细胞角蛋白8在促肾上腺皮质激素释放因子诱导的肠上皮通透性改变中的作用

胡玥; 陈超英; 张梦; 吕宾

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目的:探讨细胞角蛋白8(CK8)在促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)诱导的肠上皮细胞间通透性改变中的作用及机制.方法:培养人结肠腺癌HT29细胞株建立肠上皮屏障模型,采用免疫荧光法检测HT29细胞表面CRF受体1(CRFR1)及CRFR2的表达情况,并将其分为对照组和CRF组,CRF组以100 nmol/L CRF处理细胞72 h.采用Transwell小室检测2组细胞FITC标记的dextran透过率,透射电镜观察2组细胞紧密连接结构变化,并用Western blot法检测2组细胞CK8及紧密连接相关蛋白(ZO-1和occludin)的表达,免疫荧光检测CK8表达微结构变化,ELISA检测加药5 min、10 min、30 min、1 h及2 h后蛋白激酶C(PKC)活性.采用sh-CK8慢病毒构建CK8低表达HT29细胞,检测给予CRF处理后相应蛋白表达量、FITC标记的dextran透过率及PKC活性的改变.结果:HT29细胞表面存在CRFR1及CRFR2受体,而CRF处理后,FITC标记的dextran透过率高于对照组(P<0.05),透射电镜观察可见对照组细胞紧密连接通道关闭,CRF处理后紧密连接开放.同时,CRF可引起HT29细胞CK8的荧光强度增高,呈颗粒样浓聚,其蛋白表达明显增加(P<0.05),而occludin和ZO-1表达下调(P<0.05).此外,CRF处理1 h时,PKC的活性下降(P<0.05).sh-CK8慢病毒转染HT29细胞后成功建立低表达CK8细胞株,与阴性对照组相比,CRF刺激后肠上皮细胞通透性并未明显降低,occludin蛋白表达仍下调(P<0.05),而ZO-1则无明显改变.同时,与阴性对照组相比,CK8低表达后,CRF刺激并未引起PKC活性的下降.结论:CK8可能通过抑制PKC活性参与CRF诱导的肠上皮通透性的增加,同时可能存在其它信号通路共同参与.

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来源
《中国病理生理杂志》|2019年第5期|900-906|共7页
作者
胡玥; 陈超英; 张梦; 吕宾;
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作者单位

浙江中医药大学附属第一医院消化科, 浙江杭州 310006;

浙江中医药大学附属第一医院消化科, 浙江杭州 310006;

浙江中医药大学附属第一医院消化科, 浙江杭州 310006;

浙江中医药大学附属第一医院消化科, 浙江杭州 310006;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类肠道功能紊乱;发病学;
关键词
肠易激综合征; 细胞角蛋白8; 促肾上腺皮质激素释放因子; 紧密连接; 蛋白激酶C;

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