急性缺氧肺动脉平滑肌细胞线粒体活性氧变化的观察

杨朝; 耑冰; 张丽萍; 赵霞; 张建银; 葛利军; 吴昌归

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急性缺氧肺动脉平滑肌细胞线粒体活性氧变化的观察

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目的:观察急性缺氧时大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)线粒体活性氧(ROS)的变化.方法:分离并培养大鼠PASMCs,常氧(35℃、5％ CO2、21％ O2、74％ N2)和急性缺氧(35℃、5％ CO2、1％ O2、94％ N2)条件下,利用分子探针chloromethyl dichlorodihydrofluorescein diacetate (CM-H2 DCF/DA)和RedoxSensor Red CC-1通过激光共聚焦显微镜来检测细胞内ROS的生成量;直接分离线粒体,用线粒体电子传递链(ETC)复合物抑制剂通过荧光分光光度计检测线粒体ROS及其生成的具体位点.结果:急性缺氧细胞内ROS生成明显增加,其中缺氧组H2 O2较常氧组增加3.35倍(P＜0.01),而H2 O2及O2-较常氧组增加1.61倍(P＜0.01).与缺氧组比,用线粒体ETC复合物Ⅰ抑制剂MPP、复合物Ⅱ抑制剂NPA和TTFA及复合物Ⅲ前泛半醌位点抑制剂myxothiazol都能显著降低缺氧时PASMCs胞内ROS的生成量(分别降低60％、73％、75％和61％,P＜0.01);而复合物Ⅲ后泛半醌位点抑制剂antimycin A及复合物Ⅳ抑制剂NaN3对ROS的生成无明显影响(升高13％和9.1％,P＞0.05).直接检测线粒体ROS与测定细胞内ROS结果一致.结论:急性缺氧PASMCs线粒体ROS(主要是H2 O2)的生成量明显增加;其生成位点主要是线粒体ETC复合物Ⅰ、Ⅱ及Ⅲ前泛半醌位点,而与复合物Ⅲ后泛半醌位点和ⅣV位点无明显关系.

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来源
《中国病理生理杂志》 |2014年第11期|2009-2014|共6页
作者
杨朝; 耑冰; 张丽萍; 赵霞; 张建银; 葛利军; 吴昌归;
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作者单位

宁夏人民医院总院呼吸内科,宁夏银川750011;

宁夏人民医院总院呼吸内科,宁夏银川750011;

宁夏人民医院总院呼吸内科,宁夏银川750011;

宁夏人民医院总院呼吸内科,宁夏银川750011;

宁夏人民医院总院呼吸内科,宁夏银川750011;

宁夏人民医院心血管内科,宁夏银川750011;

第四军医大学西京医院呼吸内科,陕西西安710000;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类窒息、缺氧;
关键词
活性氧; 缺氧; 线粒体; 肺动脉平滑肌细胞; 缺氧肺血管收缩;

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