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抑制小鼠HL-1心肌细胞桥粒斑蛋白基因表达对缝隙连接蛋白43结构和功能的影响

         
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摘要

目的:采用基因沉默技术抑制小鼠HL-1心肌细胞桥粒斑蛋白(DSP)基因表达以明确DSP与缝隙连接蛋白43(Cx43)的结构和功能关系.方法:用基因沉默技术抑制DSP基因的表达,Western blotting和流式细胞术检测HL-1细胞DSP和Cx43蛋白的表达,用双免疫荧光方法检测DSP与Cx43蛋白的表达与定位情况,并用划痕标记染料示踪技术检测细胞缝隙连接通讯状况.结果:与空白组和对照组相比,siRNA-DSP组的DSP和Cx43蛋白表达量降低(P＜0.05).免疫荧光检测发现空白组和对照组DSP与Cx43蛋白存在共定位情况,而siRNA-DSP组DSP和Cx43蛋白共定位遭到破坏,Cx43蛋白出现再分布,在细胞内检测到Cx43蛋白,并且划痕标记染料示踪技术检测发现siRNA-DSP组Lucifer yellow通过HL-1细胞缝隙连接的传输功能降低.结论:DSP表达抑制不仅使Cx43出现再分布,而且影响缝隙连接传导功能.%AIM:To evaluate the content,distribution,and function of connexin 43 (Cx43) gap junctions in mouse HL-1 myocardial cells under the condition of desmoplakin (DSP) silencing.METHODS:The technique of RNA interference was used to inhibit the protein expression of DSP in HL-1 cells.The protein expression of DSP and Cx43 was analyzed by Western blotting and flow cytometry.The immunofluorescence staining was used to detect the distribution and co-localization of DSP and Cx43.The techniques of scrape loading and dye transfer were also used to determine the function of Cx43 gap junctions.RESULTS:Compared with non-treatment group and negative control group,the protein expression of DSP and Cx43 was reduced (P ＜ 0.05).Co-localization to the site of cell-cell contact was apparent in untreated and control conditions,but loss of DSP expression induced by siRNA-DSP correlated with a drastic redistribution of Cx43.Instead,Cx43 was found mostly within the intracellular space.The results of dye transfer assay indicated a significant decrease in the function of Cx43 gap junctions of the cells treated with siRNA-DSP.CONCLUSION:Inhibition of DSP expression induces redistribution of Cx43 and decrease in dye coupling between cells.

著录项

  • 来源
    《中国病理生理杂志》 |2013年第6期|982-987|共6页
  • 作者

    张黔桓; 邓春玉; 饶芳; 刘晓颖; 麦丽萍; 朱杰宁; 谭虹虹; 吴书林;

  • 作者单位

    广东省人民医院心内科,广东省心血管病研究所,广东广州510080;

    广东省人民医院心内科,广东省心血管病研究所,广东广州510080;

    广东省人民医院心内科,广东省心血管病研究所,广东广州510080;

    广东省人民医院心内科,广东省心血管病研究所,广东广州510080;

    广东省人民医院心内科,广东省心血管病研究所,广东广州510080;

    广东省人民医院心内科,广东省心血管病研究所,广东广州510080;

    广东省人民医院心内科,广东省心血管病研究所,广东广州510080;

    广东省人民医院心内科,广东省心血管病研究所,广东广州510080;

  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 chi
  • 中图分类 心肌疾病;
  • 关键词

    缝隙连接蛋白43; 桥粒斑蛋白; 基因沉默; HL-1细胞;

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