机械敏感离子通道PIEZO1通过YAP促进胶质瘤侵袭进展的研究

周丽丽; 刘振; 洪旋科; 赵培超; 孙红卫; 安吉洋

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目的探讨PIEZO1通过YAP传导机械力学信号促进胶质瘤侵袭进展的分子机制。方法（1）标本检测:选择郑州大学第一附属医院神经外科自2015年2月至2017年3月行胶质瘤切除术的94例患者标本行免疫组化染色,检测不同级别胶质瘤组织中PIEZO1表达。（2）细胞实验:不同基质硬度条件下培养人脑胶质瘤细胞系U87、U251,通过免疫荧光染色实验检测PIEZO1和YAP表达,Western blotting实验检测PIEZO1表达。（3）慢病毒转染后细胞实验:根据有无转染短发夹RNA（shRNA）慢病毒载体将细胞分为阴性对照组和sh-PIEZO1组,通过克隆形成实验、增殖、侵袭实验、Western blotting实验等方式研究PIEZO1在胶质瘤增殖、侵袭中的作用;同时采用Western blotting实验检测PIEZO1敲低后YAP、FAK、β1-整合素等力学信号通路蛋白的表达,采用RT-PCR法检测YAP下游靶基因CTGF、CYR61的表达,采用免疫荧光染色检测PIEZO1敲低后YAP的表达。结果（1）PIEZO1表达随胶质瘤级别升高而增高,且异柠檬酸脱氢酶（IDH）野生型患者中PIEZO1表达高于IDH突变型。（2）随着基质硬度增加,PIEZO1及YAP表达增加。Western blotting实验结果显示,与0.2 kPa组相比,16和64 kPa组基质培养细胞PIEZO1蛋白表达明显增高,差异有统计学意义（P＆0.05）。（3）PIEZO1敲低后,U87细胞形态变大、触角增多,U251细胞多呈较长梭形。与阴性对照组相比,sh-PIEZO1组细胞克隆数明显减少,各时间点增殖率明显降低,侵袭细胞计数明显减少,差异均有统计学意义（P＆0.05）。同时,与阴性对照组比较,sh-PIEZO1组细胞上皮标志物钙黏附蛋白E（E-cadhein）表达明显增加,间质标志物波形蛋白、Snail及Slug表达明显降低,差异均有统计学意义（P＆0.05）。最后,Western blotting、RT-PCR实验及免疫荧光实验发现,敲低PIEZO1显著增加了磷酸化（p）-YAP表达,降低了YAP胞核表达,下调了YAP下游靶基因Cyr61和CTGF表达,并且显著减低了β1-整合素和p-FAK水平;阴性对照组与sh-PIEZO1组组间差异均有统计学意义（P＆0.05）。结论 PIEZO1通过YAP调控胶质瘤对机械信号的反应,促进胶质瘤细胞增殖和侵袭,可以作为胶质瘤治疗的新靶点。

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来源
《中华神经医学杂志》 |2021年第2期||共页
作者
周丽丽; 刘振; 洪旋科; 赵培超; 孙红卫; 安吉洋;
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正文语种 chi
中图分类颅内肿瘤及脑肿瘤;
关键词
神经胶质瘤; 基质硬度; 机械敏感离子通道; YAP;

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