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腺伴随病毒载体介导Kringle5基因治疗早产儿视网膜病变大鼠视网膜新生血管

摘要

目的观察腺伴随病毒载体介导血管抑素Kringle5基因对SD大鼠早产儿视网膜病变(ROP)模型视网膜新生血管的影响,探寻治疗ROP的新方法. 方法亚克隆构建pSNAV-Kringle5-gfp载体,腺伴随病毒包装形成rAAV-Kringle5-gfp.21只鼠高氧环境下建立ROP模型, 随机分为实验组和对照组(各21只眼).两组各取18只眼作视网膜组织切片;各剩3只眼作聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blotting检测.另设正常对照5只大鼠.实验组每只眼注入滴度为2.5×1012 vg/ml的rAAV-Kringle5-gfp 10 μl,对照组每只眼注入滴度为2.5×1011 vg/ml的rAAVLacZ 10 μl.荧光显微镜下观察目的基因在眼组织中的表达.12周后,麻醉下处死大鼠,行血管内皮细胞Ⅷ因子相关抗原染色、血管内皮细胞细胞核记数. 结果 pSNAV-Kringle5-gfp载体经测序正确;腺伴随病毒载体介导血管抑素Kringle5 在玻璃体腔及视网膜有大量表达;目的基因在mRNA水平及蛋白水平均有表达;实验组、阴性对照组视网膜表面内皮细胞细胞核分别为(19.954 2±3.825 7)、(7.335 2±2.731 3)个,两组比较差异有统计学意义(P<0.01). 结论腺伴随病毒载体介导血管抑素Kringle5对ROP视网膜新生血管具有抑制作用.

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