基于重组酶介导等温扩增技术的羊口疮病毒核酸检测方法的建立及初步应用

张学勇; 简莹娜; 李志; 郭志宏; 严永盛; 朵红

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为建立羊口疮病毒(Orf virus,ORFV)核酸的快速检测方法,本研究根据ORFV B2L基因保守序列设计特异性引物,通过优化反应温度与时间初步建立了基于重组酶介导等温扩增技术(RAA)的ORFV检测方法。优化试验结果显示:该方法在37℃反应40 min检测效果最佳。采用该方法对ORFV、山羊痘病毒、O型和A型口蹄疫病毒、小反刍兽疫病毒、山羊副流感病毒3型等临床常见症状相似的病毒核酸检测,结果显示:该方法除对ORFV的检测结果为阳性外,对羊的其他病毒的检测结果均为阴性,特异性较强。将质粒标准品10倍倍比稀释(1×10^(9)拷贝/μL~1×10^(0)拷贝/μL)后为模板,利用本研究建立的RAA方法检测,结果显示:该方法对ORFV质粒标准品的最低检测限为1×10^(4)拷贝/μL,敏感性较高。利用本研究建立的方法对95份临床样品(15份组织样品和80份血液样品)检测,结果显示:该RAA方法能够对临床样品快速检测,组织样品和血液样品的阳性率分别为33.33%(5/15)和6.25%(5/80),该检测结果与普通PCR检测方法的符合率均为100%,表明本实验建立的RAA方法能够满足临床样品的检测需求。本研究建立的ORFV RAA方法具有操作简单、特异性强、反应快速等特点,为ORFV的快速检测提供新的技术选择。

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来源
《中国预防兽医学报》 |2023年第3期|271-275|共5页
作者
张学勇; 简莹娜; 李志; 郭志宏; 严永盛; 朵红;
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作者单位

青海大学畜牧兽医科学院;

青海省动物疾病病原诊断与绿色防控技术研究重点实验室;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类病毒病;
关键词
羊口疮病毒; B2L基因; 重组酶介导的等温扩增技术; 快速检测;

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