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miR-432与野生型胶质瘤的细胞增殖迁移、患者总生存期及基因表达的关系

         
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目的探讨微小RNA（miR）-432与异柠檬酸脱氢酶（IDH）野生型胶质瘤的细胞增殖迁移、患者总生存期及三基序蛋白质38（TRIM38）基因表达的关系。方法 （1）下载中国胶质瘤基因组图谱（CGGA）数据库中198例胶质瘤患者（81例IDH突变型、106例IDH野生型、11例未知型）的临床资料、miRNA表达芯片数据及5例非肿瘤对照脑组织样本的miRNA表达芯片数据,比较miR-432在不同IDH突变状态的胶质瘤亚型间及与非肿瘤对照样本间的表达差异。依据IDH野生型胶质瘤样本中miR-432表达水平的中位值,将患者分为miR-432高表达组（n=51）与miR-432低表达组（n=53）,采用Kaplan-Meier生存分析比较2组间总生存期的差异。采用单因素Cox回归分析和多因素Cox回归分析筛选IDH野生型胶质瘤患者总生存期的影响因素。应用Pearson相关性分析检验IDH野生型胶质瘤样本中miR-432与TRIM38基因表达水平的关系。（2）体外培养人胶质瘤细胞系U251,并分为miR-432无义序列对照组和miR-432类似物组。采用细胞计数试剂（CCK）-8法检测2组细胞培养第1～5天时的活性,采用Transwell小室实验检测2组细胞的迁移能力,采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测2组细胞中TRIM38 mRNA的表达水平。（3）分别将野生型及突变型含TRIM38 3’-末端非翻译区（3’-UTR）的pGL3荧光报告载体结合miR-432无义序列、miR-432类似物转染U251细胞,分为miR-432无义序列+野生型TRIM38 3’-UTR组、miR-432类似物+野生型TRIM38 3’-UTR组、miR-432无义序列+突变型TRIM38 3’-UTR组及miR-432类似物+突变型TRIM38 3’-UTR组,并应用酶标仪检测各组细胞的荧光素酶活性。结果 （1）与IDH突变型胶质瘤样本相比,IDH野生型胶质瘤样本中miR-432的表达水平明显降低,差异有统计学意义（P＆0.05）。miR-432低表达组的总生存期较miR-432高表达组明显缩短,差异有统计学意义（P＆0.05）。患者的年龄、肿瘤级别及miR-432表达分组与IDH野生型胶质瘤患者的总生存期相关（P＆0.05）,但miR-432表达分组并不是患者总生存期的独立影响因素（P＆0.05）。IDH野生型胶质瘤样本中miR-432与TRIM38 mRNA的表达水平呈负相关关系（r=-0.255,P=0.018）。（2）与无义序列对照组比较,miR-432类似物组培养第2～5天时的细胞活性明显降低,迁移细胞数目明显减少,TRIM38 mRNA表达水平明显降低,差异均有统计学意义（P＆0.05）。（3）miR-432类似物+野生型TRIM38 3’-UTR组的荧光素酶活性明显低于miR-432无义序列+野生型TRIM38 3’-UTR组细胞,差异有统计学意义（P＆0.05）。结论 miR-432在IDH野生型胶质瘤组织中表达降低,且与患者的预后不良有关;过表达miR-432能够抑制胶质瘤细胞的增殖迁移能力,这或许与其能特异性结合TRIM38基因并干扰该基因表达有关。

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