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首页> 中文期刊> 《中国病理生理杂志》 >细胞因子诱导的蛋白质巯基亚硝基化对大鼠成纤维细胞样滑膜细胞中CREB蛋白的DNA结合活性的影响

细胞因子诱导的蛋白质巯基亚硝基化对大鼠成纤维细胞样滑膜细胞中CREB蛋白的DNA结合活性的影响

         
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目的:观察重组白细胞介素-1β(rIL-1β)和重组干扰素-γ(rlFN-γ)联合诱导的亚硝基化反应对cAMP反应元件结合蛋白(CREB)的DNA结合活性的影响.方法:(1)分别用细胞因子(rlL-1β和rlFN-γ的混合物)、诱导型一氧化氮合酶抑制剂氨基胍(AG)及溶剂单独或联合孵育大鼠滑膜细胞12 h,收集培养液上清进行一氧化氮(NO)含量测定;并提取各组总蛋白,其中细胞因子组的蛋白与巯基氧化修饰还原剂二硫苏糖醇(DTT)反应15 min,采用生物素转化法与免疫印迹技术检测各组蛋白质的亚硝基化修饰水平.(2)分别用rlL-1β、rlL-1β和rlFN-γ的混合物、AG及溶剂单独或联合孵育滑膜细胞12 h,提取各组核蛋白,其中rIL-1β+rlFN-γ组核蛋白与DTT反应15 min,采用电泳迁移率改变分析技术观察各组CREB的DNA结合活性.结果:(1)细胞经rlL-1B和rIFN-γ孵育后,NO生成增多(P<0.01),蛋白质的亚硝基化修饰水平升高,而AG降低了NO的水平(P<0.01)并抑制了亚硝基化反应,DTT与总蛋白直接作用也可抑制亚硝基化反应.(2)rlL-1β和rlFN一γ共孵育明显抑制rIL-1β单独诱导的CREB的DNA结合活性(P<0.01),而AG抑制了rlL-1β和rIFN-γ的作用,DTT与核蛋白直接反应也可逆转细胞因子共孵育的作用,使CREB的DNA结合活性增高(P<0.01).结论:IL-1β和IFN-γ共同孵育滑膜细胞可诱导细胞适度产生NO,使细胞内蛋白质的亚硝基化修饰水平升高,导致CREB发生可逆性巯基氧化修饰,抑制其DNA结合活性.

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