重组腺病毒

摘要： 【目的】利用腺病毒AdMax系统表达载体表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)核衣壳蛋白(nucleocapsid protein),并研究其免疫原性。【方法】参考GenBank中已公布的PRRSV N基因序列(登录号:KT945017.1),人工合成PRRSV N基因,并将其连接至腺病毒穿梭载体pDC316-mCMV-EGFP,转化大肠杆菌Top10感受态细胞,构建重组穿梭质粒pDC316-N。将重组穿梭质粒pDC316-N与AdMax腺病毒系统的骨架质粒PBHGLOX(delta)E1,3Cre共同转染293A细胞,获得重组腺病毒rAd-N,对获得的重组腺病毒液进行PCR和测序鉴定,用鉴定正确的rAd-N病毒液感染293A细胞,对该重组腺病毒进行扩大培养,检测病毒的TCID50,并用RT-PCR和Western blotting检测重组腺病毒的表达和反应原性。用重组腺病毒免疫小鼠,收集血清用PRRSV抗体检测试剂盒检测其抗体水平,初步评价其对小鼠的免疫效果。【结果】PCR扩增出1条大小为400 bp的PRRSV N基因条带,测序结果正确,表明重组腺病毒构建成功,浓缩后测得其半数组织培养感染剂量(TCID50)为10-10.239。RT-PCR和Western blotting检测结果证实目的基因在基因和蛋白水平上均可得到正确表达,蛋白分子质量约为14 ku。小鼠特异性抗体检测表明,重组腺病毒rAd-N免疫小鼠后可使小鼠快速产生PRRSV特异性抗体,与对照组差异显著(P<0.05),其中重组腺病毒与Gel佐剂配合使用时效果最好,最高可达7.84 U/L。【结论】本研究成功构建表达PRRSV N蛋白的重组腺病毒,其具有良好的免疫原性,为建立针对PRRSV抗体的间接ELISA检测方法和进一步研发PRRSV抗体检测试剂盒奠定基础。

摘要： 目的构建表达结核分枝杆菌多阶段抗原融合蛋白Ag85B-ESAT6(AE)和Rv2031c-Rv2626c(R2)的重组腺病毒,为其用于结核病新型疫苗的研究奠定基础。方法体外合成人延长因子1α(EF1α)启动子DNA序列,将其亚克隆至腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV中,构建含有CMV、EF1α双启动子的腺病毒穿梭载体。PCR扩增课题组前期构建的AE、R2融合蛋白基因,并依次亚克隆至上述腺病毒穿梭载体的CMV和EF1启动子下游,阳性重组穿梭质粒命名为pAd-AE-R2。将pAd-AE-R2与骨架质粒共转染HEK293细胞,包装获得重组腺病毒,命名为Ad-AE-R2。RT-PCR法和间接免疫荧光法(IFA)对重组腺病毒表达的AE、R2融合蛋白的基因和蛋白表达水平进行鉴定。结果Ad-AE-R2瞬时转染的HEK293细胞中可转录表达AE、R2融合蛋白基因。IFA法采用Ag85B、ESAT-6、Rv2626c和Rv2031c 4种抗原的单克隆抗体可分别检测到Ad-AE-R2感染的巨噬细胞中具有特异性的绿色荧光,表明Ad-AE-R2能够在宿主细胞内表达AE、R2融合蛋白。结论成功构建并包装获得表达结核分枝杆菌多阶段抗原融合蛋白AE、R2的重组腺病毒,为其用于结核病新型疫苗研究奠定基础。

摘要： 本研究通过构建表达弓形虫致密颗粒抗原4(TgGRA4)蛋白的重组腺病毒vAd5-TgGAR4,并在HEK293细胞内包装病毒后进行蛋白表达,为弓形虫病疫苗研发提供研究基础。采用PCR方法扩增弓形虫TgGRA4基因,将其连接到pCR259穿梭载体上,构建重组穿梭载体pCR259-TgGRA4;之后转化到含有腺病毒载体Transpose-Ad^(TM)294的HighQ-1 Transpose-Ad^(TM)294感受态细胞中,通过同源重组获得重组腺病毒载体294-TgGRA4;载体质粒经PacⅠ酶切线性化后转染至HEK293细胞,包装重组腺病毒vAd5-TgGRA4,TCID;方法测定病毒滴度。经PCR鉴定和测序,获得TgGRA4基因,与参考序列(M76432)同源性为100%,经EcoRⅠ、XbaⅠ双酶切鉴定、蛋白质印迹和IFA检测,表明重组穿梭载体pCR259-TgGRA4构建成功,并能表达TgGRA4蛋白,经NdeⅠ酶切鉴定,表明重组腺病毒载体294-TgGRA4构建成功,IFA检测包装的重组腺病毒vAd5-TgGRA4能表达TgGRA4蛋白,初代重组腺病毒滴度为2.85×10^(8)IU/mL。当感染复数(MOI)=10,病毒滴度可以提高到4.34×10^(8)IU/mL。本研究构建了含有弓形虫TgGRA4基因的重组腺病毒载体294-TgGRA4,制备了高滴度的vAd5-TgGRA4并能表达目的蛋白。

摘要： 已有研究发现口蹄疫病毒(FMDV)衣壳蛋白前体P1-2A含有FMDV主要抗原决定簇,并在3C蛋白酶的裂解下表达FMDV衣壳蛋白,诱导机体产生高水平的体液免疫应答。为了研究FMDV衣壳蛋白对鼠体内体液免疫应答的影响,本研究构建了含有O型FMDV P1-2A-3C基因的重组腺病毒表达载体,经双酶切鉴定正确后采用同源重组方法构建重组腺病毒rAdV-P12A3C,传代后经PCR鉴定,结果显示各代次均检测到预期的3.5 kb的目的条带,获得了r AdV-P12A3C。将r AdV-P12A3C连续传代后,分别利用IFA和western blot检测rAdV-P12A3C第2、4、6、8代时外源基因在293细胞中的表达情况。结果显示,获得了表达FMDV P1-2A-3C基因的rAdV-P12A3C,且外源基因在病毒传代过程中均能够稳定表达。将其感染293细胞后测定rAdV-P12A3C各时间点的病毒效价并绘制一步生长曲线,结果显示,该r AdV-P12A3C传至第8代时病毒效价可达7.2×10^(8)TCID/mL,各时间点病毒效价与亲本病毒差异均不显著,表明外源基因插入后对重组腺病毒的病毒滴度未造成明显影响。将rAdV-P12A3C免疫BALB/c小鼠,对BALB/c小鼠采血并分离血清,通过间接ELISA方法检测鼠体内的抗体,结果显示,rAdVP12A3C免疫组、O型FMDV灭活疫苗组及rAdV-P12A3C与206佐剂乳化组BALB/c小鼠均在首免后7周(二免后3周)VP1抗体达到峰值,之后抗体水平逐渐下降,到第24周抗体水平接近阴性,且rAdV-P12A3C与206佐剂乳化组产生的VP1抗体水平极显著高于另外两个免疫组(P<0.001)。表明rAdV-P12A3C能够刺激BALB/c鼠体内产生IgG抗体。本研究结果首次表明:rAdV-P12A3C能够表达FMDV衣壳蛋白,并能在小鼠体内产生高水平的体液免疫应答,为新型口蹄疫候选疫苗研究奠定了基础。

摘要： 目的 通过重组腺病毒介导使低氧诱导因子-2α(HIF-2α)过表达,探讨其过表达对SD孕鼠的影响.方法 将SD孕鼠随机分为重组腺病毒组、盐水组、空白腺病毒组,每组12只,于妊娠第9d经鼠尾静脉分别注射100 μL载有HIF-2α的重组腺病毒(1×1010Pfu/只)、盐水、空白腺病毒(1×1010 Pfu/只),观测孕鼠血压、尿蛋白、肝肾功能情况及仔鼠均重变化,应用免疫组化法分析胎盘组织HIF-2α表达情况.结果 妊娠第19 d,与空白腺病毒组、盐水组相比,重组腺病毒组血压、尿蛋白显著升高,仔鼠均重明显降低,差异具有统计学意义(P＜0.05).空白腺病毒组与盐水组相比,孕鼠血压、尿蛋白、仔鼠均重无明显差异(P＞0.05).三组孕鼠ALT、ALB、BUN、Cr无明显差异(P＞0.05),免疫组化结果提示重组腺病毒组HIF-2α表达高于盐水组、空白腺病毒组(P＜0.05).结论 HIF-2α过表达可使SD孕鼠产生子痫前期症状、胎儿宫内生长受限(IUGR),HIF-2α可能参与子痫前期发病机制.

摘要： 目的通过重组腺病毒介导使低氧诱导因子-2α(HIF-2α)过表达,探讨其过表达对SD孕鼠的影响。方法将SD孕鼠随机分为重组腺病毒组、盐水组、空白腺病毒组,每组12只,于妊娠第9 d经鼠尾静脉分别注射100μL载有HIF-2α的重组腺病毒(1×10^(10)Pfu/只)、盐水、空白腺病毒(1×10^(10)Pfu/只),观测孕鼠血压、尿蛋白、肝肾功能情况及仔鼠均重变化,应用免疫组化法分析胎盘组织HIF-2α表达情况。结果妊娠第19 d,与空白腺病毒组、盐水组相比,重组腺病毒组血压、尿蛋白显著升高,仔鼠均重明显降低,差异具有统计学意义(P0.05)。三组孕鼠ALT、ALB、BUN、Cr无明显差异(P>0.05),免疫组化结果提示重组腺病毒组HIF-2α表达高于盐水组、空白腺病毒组(P<0.05)。结论 HIF-2α过表达可使SD孕鼠产生子痫前期症状、胎儿宫内生长受限(IUGR),HIF-2α可能参与子痫前期发病机制。

摘要： 双酶切结果显示穿梭质粒和重组腺病毒构建成功，RT-PCR和western blotting结果显示成功构建的重组腺病毒可以感染HEK293细胞，并在细胞中稳定表达目的蛋白。病毒滴度检测结果显示构建完成的包括对照腺病毒Ad-GFP在内的重组腺病毒滴度分别为108.17TCID50/mL，108.50TCID50/mL，108.63TCID50/mL和107.60TCID50/mL，均满足进行下一步体外实验的要求。基因疗法作为一种全新的疾病治疗手段日益受到人们的关注和重视，尤其是针对目前应用传统和常规医疗手段难以彻底治愈的疾病。该重组腺病毒的成功构建，结合了SAL-2对葡萄球菌快速高效的抑菌作用、hLYZ对包括金黄色葡萄球菌、链球菌和大肠杆菌等的多种细菌的广谱抗菌效果，以及腺病毒表达宿主广和有效将外源基因转染至各靶细胞和组织等多重优势，为临床细菌性疾病的防治提出了新的思路，并为其后续的体外和动物水平的抑菌试验提供了实验基础。

摘要： 目的:PCV2(porcine circovirus2)是引起猪圆环病毒相关性疾病(PCVAD)的主要病原,是养猪业重点防控疫病的病原之一.在众多防控PCV2的措施中,疫苗接种是最重要的措施之一.PCV2Cap蛋白腺病毒载体疫苗已经有研究,但是免疫原性较差,本研究拟通过增加旱獭肝炎病毒转录后调控元件WPRE以期提高其免疫原性.rn 方法:本研究构建表达PCV2Cap蛋白的腺病毒载体,并加入WPRE对其进行优化,RT-PCR和western blot检测Cap蛋白在重组腺病毒感染的HEK293A细胞中表达水平,进一步通过小鼠免疫试验检测重组腺病毒rAd-Cap和rAd-Cap-WPRE的免疫原性.rn 结果:以pUC57-A-C-W为模板,用特异性引物进行PCR扩增,成功得到两个目的基因,分别为579bp和1164bp.目的基因与穿梭载体pShuttle-CMV连接后,转化入DH5α,得到重组质粒,经PCR和双酶切鉴定为阳性,并测序,结果正确,分别命名为pShuttle-CMV-Cap和pShuttle-CMV-Cap-WPRE.电转化入BJ5183进行同源重组,成功构建重组腺病毒载体pAdeasy-ps-Cap和pAdeasy-ps-Cap-WPRE.将重组腺病毒载体Pme I线性化后转染进入HEK293A细胞,出现细胞病变时收集细胞,RT-PCR检测成功扩增出大小为579bp和1164bp片段的目的基因.两种重组腺病毒感染细胞24h后,收集细胞,做western blot分析,结果均能检测到Cap蛋白,并且rAd-Cap-WPRE比rAd-Cap感染细胞Cap蛋白的表达水平高.将重组腺病毒免疫小鼠,进行iELISA和淋巴细胞增殖实验,结果表明rAd-Cap-WPRE免疫组的抗体水平和淋巴细胞增殖水平比rAd-Cap免疫组要高.rn 结论:成功构建腺病毒穿梭质粒pShuttle-CMV-Cap和pShuttle-CMV-Cap-WPRE;成功构建重组腺病毒载体pAdeasy-ps-Cap和pAdeasy-ps-Cap-WPRE;在HEK293A细胞中成功包装,得到重组腺病毒rAd-Cap和rAd-Cap-WPRE;在体外,WPRE元件可以提高腺病毒表达Cap蛋白水平;在体内,WPRE可以增强PCV2Cap腺病毒表达载体的免疫原性.

摘要： 端粒酶是维持端粒长度的重要组成部分,是肿瘤发生的标志物之一.本研究构建了能表达人端粒酶逆转录酶(hTERT)C端936-1132氨基酸片段(C197)的重组腺病毒Ad-GFP-C197,并观察其对Hela细胞增殖的影响.结果显示,Ad-GFP-C197感染Hela细胞后,采用免疫印迹法检测到C197在细胞内得到高效表达.此外,Ad-GFP-C197明显抑制Hela细胞的增殖,诱导细胞凋亡,并且降低Hela细胞中端粒酶活性.上述研究为进一步研究hTERT C末端功能打下基础,并为肿瘤的生物治疗提供新的思路.

摘要： 目的：采用联合使用重组腺病毒介导的可溶性补体Ⅰ型受体(sCR1)及可溶性肿瘤坏死因子受体Ⅰ于再灌注前预处理,观察其联合应用对CX43 表达的影响.方法:将30只健康雄性SD大鼠随机等分为为:(1)假手术对照组:仅开胸不结扎;(2)缺血/再灌注(I/R)模型组(Ad-LacZ);(3) Ad-sCR1/sTNFRI联合组.预处理造模完毕后2W做血液及心肌组织相关检测.结果：表明Ad-sCR1/sTNFRI能使心肌缺血再灌注损伤大鼠血清中LDH和MDA含量明显降低,SOD的活力明升高且都具有显著性差异;Ad-sCR1/sTNFRI组使Cx43表达、分布和改善明显优于模型组且接近于正常组.结论：Ad-sCR1/sTNFRI预处理后从而改善了细胞间的耦联与传导,保证了动作电位的协同扩布,消除了折返性心律失常的病理基础.

摘要： 本研究通过使用AdEasy重组腺病毒系统，成功构建了含有鹅细小病毒VP3基因的穿梭转移载体pshuttle-VP3，并通过菌内同源重组技术，与骨架载体在BJ5183感受态菌中进行同源重组，简化了重组腺病毒载体的构建过程，提高了重组的成功率。重组腺病毒还可进行多途径免疫，如滴鼻点眼、气雾免疫等。本实验利用AdEasy腺病毒系统(该系统用的载体是缺失E11E3区的复制缺陷型病毒载体)，构建了包含GPVVP3基因的重组腺病毒载体质粒，并用脂质体法转染到含有腺病毒E1基因的293细胞中，对重组腺病毒进行包装。当病毒传至第10代时，提取病毒DNA，测序结果表明插入基因未发生突变，显示该重组腺病毒具有一定的遗传稳定性。IFA实验检测，通过对荧光的观察，证实该重组腺病毒感染293细胞后成功的表达了VP3蛋白。

摘要： 本研究设计构建了季节性流感H3亚型重组腺病毒疫苗。通过RT-PCR、间接免疫荧光、Western Blot等方法检测其抗原的转录和反应原性，以期为后续动物免疫实验奠定基础。

摘要： 通过构建大鼠renalase重组腺病毒过表达载体,在5/6肾切除大鼠中通过尾静脉注射腺病毒补充renalase,观察是否能够减轻CKD大鼠的肾脏损伤并探讨其作用机制.

摘要： 目的：在卵巢癌COC1细胞中大量表达p53正向凋亡调控因子(PUMA),起到抑制COC1细胞的作用.方法：采用人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子调控的PUMA基因腺病毒载体(Ad-hTERT-PUMA)转染卵巢癌COC1细胞,通过细胞活性检测试剂盒和凋亡试剂盒研究COC1细胞的生长情况,同时分析表达PUMA的含量.结果：转染Ad-hTERT-PUMA后，PUMA大量表达，抑制COC1细胞生长，促进细胞凋亡。结论：Ad-hTERT-PUMA成功转染卵巢癌COC1细胞并大量表达，起到了抑制卵巢癌细胞增长的作用。

摘要： 目的:应用BMSCs构建的软骨组织经体内长期移植后逐渐出现血管侵入、矿化、形成骨组织.本研究观察了血管生成抑制因子ChM-I BMSCs体内构建软骨血管化的作用,为改善和提高BMSCs来源的软骨组织的表型稳定性提供新的方法.rn 方法:用RT-PCR的方法比较ChM-I基因在BMSCs和关节软骨细胞之间的表达差异.用RT-PCR的方法从兔的关节软骨组织中获得ChM-I基因克隆并构建高滴度的重组腺病毒Ad5-ChM-I.将转染重组腺病毒Ad5-ChM-I的BMSCs与珊瑚材料复合物移植到裸鼠皮下1～2个月后,通过大体标本、组织学观察研究体内构建的软骨组织的血管化的程度,分析软骨表型的变化.rn 结果:实验结果表明ChM-I在BMSCs中几乎不表达，而在软骨细胞中高表达，此外，两种细胞之间Ⅱ型胶原和蛋白聚糖的表达也存在显著的差异;转染Ad5-ChM-I的BMSCs在体内形成的软骨组织的血管化程度很低，而BMSCs在体内形成的软骨组织逐渐出现血管化、骨化;免疫荧光结果显示，ChM-I在转染后的BMSCs形成的软骨组织中有一定的表达分布，而在未转染细胞形成的组织中无表达。rn 结论: ChM-I基因转染可以抑制BMSCs构建组织工程软骨的血管化，有益于维持软骨组织表型的稳定。

摘要： 构建荷载有在SLPI启动子调控下的靶向EGFR的人工microRNA的重组腺病毒载体,并研究其安全性及对喉癌细胞的体内外抑制作用.重组腺病毒Ad-SLPI-EGFRamiR和Ad-SLPI-GFP均能有效感染Hep-2细胞，并表达相应的基因，具有良好的喉癌组织特异性。重组腺病毒Ad-SLPI-EGFRamiR在体外能显著地特异性抑制喉癌细胞的生长，而对正常细胞抑制作用较低。在荷瘤裸鼠模型中，重组腺病毒Ad-SLPI-EGFRamiR有抑制肿瘤组织生长的趋势，并且与吉非替尼相比具有较高的安全性。

摘要： 本发明公开了重组溶瘤腺病毒、用于制备该重组溶瘤腺病毒的重组溶瘤腺病毒载体及其构建方法和应用，所述重组溶瘤腺病毒载体的构建方法包括以下步骤：在腺病毒质粒中引入编码RGD肽的基因，构成靶向性骨架质粒；将shRNA抗肿瘤干细胞标志分子ALDH1A1的基因序列以及促凋亡基因PUMA的基因序列连接至第一穿梭质粒，构成第二穿梭质粒；将人端粒逆转录酶启动子连接至第二穿梭质粒，构成第三穿梭质粒；将第三穿梭质粒与靶向性骨架质粒在大肠杆菌中重组为重组溶瘤腺病毒载体；该方法构建出的重组溶瘤腺病毒载体线性化后转染至病毒包装细胞中进行包装、扩增、纯化后获得重组溶瘤腺病毒，从而能够有效的识别并杀死多种恶性肿瘤的肿瘤干细胞和普通肿瘤细胞。

摘要： 本发明公开了重组溶瘤腺病毒、用于制备该重组溶瘤腺病毒的重组溶瘤腺病毒载体及其构建方法和应用，所述重组溶瘤腺病毒载体的构建方法包括以下步骤：在腺病毒质粒中引入编码RGD肽的基因，构成靶向性骨架质粒；将shRNA抗肿瘤干细胞标志分子ALDH1A1的基因序列以及促凋亡基因PUMA的基因序列连接至第一穿梭质粒，构成第二穿梭质粒；将人端粒逆转录酶启动子连接至第二穿梭质粒，构成第三穿梭质粒；将第三穿梭质粒与靶向性骨架质粒在大肠杆菌中重组为重组溶瘤腺病毒载体；该方法构建出的重组溶瘤腺病毒载体线性化后转染至病毒包装细胞中进行包装、扩增、纯化后获得重组溶瘤腺病毒，从而能够有效的识别并杀死多种恶性肿瘤的肿瘤干细胞和普通肿瘤细胞。

摘要： 本发明提供了含有编码狂犬病病毒抗原的插入DNA顺序的重组腺病毒DNA顺序和结合该DNA顺序的重组体腺病毒。;本发明还提供了含有有效量的重组体腺病毒和药物上可接受的赋形剂的疫苗和使哺乳动物对由狂犬病病毒诱发的疾病产生免疫能力的方法，包括将病毒或疫苗施用于哺乳动物。

摘要： 本发明公开了一种表达非洲猪瘟病毒p72、B602L蛋白的重组腺病毒载体、重组腺病毒及构建方法，该重组腺病毒感染细胞后可以同步表达非洲猪瘟p72、B602L蛋白，B602L通过自裂解2A信号肽与p72串联表达。本发明构建了能同时表达p72、B602L蛋白的重组腺病毒载体，使用该载体与腺病毒骨架系统共转染细胞后获得可表达非洲猪瘟病毒p72、B602L蛋白的重组腺病毒，使用该重组腺病毒免疫试验动物后可以刺激试验动物产生特异性的抗体，为非洲猪瘟疫苗的开发提供了新的试验数据。

摘要： 本发明公开了一种表达非洲猪瘟病毒p34基因的重组腺病毒载体、重组腺病毒、方法及应用，其中，所述表达非洲猪瘟病毒p34基因的重组腺病毒载体包括腺病毒骨架载体和插入腺病毒骨架载体多克隆位点的非洲猪瘟病毒p34基因，所述p34基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，所述腺病毒骨架载体为pAd5；其中，所述重组腺病毒由本发明所公开的重组腺病毒载体转染哺乳动物细胞所获得。本发明首次利用重组腺病毒表达系统表达非洲猪瘟病毒的p34蛋白，实现了p34蛋白的高水平表达，为非洲猪瘟病毒核酸疫苗的研制提供了病毒模型，为进一步开发基因工程疫苗奠定了基础。

摘要： 本发明提供了一种表达非洲猪瘟病毒EP402R基因重组腺病毒载体、构建方法及重组腺病毒制备方法，属于基因工程技术领域。本发明提供一种表达EP402R基因重组腺病毒质粒pAD‑EP402R，以pAD‑EF1α‑GFP腺病毒表达载体为基础，在多克隆位点处引入EP402R基因。本发明还提供了表达EP402R基因的重组腺病毒的制备方法，利用构建得到的pAD‑EP402R质粒与腺病毒包装体系PEI混合，实现腺病毒包装过程，得到能够直接感染真核细胞的重组腺病毒，从而实现了EP402R基因在真核细胞中正常表达的目的，为研究表达EP402R基因重组腺病毒载体候选疫苗奠定基础。

摘要： 本发明提供了一种表达非洲猪瘟病毒EP153R基因重组腺病毒载体、构建方法及重组腺病毒制备方法，属于基因工程技术领域。该方法利用腺病毒穿梭载体 pKO‑FH、pAD‑EF1a‑GFP，经一系列中间过程，得到重组腺病毒表达质粒pAD‑EP153R。将最后得到的线性化重组腺病毒载体质粒转染 HEK293 细胞；根据腺病毒感染形成的细胞病变筛选重组病毒，最终实现腺病毒包装过程，并通过扩增、浓缩和鉴定得到能够直接感染真核细胞的重组腺病毒，从而实现了EP153R基因在真核细胞中正常表达的目的，为研究基于表达EP153R的腺病毒载体疫苗奠定基础。

摘要： 本发明提供了一种表达非洲猪瘟病毒B646L基因重组腺病毒载体、构建方法及重组腺病毒制备方法，属于基因工程技术领域。该方法利用腺病毒穿梭载体pKO‑FH、pAD‑EF1a‑GFP，经一系列中间过程，得到重组腺病毒表达质粒pAD‑B646L。将最后得到的线性化重组腺病毒载体质粒转染HEK293细胞；根据腺病毒感染形成的细胞病变筛选重组病毒，最终实现腺病毒包装过程，并通过扩增、浓缩和鉴定得到能够直接感染真核细胞的重组腺病毒，从而实现了B646L基因在真核细胞中正常表达的目的，为研究基于表达B646L的腺病毒载体疫苗奠定基础。

摘要： 本发明提供了一种表达非洲猪瘟病毒CP204L基因重组腺病毒载体、构建方法及重组腺病毒制备方法，属于基因工程技术领域。该方法利用腺病毒穿梭载体pKO‑FH、pAD‑EF1a‑GFP，经一系列中间过程，得到重组腺病毒表达质粒pAD‑CP204L。将最后得到的线性化重组腺病毒载体质粒转染HEK293细胞；根据腺病毒感染形成的细胞病变筛选重组病毒，最终实现腺病毒包装过程，并通过扩增、浓缩和鉴定得到能够直接感染真核细胞的重组腺病毒，从而实现了CP204L基因在真核细胞中正常表达的目的，为研究基于表达CP204L的腺病毒载体疫苗奠定基础。

摘要： 本发明提供了一种表达非洲猪瘟病毒E183L基因重组腺病毒载体、构建方法及重组腺病毒制备方法，属于基因工程技术领域。本发明提供一种表达E183L基因重组腺病毒质粒pAD‑E183L，以pAD‑EF1α‑GFP腺病毒表达载体为基础，在多克隆位点处引入E183L基因。本发明还提供了表达E183L基因的重组腺病毒的制备方法，利用构建得到的pAD‑E183L质粒与腺病毒包装体系PEI混合，实现腺病毒包装过程，得到能够直接感染真核细胞的重组腺病毒，从而实现了E183L基因在真核细胞中正常表达的目的，为研究表达E183L基因重组腺病毒载体候选疫苗奠定基础。