DARPP - 32基因对SH-SY5Y细胞药物敏感性的调节作用

张宏卫; 刘丽华; 李伟

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DARPP - 32基因对SH-SY5Y细胞药物敏感性的调节作用

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目的:探讨DARPP-32基因对人神经母细胞瘤细胞药物敏感性的调节作用.方法:构建DARPP-32基因的真核表达载体和小干扰RNA载体,并将它们转导入人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y,G418筛选后获得稳定转染的阳性克隆后,应用RT-PCR和Western blotting进行鉴定;MTT法检测细胞转染前后药物敏感性的变化;流式细胞仪检测细胞转染前后对阿霉素的蓄积浓度的变化;RT-PCR和Western blotting检测细胞转染前后耐药相关蛋白P-gp、MRP和凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达变化.结果:成功构建了DARPP-32基因的真核表达载体和小干扰RNA载体;筛选到稳定的DARPP-32高/低表达的神经母细胞瘤细胞模型;MTT试验和流式细胞仪检测结果显示,上调DARPP-32的表达能够显著增强神经母细胞瘤细胞对长春新碱、阿霉素、5-氟尿嘧啶和顺铂的敏感性,提高细胞内阿霉素的蓄积(P＜0.05),转染DARPP-32小干扰RNA后的细胞对化疗药物的敏感性降低,细胞内的阿霉素蓄积量显著减少(P＜0.05);RT-PCR和Western blotting结果显示,DARPP-32能够下调P-gp和Bcl-2的表达.结论:DARPP-32基因能够调节神经母细胞瘤细胞对化疗药物的敏感性,具有较好的临床应用前景.

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来源
《中国病理生理杂志》 |2007年第5期|977-981|共5页
作者
张宏卫; 刘丽华; 李伟;
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作者单位

绍兴文理学院医学院,附属医院神经科,浙江,绍兴,312000;

绍兴文理学院医学院,分子诊断实验室,浙江,绍兴,312000;

四川大学华西医院神经科,四川,成都,610041;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类病理生理学;
关键词
神经母细胞瘤; 基因,DARPP-32; RNA干扰; SH-SY5Y细胞;

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