融合蛋白CXCL10-loop3- EGF的可溶性表达及其抗肿瘤效应研究

沈波; 傅鹰; 孟哲峰; 徐巍; 何小帆; 朱敏

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融合蛋白CXCL10-loop3- EGF的可溶性表达及其抗肿瘤效应研究

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目的:构建重组趋化因子CXCL10及表皮生长因子受体干扰序列融合蛋白(CXCL10-loop3-EGF),验证其靶向性抗肿瘤效应及抑制血管形成活性.方法: 运用RT-PCR从经IFN-γ刺激活化的PBMC中扩增人CXCL10基因,运用重叠延伸PCR法扩增CXCL10-loop3-EGF融合基因,并将其与载体pTG19-T连接、转化大肠杆菌DH5α、筛选阳性克隆,CXCL10-loop3-EGF融合基因与载体pET32a(+)连接、转化大肠杆菌Origami B(DE3),诱导可溶性表达重组his-CXCL10- loop3-EGF融合蛋白,并经镍柱亲和层析、酶切、超滤及透析等方法获得纯化的重组CXCL10- loop3-EGF融合蛋白.通过Transwell细胞趋化实验及HUVEC血管形成抑制实验验证此融合蛋白的抗肿瘤效应.结果: SDS-PAGE和Western blotting证实CXCL10- loop3-EGF融合蛋白构建成功,纯化后的融合蛋白具有显著的趋化活化PBMC活性及抑制HUVEC血管形成活性.结论: 成功构建融合蛋白CXCL10- loop3-EGF,该蛋白具有较好的靶向性抗肿瘤活性.

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来源
《中国病理生理杂志》 |2009年第12期|2376-2380|共5页
作者
沈波; 傅鹰; 孟哲峰; 徐巍; 何小帆; 朱敏;
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作者单位

浙江省台州医院检验科,浙江,台州,317000;

浙江省台州医院检验科,浙江,台州,317000;

复旦大学上海医学院医学分子病毒学重点实验室,上海,200032;

浙江省台州医院检验科,浙江,台州,317000;

浙江省台州医院检验科,浙江,台州,317000;

浙江省台州医院检验科,浙江,台州,317000;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类肿瘤学;
关键词
CXCL10-loop3-EGF融合蛋白; 可溶性表达; 抗肿瘤效应;

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