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小鼠肺微血管内皮细胞的培养鉴定及其血管形成功能的研究

         
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摘要

AIM:To establish a simple and reliable method for primary culture of mouse pulmonary microvas-cular endothelial cells ( PMVECs ), and to investigate the ability of angiogenesis of the cells in vitro. METHODS:PM-VECs from C57BL/6 new born mice were cultured with peripheral pulmonary tissue pasted method. The cells were observed under inverted phase - contrast microscope and identified by immunocytochemical and immunofluo re scent methods. PMVECs were seeded at the density of 20 000 cells per well in 96 - well plate on top of growth factor - reduced matrigel and incubated for 24 h at 37℃ in 5% CO2. The plates were examined every 2 h for tube formation under an inverted microscope. RESULTS: The primary PMVECs showed fusiform shape or polygonal, regular cobblestone morphology after fusion to monolayer, and expressed factor VIII- related antigen (VIIIF - Ag ). Under fluorescence microscope, those cells demonstrated positive staining for uptaking acetylated low - density lipoprotein ( Dil - Ac - LDL ) and binding Bandeiraea simpli-cifolia lectin I ( FITC - BSI). The purity of PMVECs was above 90% . PMVECs formed capillary - like structures within 4 h to 6 h after plated on matrigel and fully developed a honeycomb appearance at 10 - 12 h, and then the capillary tubes began to break apart. CONCLUSION: The tissue block pasted method for primary cultivation of PMVECs is easy to handle, with high yield and purity, and will further facilitate related studies of well - established tube - formation assay in vitro.%目的:建立一种简单有效的小鼠肺微血管内皮细胞(PMVECs)原代培养方法,并对其体外血管形成功能进行研究.方法:取小于1周龄的C57BL/6小鼠的肺组织边缘,采用组织贴块法培养原代PMVECs.经形态学观察、免疫细胞化学鉴定后,以每孔2×104的密度接种于铺有基质胶的96孔细胞板,在倒置显微镜下观察(2 h 1次)其24 h 体外血管形成过程.结果:镜下可见原代培养的PMVECs呈梭形或多角形,单层融合呈铺路石样.细胞抗Ⅷ因子相关抗原(ⅧF-Ag)染色阳性.免疫荧光显微镜下可见大部分细胞摄取四甲基吲哚碳花青标记的乙酰化低密度脂蛋白(DiI-Ac-LDL),胞质呈现红色荧光,细胞膜表面与异硫氰酸荧光素标记的异植物血凝素(FITC-BSI)结合,呈现黄绿色荧光.PMVECs接种4～6 h后出现明显的管腔结构,10～12 h呈蜂窝状结构,此后管腔结构逐渐减少.结论:组织贴块法培养原代PMVECs操作简单,细胞得率和纯度高,并可在体外成功建立血管形成模型进行相关研究.

著录项

  • 来源
    《中国病理生理杂志》 |2012年第1期|186-188192|共4页
  • 作者

    高润娣; 曹婕; 卢珊; 应琳; 高璇; 陆国华; 李和权; 周建英;

  • 作者单位

    浙江大学医学院附属第一医院呼吸内科,浙江,杭州,310003;

    浙江大学医学院附属第一医院呼吸内科,浙江,杭州,310003;

    浙江大学医学院附属第一医院呼吸内科,浙江,杭州,310003;

    浙江大学医学院附属第一医院呼吸内科,浙江,杭州,310003;

    浙江大学医学院附属第一医院呼吸内科,浙江,杭州,310003;

    浙江大学医学院附属第一医院呼吸内科,浙江,杭州,310003;

    浙江大学医学院附属第一医院呼吸内科,浙江,杭州,310003;

    浙江大学医学院附属第一医院呼吸内科,浙江,杭州,310003;

  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 chi
  • 中图分类 毛细血管;
  • 关键词

    小鼠; 肺微血管内皮细胞; 原代培养; 血管生成;

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