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造血生长因子促进RV介导LacZ-NeoR基因在人骨髓造血细胞中转染的机制

         

摘要

目的:本文探索了不同组合的造血生长因子SCF、IL3及IL6对逆转录病毒(RV)介导的LacZ-NeoR双标志基因转染人骨髓造血细胞转染效率、表达水平的影响及其相关机理.方法:采用RV转染人骨髓非粘附造血细胞(NABMC)及经SCF、IL3及IL6不同组合预激48 h后的NABMC.经荧光素二-β-D-半乳糖呋喃苷脂(FDG)标记的半乳糖苷酶、G418RCFU-GM及PCR/Sourthern-blot检测NeoR和LacZ基因的表达.结果:早期造血生长因子(HGFs)的预激明显改善了RV介导的LacZ-NeoR基因在人骨髓造血细胞中的转染效率与表达水平,SCF+IL3+IL6>SCF+IL3>IL3+IL6>SCF+IL6.氚标记脱氧胸苷(3H-TdR)自杀及5-溴脱氧尿苷-碘化丙啶(BrdU-PI)双标流式细胞仪(FCM)检测显示,HGFs预激后人骨髓造血细胞及CFU-GM的S期比例显著提高.结论:SCF+IL3+IL6的联合预激可显著改善RV介导的外源基因在人骨髓造血细胞中的转染效率与表达水平,这可能与HGFs预激后明显提高人骨髓造血细胞及CFU-GM的S期比例密切相关.

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