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PTEN基因逆转卵巢上皮性癌细胞耐药的机制研究

         
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目的通过检测 PTEN 基因在卵巢上皮性癌（卵巢癌）顺铂敏感细胞株 OV2008及OV2008配对的顺铂耐药细胞株 C13K 中的表达,探讨转染 PTEN 基因能否逆转 C13K 细胞对顺铂的耐药及其相关机制。方法半定量 RT-PCR 技术和蛋白印迹法检测 OV2008和 C13K 细胞中 PTENmRNA 和蛋白的表达。将野生型 PTEN 基因真核表达质粒在脂质体介导下转染 C13K 细胞,同时以转染空载体和未转染的 C13K 细胞作为对照,分别应用 RT-PCR 技术检测各组细胞 PTEN mRNA 表达的变化,应用蛋白印迹法检测各组细胞 PTEN、蛋白激酶 B（AKT）及磷酸化 AKT（p-AKT）蛋白表达的变化;四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法观察转染 VFEN 基因后 C13K 细胞对顺铂敏感性的变化,流式细胞仪分析顺铂作用后的细胞凋亡情况。结果 （1）PTEN mRNA 在 OV2008和 C13K 细胞中的表达水平分别为1.02±0.05和0.45±0.03,而 OV2008、C13K 细胞中 PTEN 蛋白的表达水平分别为1.02±0.07、0.55±0.03,两种细胞 PTEN mRNA 和蛋白的表达水平分别比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）。（2）PTEN 基因转染48 h 后,C13K 细胞中 PTEN mRNA、蛋白的表达水平分别为2.04±0.10和0.94±0.04,分别与转染空载体和未转染的 C13K 细胞比较,差异均有统计学意义（P＜0.01）;p-AKT 蛋白的表达水平（0.94±0.07）较转染空载体（1.66±0.10）和未转染（1.68±0.14）的 C13K 细胞显著降低（P＜0.05）。（3）转染 PTEN 基因的 C13K 细胞对顺铂的半数抑制浓度(IC50)为（7.2±0.3）μmol/L,明显高于转染空载体和未转染的 C13K 细胞[分别为（12.7±0.4）、（13.0±0.3）μmo]/L,P＜0.05]。（4）顺铂作用24 h 后,转染 PTEN 基因、转染空载体和未转染的 C13K 细胞的凋亡率分别为（41.7±0.9）%、（18.6±0.7）%和（15.3±0.8）%,前者明显高于后两者（P＜0.01）。结论 PTEN 基因在 OV2008细胞中的表达明显高于 C13K 细胞。转染野生型 PTEN 基因能有效提高C13K 细胞内 PTEN 基因的表达,并通过降低 C13K 细胞中 AKT 磷酸化的水平恢复 C13K 细胞对顺铂的敏感性。

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