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首页> 中文期刊> 《中国病理生理杂志》 >应用酵母双杂交系统发现hALR与Na+,K+-ATPase间的相互作用

应用酵母双杂交系统发现hALR与Na+,K+-ATPase间的相互作用

         
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目的:采用酵母双杂交系统寻找与人肝再生增强因子(hALR)相互作用的蛋白质,探讨ALR的作用机理.方法:构建hALR 诱饵质粒pGBKT7-hALR,醋酸锂法转化AH109酵母菌,转化菌在SD/-Trp-His培养基上培养及滤纸法β一半乳糖苷酶活性检测排除自身激活作用后,与人肝cDNA文库质粒预转化的酵母菌Y187进行接合试验,接合产物在QDO培养基上筛选,阳性克隆进一步在含X-α-Gal的QDO平板上鉴定,X-α-Gal活性呈阳性的克隆,进行PCR及酶切鉴定排除完全相同克隆,进一步进行回交试验排除假阳性,对阳性克隆进行序列测定和生物信息学分析.结果:得到数个阳性克隆,序列分析结果表明其中1个阳性克隆是Na+,K+-ATPase β亚基部分基因,长669 bp,3′端非编码区224 bp,编码区长445 bp,编码Na+,K+-ATPase β亚基C端的147个氨基酸残基.结论:应用酵母双杂交系统筛选出Na+,K+-ATPase与hALR具有相互作用.

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