摘要:
为考察BMP-2(骨形态发生蛋白2,Bone Morphogenetic Protein 2,简称BMP-2)基因转染大鼠BMSCs(骨髓间充质干细胞,Bone Mesenchymal Stem Cells,简称BMSCs)目的基因表达及对BMSCs增殖的影响,通过实验将BMSCs分离培养并进行扩增,构建携带含有BMP-2基因的重组慢病毒表达载体,转染至BMSCs,利用倒置显微镜观察转染后绿色荧光蛋白基因的表达,通过RT-PCR(反转录聚合酶链反应,Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,简称RT-PCR)检测转染后细胞BMP-2的表达水平,采用蛋白质印迹法(Western Blotting)分析BMP-2在细胞内的表达情况,使用ELISA(酶联免疫吸附测定,Enzyme Linked Immunosorbent Assay,简称ELISA)测定细胞培养上清液中目的蛋白质量浓度,细胞毒性实验MTT(噻唑蓝3-(4,5)-dimethylthi-ahiazo(-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide,简称MTT)法测定BMSCs增殖能力。结果表明,实验成功构建了含有BMP-2基因的重组慢病毒表达载体,倒置荧光显微镜下观察到转染BMSCs发出稳定的绿色荧光信号,转染细胞的BMP-2 mRNA(Messenger RNA,信使核糖核酸)表达水平明显高于未转染细胞,转染细胞裂解液中检测出BMP-2条带,转染细胞的培养上清液中BMP-2值明显高于未转染细胞的。转染BMSCs的增殖速度显著高于空载体BMSCs和未转染BMSCs。