医院神经外科;

510120 广州,中山大学附属第二医院神经外科;

510120 广州,中山大学附属第二医院神经外科;

510120 广州,中山大学附属第二医院神经外科;

510060 广州,中山大学肿瘤防治中心实验室;

510060 广州,中山大学肿瘤防治中心实验室;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类基础医学;
关键词
葡萄糖转运体3; 基因克隆; 重组腺病毒;

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