微量酶标夹心杂交法定量检测人iNOS-mRNA

许艳芳; 吕建新

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微量酶标夹心杂交法定量检测人iNOS-mRNA

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目的:建立一种高灵敏度、高特异性、精确、简便的微孔板酶联夹心杂交技术,对人iNOS-mRNA进行定量检测.方法: 设计两条特异探针,其中一条为捕获探针,5'端连接氨基,能与微孔板表面的NOS 基团共价结合,"竖直"地包被在微孔中,另一个为检测探针,3'端带有生物素标记.用脂多糖(LPS)刺激人外周血单个核细胞24 h后,提取巨噬细胞总RNA,进行RT-PCR扩增,PCR产物热变性后加入到已包被捕获探针的微孔板内,并加入检测探针进行夹心杂交,最后加入亲和素-辣根过氧化物酶(AV-HRP)及底物,在450 nm波长检测杂交信号.结果: 该方法检测iNOS-mRNA的灵敏度明显高于RT-PCR-琼脂糖凝胶电泳;特异性高,RT-PCR和酶联夹心杂交均无非特异阳性信号出现;精密度良好.结论: 本方法操作简单、灵敏度高、特异性强、结果数据化,适合于iNOS-mRNA的定量检测.

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来源
《中国病理生理杂志》 |2004年第10期|1950-1952|共3页
作者
许艳芳; 吕建新;
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作者单位

温州医学院检验医学与公共卫生学院,细胞与分子医学研究所,浙江,温州,325027;

温州医学院检验医学与公共卫生学院,细胞与分子医学研究所,浙江,温州,325027;

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正文语种 chi
中图分类病理生理学;
关键词
酶联夹心杂交; 逆转录聚合酶链反应; 一氧化氮合酶;

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