CASC19调控miR-449b-5p表达对子宫颈癌细胞增殖、凋亡和辐射敏感性的影响

刘艳杰; 郭瑞霞; 韩丽萍; 顾浩; 刘明珠

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CASC19调控miR-449b-5p表达对子宫颈癌细胞增殖、凋亡和辐射敏感性的影响

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目的探讨癌易感性候选基因19（CASC19）调控微小RNA-449b-5p（miR-449b-5p）的表达后对子宫颈癌细胞增殖、凋亡和辐射敏感性的影响。方法（1）培养子宫颈癌细胞系HeLa细胞, 予不同剂量（分别为0、2、4、6、8 Gy）的X线照射, 实时荧光定量PCR技术检测HeLa细胞中CASC19 mRNA和miR-449b-5p的表达水平。（2）不同条件处理后HeLa细胞增殖、凋亡、辐射敏感性及其相关蛋白表达的检测, 其中, 不同处理条件包括沉默CASC19表达、过度表达miR-449b-5p、下调miR-449b-5p并沉默CASC19表达, 相关蛋白包括细胞周期蛋白D1（cyclin D1）、活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（cleaved-caspase-3）和组蛋白变异体H2AX（γ-H2AX）;采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测细胞增殖情况, 流式细胞仪检测细胞凋亡情况, 细胞克隆形成实验检测细胞的辐射敏感性（以存活分数表示）。（3）采用双荧光素酶报告基因实验（结果以荧光素酶活性表示）和实时荧光定量PCR技术验证CASC19和miR-449b-5p之间的靶向调控关系。结果（1）随着X线照射剂量（0、2、4、6、8 Gy）的增加, HeLa细胞中CASC19 mRNA的表达水平逐渐升高（F=502.681, P=0.000）, miR-449b-5p的表达水平逐渐降低（F=202.936, P=0.000）。（2）沉默CASC19表达、过度表达miR-449b-5p后, HeLa细胞的存活率显著降低（P＆0.05）, 凋亡率显著升高（P＆0.05）, 存活分数显著降低（P＆0.05）, cyclin D1蛋白的表达水平显著降低（P＆0.05）, cleaved-caspase-3和γ-H2AX蛋白的表达水平显著升高（P＆0.05）;下调miR-449b-5p并沉默CASC19表达后, HeLa细胞的存活率显著升高（P＆0.05）, 凋亡率显著降低（P＆0.05）, 存活分数显著升高（P＆0.05）, cyclin D1、γ-H2AX蛋白的表达水平显著升高（P＆0.05）, cleaved-caspase-3的表达水平显著降低（P＆0.05）。（3）与对照比较, 过度表达miR-449b-5p可显著降低CASC19基因野生型HeLa细胞的荧光素酶活性（分别为1.00±0.09、0.37±0.05, P＆0.01）, 而对CASC19基因突变型HeLa细胞的荧光素酶活性无显著影响（分别为0.92±0.07、0.94±0.05, P＆0.05）。与对照比较, 沉默CASC19表达后HeLa细胞中miR-449b-5p的表达水平显著升高（分别为1.00±0.12、4.84±0.49, P＆0.05）, 过度表达CASC19后HeLa细胞中miR-449b-5p的表达水平显著降低（分别为1.00±0.09、0.38±0.04, P＆0.05）。结论 HeLa细胞中CASC19可负调控miR-449b-5p的表达, 下调miR-449b-5p表达可部分逆转沉默CASC19对HeLa细胞增殖、凋亡及辐射敏感性的影响。

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来源
《中华妇产科杂志》 |2020年第1期||共页
作者
刘艳杰; 郭瑞霞; 韩丽萍; 顾浩; 刘明珠;
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作者单位

郑州大学第一附属医院妇科;

郑州大学第一附属医院放射科;

郑州大学第一附属医院中医妇科;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类泌尿生殖器肿瘤;
关键词
宫颈肿瘤; RNA; 长链非编码; 微RNAs; 细胞增殖; 细胞凋亡;

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