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首页> 中文期刊> 《中国预防兽医学报》 >表达羧基端融合HA表位N蛋白的重组小反刍兽疫病毒的拯救及鉴定

表达羧基端融合HA表位N蛋白的重组小反刍兽疫病毒的拯救及鉴定

         
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摘要

To construct the Peste des petits ruminants (PPR) marker vaccine,the sequence encoding HA epitope (YPYDVPDYA) was introduced to the 3' end of N gene in the full-length PPR virus (PPRV) cDNA to construct recombinant plasmid pNg75/1-GFP/NHA.Vero cells were transfected with pNg75/1-GFP/NHA together with helper plasmids of pCAGGS-N,pCAGGS-P and pCAGGS-L and the recombinant virus (rPPRV/GFP/NHA) expressing N protein fused with HA epitope was rescued through the reverse genetics system of PPRV.The expression of N protein fused with HA epitope by rPPRV/GFP/HA was detected by western blot and indirect immunofluorescence assay.The one-step growth curve showed that the highest growth titer of the recombinant virus reached 106.2 TCID50/mL and was high enough for its future application as marker vaccine.In conclusion,this study has established a foundation on developing marker vaccine of PPR.%为构建小反刍兽疫(PPR)标记疫苗,本研究以PPR病毒(PPRV)反向遗传操作系统为基础,将编码HA表位(YPYDVPDYA)的序列融合连接于PPRV感染性全长cDNA N基因的3’末端构建感染性克隆质粒pNg75/1-GFP/NHA,将其与辅助质粒pCAGGS-N、pCAGGS-P、pCAGGS-L共转染Vero细胞救获表达融合HA表位N蛋白的重组病毒rPPRV/GFP/NHA.Western blot和间接免疫荧光试验表明融合HA表位的N蛋白获得正确表达；体外生长动力学试验分析表明rPPRV/GFP/NHA的生长最高滴度可达106.2 TCID50/mL,能够满足标记疫苗的使用要求.本研究结果为进一步研制PPRV标记疫苗奠定基础.

著录项

  • 来源
    《中国预防兽医学报》 |2013年第6期|456-459|共4页
  • 作者

    殷倩倩; 陈伟业; 胡倩倩; 温志远; 葛金英; 王喜军; 步志高;

  • 作者单位

    中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室,黑龙江哈尔滨150001;

    中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室,黑龙江哈尔滨150001;

    中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室,黑龙江哈尔滨150001;

    安徽科技学院动物科学学院,安徽凤阳233100;

    南京农业大学动物医学院,江苏南京210095;

    中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室,黑龙江哈尔滨150001;

    中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室,黑龙江哈尔滨150001;

    中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室,黑龙江哈尔滨150001;

    中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室,黑龙江哈尔滨150001;

  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 chi
  • 中图分类 家畜病毒学;
  • 关键词

    小反刍兽疫病毒; N蛋白; HA表位; 标记疫苗;

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