具有免疫反应活性的猪源重组抗体的原核表达及鉴定

沈旦枫; 王睿; 郭佃磊; 霍琳琳; 刘永刚; 郭龙军; 王玉娥; 李曦

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To express prokaryotically the porcine recombinant antibody (PrAb) against porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV),the B cells from pigs immunized with PRRSV vaccine strain were sorted and isolated by Flow Cytometry with the utilization of GP5 peptide of PRRSV and rabbit anti-pig IgG.Then,the encoding sequences of variable regions of heavy (VH) and light chains (VL) of pig antibody were amplified from positive B cells by PCR.The encoding sequences of constant regions of heavy (CH) and light chains (CL) of pig antibody were connected separately with the encoding sequences of VH and VL.To construct the whole gene sequence of H-Linker-L,a Linker was used in SOE-PCR.Then the recombinant H-Linker-L gene was cloned into pET-28a vector to express protein in E.coli BL21.The Western blot result showed that the expressed protein was actually porcine recombinant antibody,and the ELISA result demonstrated that PrAb possessed specific binding activity to PRRSV.These results lay a foundation for further study on PrAb to diagnose PRRS.%为制备与猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)具有反应活性的猪源化原核表达抗体(PrAb),本实验通过流式细胞技术,以PRRSV GP5蛋白多肽及抗猪IgG抗体,筛选出能够与PRRSV抗原表位结合的阳性B淋巴细胞,利用RT-PCR从筛选得到的B细胞的mRNA中扩增出编码抗体重链可变区(VH)基因序列和轻链可变区(VL)基因序列,将扩增的可变区基因序列分别与本实验室前期克隆的猪源抗体轻链恒定区(CL)和重链恒定区(CH)基因序列连接后,以Linker序列将轻链和重链全长基因序列相连,构建全长的猪源抗体编码基因(H-linker-L).将该基因克隆于原核表达载体pET-28a中进行原核表达及纯化.Western blot鉴定结果显示,表达的重组蛋白能够被抗猪IgG抗体所识别,表明表达的重组蛋白为PrAb;经PRRSV包被的ELISA鉴定,PrAb与PRRSV弱毒株CHlR和强毒株HuN4呈阳性反应,表明所制备的PrAb为PRRSV特异性抗体.本实验为进一步制备诊断PRRS的猪源化重组抗体奠定了基础.

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来源
《中国预防兽医学报》 |2017年第3期|220-224|共5页
作者
沈旦枫; 王睿; 郭佃磊; 霍琳琳; 刘永刚; 郭龙军; 王玉娥; 李曦;
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作者单位

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室,黑龙江哈尔滨150069;

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室,黑龙江哈尔滨150069;

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中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室,黑龙江哈尔滨150069;

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正文语种 chi
中图分类家畜病毒学;
关键词
猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒; 原核表达; 猪源化重组抗体;

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