基因疫苗

摘要： 1巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)感染现状CMV感染是一个被忽视的重大公共卫生问题,全球近80%人口存在CMV感染,感染与地理位置、种族和经济状况有关。在发达国家,CMV感染率低于发展中国家,育龄期女性CMV血清特异性抗体阳性率为41%~50%,新生儿先天性CMV感染率为0.5%~1%。

摘要： 目的:比较不同免疫途径下防龋疫苗pVAX1-GbpA/GBD聚乳酸乙醇酸-聚乙二醇-聚乳酸乙醇酸(PLGA-PEG-PLGA)水凝胶免疫兔后的免疫效应。方法:将重组质粒pVAX1-GbpA/GBD与空载体质粒pVAX1分别与PLGA-PEG-PLGA水凝胶震荡混匀。28只兔子随机分为7组:股四头肌注射疫苗组、口服疫苗组、鼻腔滴注疫苗组和颌下腺区皮下注射疫苗组、阴性对照组1股四头肌注射空载质粒pVAX1的水凝胶组、阴性对照组2口服空载质粒pVAX1的水凝胶组、空白对照组股四头肌注射生理盐水组。相同剂量进行3次免疫,第1次免疫1周后进行第2次免疫,2周后第3次免疫。采用酶联免疫吸附试验检测免疫前后唾液中和血清中的特异性IgA和IgG型抗GTF抗体水平。免疫组织化学法观察注射部位pVAX1-GbpA/GBD蛋白的阳性表达。结果:(1)防龋基因疫苗pVAX1-GbpA/GBD水凝胶经不同途径免疫兔后,免疫后2周4组防龋基因疫苗组的唾液中特异性IgA抗体和IgG抗体水平显著升高(P0.05)。(2)免疫后2周4组防龋基因疫苗组的血清中特异性IgA抗体和IgG抗体水平显著升高(P<0.05);IgG型抗GTF抗体水平在第8周达到最高,口服组在第3、6、10周IgG型抗GTF抗体水平高于其它6组(P<0.05);颌下腺注射组在第4、8周IgG型抗GTF抗体水平高于其它6组(P<0.05)。(3)免疫组织化学染色结果显示4组防龋基因疫苗组的免疫部位可见pVAX1-GbpA/GBD目的蛋白的阳性表达,口服疫苗组的小肠黏膜部位的上皮细胞胞浆和颌下腺注射组的导管区域的细胞胞浆内中pVAX1-GbpA/GBD蛋白染色明显,表达强烈。结论:防龋基因疫苗pVAX1-GbpA/GBD水凝胶经4种途径免疫兔后均能诱导兔机体产生有效的免疫反应且维持较长时间,其中口服组与颌下腺注射组诱导的抗体水平更佳。

摘要： 在去年11月号《軌鱼能重写基因》一文中,你们解释了旣鱼这种动物能够改写其信使RNA来生产不同的蛋白质。虽说这种过程很少出现在人类身上,但通过基因疫苗进入人体的信使RNA是否可能意外改变或生成一种有潜在危险的新蛋白质?

摘要： 目的:制备弓形虫棒状体蛋白47(ROP47)的DNA疫苗.方法:制备ROP47目的基因的重组真核表达质粒(pROP47),利用试剂盒制备大量重组质粒,质粒免疫小鼠后取血液和脾脏,检测小鼠血液中抗体浓度及脾脏中细胞因子水平,包囊攻击实验后检测小鼠脑内弓形虫包囊的数量.结果:与其他组小鼠相比,pROP47免疫组可产生更高水平的IgG抗体(P<0.05).pROP47免疫的小鼠脑内包囊数量明显少于其他组(P<0.05).结论:弓形虫pROP47基因疫苗对小鼠具有部分保护作用.

摘要： 腺病毒载体是目前应用最为广泛的基因治疗病毒载体之一。相较其他病毒载体,腺病毒具有较高的基因转导效率,广泛的组织亲和性,不整合入宿主基因组等优点。腺病毒可以被改造为复制缺陷病毒载体和选择性复制的溶瘤病毒载体。腺病毒载体较强的免疫原性使其可以被应用于基因疫苗和抗癌治疗中。目前众多的临床试验都证实了腺病毒载体在上述治疗试验中的安全性和有效性。

摘要： 宫颈癌是妇科三大恶性肿瘤之一,其高发生率、高复发率、高转移率使其成为很多研究的重点.研究已明确持续性人类乳头瘤状病毒(human papilloma virus,HPV)感染,尤其是高危型HPV感染是宫颈癌发生的主要病因.目前常用的治疗方法包括:手术、放疗、化疗、免疫治疗等.而HPV基因疫苗,尤其是以E7基因为靶基因的疫苗,能够诱导特异性细胞免疫反应,控制肿瘤生长,成为目前宫颈癌治疗方法的研究热点.但是基因疫苗应用于人体时往往存在免疫应答减弱的问题,而利用白细胞介素-15 (interleukin-15,IL-15)作为基因疫苗的佐剂,促进抗原特异性免疫应答,能够显著提高免疫原性.文章就IL-15联合HPV基因疫苗治疗宫颈癌的应用进展进行综述,探讨其应用的可行性及对宫颈癌免疫治疗的价值.

摘要： 目的 观察牙周炎基因疫苗pVAX1-血凝集素黏附结构域(HA2)-菌毛蛋白(FimA)、pVAX1-HA2-FimA/白细胞介素(IL)-15经鼻黏膜免疫SD大鼠后的免疫原性及其目的蛋白在免疫部位的表达.方法 32只SD大鼠分为4组,A组:pVAX1-HA2-FimA组;B组:pVAX1-HA2-FimA/IL-15组;C组:pVAX1组;D组:生理盐水组,共免疫3次.利用酶联免疫吸附实验(ELISA)测定免疫后大鼠唾液分泌型IgA(sIgA)抗体水平,通过免疫组织化学检测鼻黏膜目的蛋白的表达.结果 A、B组基因疫苗免疫SD大鼠,唾液标本中sI-gA型抗HA2抗体和抗FimA抗体水平在免疫第1周开始上升,2～5周逐步上升,于第5周达到高峰,自第6周开始缓慢下降,第9周抗体基本降到免疫前水平.C组及D组的抗体水平较低且无明显起伏变化.含有IL-15免疫佐剂重组质粒免疫组可诱导更高水平的抗体反应.免疫组织化学观察到鼻黏膜组织黏膜固有层存在目的蛋白的表达;HA2蛋白主要在细胞质中表达,FimA蛋白则分布在细胞质及细胞间质中.结论 牙周炎基因疫苗能够成功诱导实验大鼠共同黏膜免疫系统产生免疫应答,具有免疫原性.IL-15作为牙龈卟啉单胞菌基因疫苗的佐剂可增强免疫效果.

摘要： 本文就生长抑素基因疫苗的发展历程、其在提高动物增重效果的应用研究以及免疫程序的优化等方面进行文献综述,为促进生长抑素基因疫苗的深入研究与推广应用提供参考依据.

摘要： 自发病犬中分离到1株细小病毒,提取CPV的基因组DNA为模板,经PCR扩增出VP1全基因并进行序列测定,与BR8155-00株VP1全基因序列和氨基酸序列相比较,它们的核苷酸同源性为99.47％,氨基酸同源性99.17％.将VP1基因克隆到真核表达质粒pcDNA3中,构建了CPV VP1基因的真核表达质粒pcDNA3-VP1.用制备的基因疫苗免疫Balb/c小鼠,免疫三次后,间接ELISA法检测免疫小鼠,结果表明,免疫小鼠可以产生免疫应答.免疫鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞在PEG4000作用下融合,经间接ELISA法筛选,获得三株稳定分泌抗犬细小病毒VP1蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为A8、F4和D5,用间接ELISA方法测定杂交瘤细胞培养上清,效价为1∶16至1∶32之间.接种小鼠腹腔产生单抗腹水,腹水的ELISA效价为1∶2560至1∶5120之间.

摘要： 乳制品作为一种营养丰富、全面、消化吸收率高的优质液体食品,越来越受到广大消费者的喜爱,并受到普遍关注,如何提高国内乳品质和泌乳性能的研究也是关注热点之一.本综述通过对催乳素、泌乳调控机制、泌乳影响因素,引入生长抑素基因疫苗对泌乳性能的改进提高,探讨生长抑素基因疫苗在动物繁殖泌乳性状的研究发展.

摘要： 肿瘤治疗性疫苗是利用肿瘤细胞或肿瘤抗原物质诱导机体的特异性细胞免疫和体液免疫反应,增强机体的免疫功能,从而抑制肿瘤生长及复发转移.基因疫苗通过某种载体将治疗基因导入到细胞或组织中,使其表达治疗基因,从而达到治疗肿瘤的目的.目前常用的载体有病毒类载体和非病毒类载体，在病毒载体中腺病毒载体具有较高的转染效率，其构建、制备、扩增相对简便，且病毒滴度较高，已经成为了基因治疗研究及临床试验中应用最广的病毒载体之一。人类腺病毒有A, B, C, D,E, F 6个不同亚属，其中腺病毒C亚属中的5型( Ad5)在基因治疗中应用最多。为了提高腺病毒介导基因治疗的疗效，研究者们利用肿瘤细胞特异启动子调控病毒复制所必需基因的表达，构建肿瘤靶向性溶瘤腺病毒，使其能在肿瘤细胞中特异性复制，导致肿瘤细胞的裂解和死亡。研究发现，癌胚抗原(CEA)阳性肿瘤瘤谱广，发病率高，其中90%左右的消化道恶性肿瘤、70%左右的非小细胞肺癌和50%左右的乳腺癌均为CEA阳性肿瘤，因此，利用CEA启动子调控腺病毒复制必需基因E1A的表达可获得相对特异的肿瘤靶向作用，从而达到高效、安全的抗癌目的。

摘要： 目的:脑膜炎球菌(MenB)外膜蛋白fHbp是一种潜在的理想疫苗,本文旨在利用大肠杆菌原核表达系统获得该蛋白.rn 方法:根据GenBank中已知基因序列(HQ998858.1)设计引物通过PCR的方法从MenB毒株(53210)扩增fHbp基因,并连入原核表达载体pEASY-E1中,重组子经验证正确后转化大肠杆菌BL21感受态细胞后,优化诱导的IPTG浓度、诱导时间、诱导温度条件.rn 结果:经PCR检测结果表明成功的构建了原核表达载体pEASY-E1-rfHbpo.SDS-PAGE结果表明不同诱导条件中，诱导表达在时问为6h,温度37度，IPTG浓度为0.5mol/L时，重组蛋白fHby表达量最高。Western-Blot结果进一步证明大小为27kDa的蛋白条带为目的蛋白。并通过Ni-NTA亲和层析获得纯化的rfhbP蛋白。rn 结论:通过大肠杆菌原核表达成功获得了rfhbP重组蛋白，为进一步验证rfhbP生物学活性及MenB疫苗开发奠定基础。

摘要： 目的:脑膜炎球菌(MenB)外膜蛋白fHbp是一种潜在的理想疫苗,本文旨在利用大肠杆菌原核表达系统获得该蛋白.rn 方法:根据GenBank中已知基因序列(HQ998858.1)设计引物通过PCR的方法从MenB毒株(53210)扩增fHbp基因,并连入原核表达载体pEASY-E1中,重组子经验证正确后转化大肠杆菌BL21感受态细胞后,优化诱导的IPTG浓度、诱导时间、诱导温度条件.rn 结果:经PCR检测结果表明成功的构建了原核表达载体pEASY-E1-rfHbpo.SDS-PAGE结果表明不同诱导条件中，诱导表达在时问为6h,温度37度，IPTG浓度为0.5mol/L时，重组蛋白fHby表达量最高。Western-Blot结果进一步证明大小为27kDa的蛋白条带为目的蛋白。并通过Ni-NTA亲和层析获得纯化的rfhbP蛋白。rn 结论:通过大肠杆菌原核表达成功获得了rfhbP重组蛋白，为进一步验证rfhbP生物学活性及MenB疫苗开发奠定基础。

摘要： 目的:脑膜炎球菌(MenB)外膜蛋白fHbp是一种潜在的理想疫苗,本文旨在利用大肠杆菌原核表达系统获得该蛋白.rn 方法:根据GenBank中已知基因序列(HQ998858.1)设计引物通过PCR的方法从MenB毒株(53210)扩增fHbp基因,并连入原核表达载体pEASY-E1中,重组子经验证正确后转化大肠杆菌BL21感受态细胞后,优化诱导的IPTG浓度、诱导时间、诱导温度条件.rn 结果:经PCR检测结果表明成功的构建了原核表达载体pEASY-E1-rfHbpo.SDS-PAGE结果表明不同诱导条件中，诱导表达在时问为6h,温度37度，IPTG浓度为0.5mol/L时，重组蛋白fHby表达量最高。Western-Blot结果进一步证明大小为27kDa的蛋白条带为目的蛋白。并通过Ni-NTA亲和层析获得纯化的rfhbP蛋白。rn 结论:通过大肠杆菌原核表达成功获得了rfhbP重组蛋白，为进一步验证rfhbP生物学活性及MenB疫苗开发奠定基础。

摘要： 目的:脑膜炎球菌(MenB)外膜蛋白fHbp是一种潜在的理想疫苗,本文旨在利用大肠杆菌原核表达系统获得该蛋白.rn 方法:根据GenBank中已知基因序列(HQ998858.1)设计引物通过PCR的方法从MenB毒株(53210)扩增fHbp基因,并连入原核表达载体pEASY-E1中,重组子经验证正确后转化大肠杆菌BL21感受态细胞后,优化诱导的IPTG浓度、诱导时间、诱导温度条件.rn 结果:经PCR检测结果表明成功的构建了原核表达载体pEASY-E1-rfHbpo.SDS-PAGE结果表明不同诱导条件中，诱导表达在时问为6h,温度37度，IPTG浓度为0.5mol/L时，重组蛋白fHby表达量最高。Western-Blot结果进一步证明大小为27kDa的蛋白条带为目的蛋白。并通过Ni-NTA亲和层析获得纯化的rfhbP蛋白。rn 结论:通过大肠杆菌原核表达成功获得了rfhbP重组蛋白，为进一步验证rfhbP生物学活性及MenB疫苗开发奠定基础。

摘要： 隐孢子虫致病的关键一步是其卵囊释放的子孢子附着和侵入宿主上皮细胞并形成带虫空泡.隐孢子虫顶体复合物中的分泌器官释放的糖蛋白复合物可促进卵囊对宿主细胞的附着和侵入.通过对环子孢子样糖蛋白外抗原(CSL),糖蛋白GP900,糖蛋白gp15/gp45,糖蛋白p23等隐孢子虫表面粘附相关蛋白进行综述.了解候选靶抗原的功能特性和结构是制备疫苗和特异性抗体的关键.

摘要： 隐孢子虫致病的关键一步是其卵囊释放的子孢子附着和侵入宿主上皮细胞并形成带虫空泡.隐孢子虫顶体复合物中的分泌器官释放的糖蛋白复合物可促进卵囊对宿主细胞的附着和侵入.通过对环子孢子样糖蛋白外抗原(CSL),糖蛋白GP900,糖蛋白gp15/gp45,糖蛋白p23等隐孢子虫表面粘附相关蛋白进行综述.了解候选靶抗原的功能特性和结构是制备疫苗和特异性抗体的关键.

摘要： 本发明公开了抗HIV‑1基因、该基因的应用、具有该基因的DC疫苗及疫苗制备方法，所述基因由GM‑CSF核酸人工序列与gp120‑CD4模块串联组成，所述gp120‑CD4模块含有以下基因片段中的至少一条；(1)gp120(B)核酸人工序列、G4S核酸人工序列、CD4核酸人工序列；(2)gp120(C)核酸人工序列、G4S核酸人工序列、CD4核酸人工序列；(3)gp120(AE)核酸人工序列、G4S核酸人工序列、CD4核酸人工序列。本发明为将gp120与CD4类似物或CD4“迷你蛋白”连接在一起，使其构象发生改变并在CD4结合位点上暴露出抗原表位，使抗体识别并与暴露出的抗原相结合，从而刺激机体产生细胞免疫和体液免疫反应。

摘要： 本发明公开了一种蛋白及其编码基因以及疫苗和它们在制备用于预防寨卡病毒感染的疫苗中的应用。具体地，本发明公开了一种蛋白，其中，该蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。本发明还公开了编码上述蛋白的基因，和含有所述基因的表达盒、重组载体、转基因细胞系或重组菌，以及含有上述蛋白作为活性成分的疫苗，还公开了它们在制备用于预防寨卡病毒感染的疫苗中的应用。将本发明提供的蛋白制备成疫苗注射入小鼠体内，能够产生高效价抗体，该抗体对寨卡病毒具有很强的中和作用，免疫原性良好；同时，本发明提供的疫苗由于不含活病毒，所以其安全性较高，因此，将本发明提供的蛋白制成疫苗对预防寨卡病毒感染具有良好的应用前景。

摘要： 本发明公开了抗HIV‑1基因、该基因的应用、具有该基因的DC疫苗及疫苗制备方法，所述基因由GM‑CSF核酸人工序列与gp120‑CD4模块串联组成，所述gp120‑CD4模块含有以下基因片段中的至少一条；(1)gp120(B)核酸人工序列、G4S核酸人工序列、CD4核酸人工序列；(2)gp120(C)核酸人工序列、G4S核酸人工序列、CD4核酸人工序列；(3)gp120(AE)核酸人工序列、G4S核酸人工序列、CD4核酸人工序列。本发明为将gp120与CD4类似物或CD4“迷你蛋白”连接在一起，使其构象发生改变并在CD4结合位点上暴露出抗原表位，使抗体识别并与暴露出的抗原相结合，从而刺激机体产生细胞免疫和体液免疫反应。

摘要： 本发明公开的是一种基于反向疫苗学技术的猪肺炎支原体多表位基因工程亚单位疫苗的制备方法及其应用，通过反向疫苗学的方法筛选了猪肺炎支原体基因组中的毒力因子，从筛选出的毒力因子中筛选出可以结合MHC‑I/II类分子的抗原表位。将抗原表位整合为重组蛋白MhpMEV并与佐剂混合，获得猪肺炎支原体多表位基因工程亚单位疫苗，具有安全性好、成本低、使用简便及易区分感染动物和免疫动物的优势而具有良好的应用前景。应用反向疫苗学方法开发疫苗不需要培养病原微生物，并且该病原体在不同时期和环境表达的抗原蛋白都会被分析作为候选抗原，因此可以提高疫苗的普遍适用性，对一些变异毒株也能够发挥保护作用。

摘要： 本发明提供了一种制备防治牛、羊棘球蚴病多表位重组疫苗的基因、蛋白质、疫苗和应用，属于动物疫苗制备技术领域，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。本发明提供的基因制备得到的多表位重组疫苗具有良好的免疫原性和安全性，且目的蛋白表达量高，抗原纯度高，制备工艺简单，不使用尿素，安全环保，提高了生产效率，具有重要的工业和研究价值。

摘要： 本发明提供了SEQ ID NO.2所示核苷酸序列或其简并序列所编码的禽减蛋综合征病毒tFiber蛋白片段，以及该蛋白片段制备的疫苗组合物，该片段具有良好的免疫原性，其低免疫量即能产生良好的免疫效果，保护率为100％，其免疫原性较Fiber全长蛋白更好，并能与多种抗原制备联苗，对鸡和鸭群产生完全保护。

摘要： 本发明生长抑素基因疫苗(DNA疫苗)的基因工程体，属生物新技术领域。其构建过程是：人工合成生长抑素(SS)基因，构建pUC12-SS质粒。并将其改造成pUC12-SS2质粒。然后，从pWR13-HBs/6质粒切下HBs片段，与切开的pUC12/SS2连接，构建成带HBs/SS融合基因的pUC13/-HBs/SS质粒。最后用PCR扩增出该质粒中的HBs/SS与pcDNA3.1质粒连接，构建成pcDNA3.1-HBs/SS质粒。将其转化感受态大肠肝菌，即成本发明的基因工程体-Ecoli-pcDNA3.1-HBs/SS。图为：pcDNA3.1质粒的构建。

摘要： 本发明涉及一种以FAPα的CTL表位肽为基础的肽类疫苗和微基因疫苗的应用，属于以成纤维细胞激活蛋白α为靶点的肿瘤肽类疫苗和DNA疫苗领域。FAPα来源的抗肿瘤表位肽FAP.291及其模拟肽FAP.291I9和它们所构建的微基因DNA疫苗在制备肿瘤治疗性疫苗中的应用。本发明通过筛选鉴定确定了表位FAP.291和模拟表位FAP.291I9可以有效激活BALB/c小鼠特异性的CTL反应。本发明还涉及使用FAP.291和FAP.291I9小肽同佐剂联用方式及构建它们的微基因形式的疫苗在抗肿瘤中的应用。

摘要： 本发明生长抑素基因疫苗(DNA疫苗)的基因工程体,属生物新技术领域。其构建过程是:人工合成生长抑素(SS)基因,构建pUC12－SS质粒。并将其改造成pUC12－SS2质粒。然后,从pWR13－HBs/6质粒切下HBs片段,与切开的pUC12/SS2连接,构建成带HBs/SS融合基因的pUC13/－HBs/SS质粒。最后用PCR扩增出该质粒中的HBs/SS与pcDNA3.1质粒连接,构建成pcDNA3.1－HBs/SS质粒。将其转化感受态大肠肝菌,即成本发明的基因工程体－Ecoli－pcDNA3.1－HBs/SS。

摘要： 本发明畜禽去势基因疫苗(DNA疫苗)的基因工程体,属生物高新技术领域。其构建过程是:人工合成畜型的LHRH(M)和禽型LHRH(A)基因,构建pBS－LHRH质粒。然后从pWR－HBs质粒,切下HBs片段,将其插入pBS－LHRH质粒,构建成pBS－HBs/LHRH质粒。最后,用PCR从pBS－HBs/LHRH质粒中,扩增出HBs/LHRH融合基因片段,将其插入pcDNA3.1质粒,获得pcDNA3.1－HBs/LHRH(M)和pcDNA3.1－HBs/LHRH(A)2株重组质粒。分别转化大肠杆菌,即构建成本发明的基因工程体——Ecoli－pcDNA3.1－HBs/LHRH(M)和Ecoli－pcDNA3.1－HBs/LHRH(A)。图为:pcDNA3.1－HBs/LHRH重组质粒构建。