N蛋白

摘要： 背景基于目前新型冠状病毒(SARS-CoV-2)引起的新型冠状病毒肺炎(COVID-19),早诊断、早隔离、早治疗是防控传染的重要方法。建立方便快捷的免疫层析检测技术,对于防控SARS-CoV-2的传播十分必要。目的建立基于量子点标记技术的免疫荧光层析法检测抗SARS-CoV-2 N蛋白IgG抗体的方法,判断被检测者是否感染过SARS-CoV-2或者是否接种过SARS-CoV-2灭活疫苗。方法2020年8月将制备好的鼠抗人二抗和抗N蛋白抗体固定至硝酸纤维素(NC)膜上,分别作为检测线(T)和质控线(C),然后将量子点标记的SARS-CoV-2 N蛋白均匀喷洒在玻璃纤维上,干燥后组装、切割、包装成试纸条。用该试纸条分别检测35例COVID-19患者和50例健康人的血清,以酶联免疫吸附测定法(ELISA)试剂盒初筛结果作为对照,计算量子点荧光免疫层析法的检测特异度和灵敏度,并利用N蛋白抗体标准品检测试纸条灵敏度。结果本研究制备的试纸条特异度为100.00%,灵敏度为94.29%,灵敏性为8.53~17.06 ng/ml抗体浓度。结论采用量子点标记技术检测血清中的抗N蛋白IgG抗体,操作简单、快速,灵敏度及特异度强。

摘要： 旨在建立一种猪流行性腹泻病毒(PEDV)N蛋白阻断ELISA抗体检测方法。本研究将纯化的N蛋白作为包被抗原,通过棋盘滴定法优化ELISA反应条件,建立了检测PEDV抗体的阻断ELISA方法,并对其进行特异性、敏感性和重复性试验。对140份临床血清样品进行检测,并将检测结果与市售IDvet PEDV间接ELISA抗体检测试剂盒试剂盒进行比较。结果显示,建立的阻断ELISA方法的抗原最佳包被浓度为625 ng·mL^(-1),血清最佳稀释比例为1∶1;酶标抗体的最佳工作浓度为1∶5000;检测健康猪血清以及猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和传染性胃肠炎病毒(TGEV)等常见猪病病原的阳性血清,均无交叉反应;PEDV阳性血清的灵敏度为1∶16,与市售IDvet PEDV间接ELISA抗体检测试剂盒(效价1∶32)的敏感性相当;批内、批间重复性试验的变异系数均小于10%,说明具有良好的重复性和稳定性;对140份临床血清样品的检测并与商品化试剂盒检测结果进行比较,两者的kappa值为0.87,为高度一致。综上表明,本研究建立的阻断ELISA抗体检测方法可以应用于PEDV的防控、流行病学调查以及疫苗免疫后抗体水平的监测。

摘要： 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是一种小的有包膜病毒,基因组约为15 kb,包含11个已知的开放阅读框(ORF)。病毒基因组的3′近端四分之一编码四种包膜糖蛋白(GP2a、GP3、GP4和GP5)、三种非糖基化跨膜蛋白(E、ORF5a和M)和核衣壳蛋白(N)。本文就PRRSV结构蛋白的功能进行综述,以期为接下来的PRRS预防疾病和开发新药提供帮助。

摘要： 为建立牛冠状病毒(Bovine coronavirus,BCoV)抗体间接ELISA检测方法,对BCoV的N基因进行克隆,利用原核表达制备重组N蛋白,以纯化的重组N蛋白作为包被抗原,建立ELISA检测方法,并对随机收集的奶牛血清样本进行检测。结果显示,重组N蛋白大小为50 ku,经Western blot鉴定重组N蛋白具有良好的反应原性;建立的ELISA检测方法抗原包被量为1.5μg/mL,血清以1∶50稀释,酶标二抗以1∶10000稀释,临界值为0.256。用该方法检测牛病毒性腹泻病毒、牛轮状病毒、牛传染性鼻气管炎病毒、口蹄疫病毒阳性血清均无交叉反应;当BCoV标准阳性血清1∶2560稀释时检测结果仍为阳性,灵敏性较好;批内和批间变异系数分别为1.83%~5.80%和2.34%~7.45%。对陕西省部分牛场收集的296份牛血清进行检测,BCoV抗体阳性率为18.24%。建立了一种快速检测BCoV抗体的间接ELISA方法,为BCoV的实验室诊断和流行病学调查提供了技术支持。

摘要： 为了构建稳定表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)N蛋白的Marc-145细胞系,以PRRSV全长感染性克隆为模板,通过PCR方法扩增PRRSV N基因,将N基因克隆到慢病毒载体中,获得重组质粒pLenti-CMV-N,利用三质粒慢病毒包装系统转染293T细胞,包装成表达N蛋白的慢病毒颗粒,将慢病毒颗粒转导至Marc-145细胞,用潮霉素B初步筛选阳性细胞,采用终点稀释的方法筛选出稳定表达PRRSV N蛋白的Marc-145细胞系。通过的PCR扩增N基因和测序表明细胞系基因组中存在N蛋白编码序列,IFA和Western blot试验验证了N蛋白在细胞系中稳定表达。为此,我们成功获得了稳定表达PRRSV N蛋白的Marc-145细胞系。

摘要： 为鉴定猪流行性腹泻病毒(PEDV)核衣壳(N)蛋白的抗原表位,本研究通过原核表达N蛋白,纯化后免疫BALB/c小鼠,利用细胞融合和亚克隆技术,筛选出1株稳定分泌抗PEDV N蛋白抗体的杂交瘤细胞9B4。经鉴定单克隆抗体9B4的亚型为IgG1型,轻链为Kappa链。腹水抗体ELISA效价为10^(6)以上。ELISA、Western blot和免疫荧光鉴定结果显示该单克隆抗体反应原性和特异性良好。利用噬菌体展示技术对单克隆抗体9B4进行抗原表位鉴定,获得4个N蛋白的模拟抗原表位(C11、C12、C14和C26)。随后分别以噬菌体阳性克隆为模拟抗原,对临床PEDV血清样品进行检测,发现其均能与猪PEDV阳性血清发生特异性结合,而与猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)阳性血清、猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)阳性血清不反应,说明本研究获得的N蛋白模拟表位可用于PEDV抗体的检测,有助于PED流行病学调查和PEDV疫苗免疫效果的评价。

摘要： 采用生物信息学方法对新型冠状病毒(SARS-CoV-2)核衣壳蛋白(N蛋白)进行亲疏水性、抗原表位预测及多序列对比分析,构建重组质粒pET28a/N,在大肠杆菌原核表达体系下通过调整诱导温度和时间,提升蛋白溶解度和表达量,并对表达出的重组N蛋白进行纯化和鉴定。结果表明:SARS-CoV-2 N蛋白编码419个氨基酸,等电点(PI)为10.10,无跨膜区,无信号肽序列,局部亲水性较强,全长蛋白抗原指数较高,高度保守,与SARS冠状病毒(SARS-CoV)N蛋白同源性为90.5%;采用大肠杆菌原核表达体系发酵,工程菌BL21(DE3)/pET28a/N在IPTG终浓度为0.2 mmol/L、16°C低温条件下诱导20 h,蛋白呈可溶性表达,且此时蛋白的表达量最高,占总蛋白表达量的70%;通过Ni-NTA亲和层析、凝胶过滤层析纯化后的目的蛋白纯度达90%,分子质量为55 kDa,具有特异性。

摘要： 通过软件预测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)N蛋白的主要抗原性表位,利用化学合成的方法合成三条针对N蛋白抗原表位的多肽作为包被抗原,筛选最优的一条建立了检测PRRSV抗体的间接ELISA方法。该ELISA方法的最适条件为:以2.5μg/mL的合成肽(Pep3)包被酶标板,4°C过夜,不需封闭,阴阳性血清分别稀释200倍,37°C作用60 min,辣根过氧化酶(HRP)标记兔抗猪酶标二抗1000倍稀释,37°C作用30 min,TMB 37°C显色15 min,2 mol/L H2SO4终止反应,酶标仪A(450 nm)读数。利用所建立的方法测定50份阴性血清的值计算S/P值,求得当S/P值≥0.324时,即为阳性,0.324>样品S/P值>0.212即为可疑,S/P值≤0.212时,即为阴性。之后进行了灵敏度试验,将标准阳性血清进行1∶3200倍稀释仍然呈现阳性,说明该检测方法具有较高的灵敏性;与常见的PCV2、CSFV、PRV、SIV 4种猪疫病阳性血清无交叉反应,说明该检测方法具有较高的特异性;通过对临床的200份样品进行检测,与IDEXX-PRRSV抗体检测试剂盒相比较,符合率达91.4%,说明该校测方法具有较高的符合率。本研究建立的ELISA方法对于PRRSV的常规诊断及流行病学调查具有重要意义。

摘要： 为获得具有和天然蛋白质类似功能与活性的COVID-19核衣壳蛋白并应用于实际检测中,首先根据Bac-to-bac昆虫表达系统和人工合成的COVID-19核衣壳蛋白(N蛋白)序列,将pFastBacHTB载体上的酶切位点BamHⅠ和XbaⅠ分别加入上下游引物,利用PCR技术对N基因进行扩增,先后连接T-Vector pMD19(simple)载体与pFastBacHTB载体,并获得重组质粒pMD19-T(simple)-COV19-N和pFastBacHTB-COV19-N,最终在DH10Bac细胞中构建重组杆粒DH10Bac-pFastBacHTB-COV19-N并使其在昆虫细胞Sf9内进行表达,获得重组蛋白后进行SDS-PAGE和WB分析。通过PCR方法成功扩增N基因,构建的重组质粒pMD19-T(simple)-COV19-N经PCR和双酶切鉴定均证明正确,在DH10Bac细胞内构建的重组杆粒DH10Bac-pFastBacHTB-COV19-N通过PCR鉴定得到预期2条带,大小分别为2430,3690 bp,证明成功得到重组杆粒,用该重组杆粒转染Sf9昆虫细胞,同时设立重组GFP蛋白对照组,转染120 h后分别收集重组N蛋白与重组GFP蛋白并制样;分别进行SDS-PAGE和WB分析,使用HRP-His标记抗体验证转染成功且重组N蛋白与重组GFP蛋白均在Sf9细胞内顺利表达,试验结果与预期相符,重组N蛋白条带大小约为46 ku。该试验成功构建了呼吸道冠状病毒N基因真核表达载体,并在昆虫细胞内成功表达,为建立ELISA检测方法等相关研究提供试验基础。

摘要： 为研制一种快速检测北美型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的免疫层析试纸条(ICS),本研究以红色乳胶微球偶联的PRRSV N蛋白单克隆抗体(MAb)1H4为检测抗体,并包被在结合垫上,以MAb 1H4和羊抗鼠IgG为捕获抗体,并分别包被在硝酸纤维素膜上作为检测线和质控线,经各反应条件的优化建立了检测PRRSV的乳胶微球ICS。各反应条件优化结果显示,乳胶微球偶联的MAb即检测抗体浓度为1.5 mg/mL,检测线MAb即检测线捕获抗体的浓度为2.0 mg/mL,质控线羊抗鼠IgG即质控线捕获抗体的浓度为1.0 mg/mL。特异性试验结果显示,该方法可特异性检测我国出现的高致病性、NADC30-like、NADC34-like等北美型PRRSV代表株,与欧洲型PRRSV DV疫苗株及猪的其他常见病毒(CSFV、PRV、PCV2、PEDV、TGEV、PPV)均无交叉反应;敏感性试验结果显示,该方法对系列稀释PRRSV(10^(5.0) TCID_(50)/mL~2.5×10^(2.0) TCID_(50)/mL)的最低检测限为5×10^(2.0) TCID_(50)/mL,对2倍倍比稀释的重组N蛋白(rN,24000 ng/mL~3.75 ng/mL)的最低检测限为15 ng/mL;重复性试验结果显示,同一批次和不同批次试纸条的检测结果均无差异;对不同类型北美型PRRSV株(高致病性株、NADC30-like株、类高致病性株)感染的猪血清检测结果显示,利用该ICS可以从相应猪血清中检测到不同北美型的PRRSV。对采集的108份疑似PRRSV感染的猪肺组织及血清样品分别采用本研究建立的ICS及本研究室建立的PCR方法检测,结果显示,ICS检测的阳性率为37.03%(40/108),PCR检测的阳性率为42.59%(46/108),二者的总体符合率为83.33%。上述结果表明,该方法可以用于我国PRRSV主要流行株及临床样品的检测。本研究首次以同一株MAb分别作为检测抗体和检测线捕获抗体,建立检测PRRSV的乳胶微球ICS,为现地PRRSV流行病学调查及临床快速检测提供了新的技术手段。

摘要： 小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)N蛋白是PPRV的主要抗原蛋白,在病毒中含量最高.为了建立一种血清PPRV抗体检测方法,将纯化的N蛋白作为包被抗原,建立检测PPRV抗体效价的间接ELISA方法.优化后的ELISA检测方法,检测35份临床血清样品,同时与法国ID.VET ELISA试剂盒检测结果进行比较,符合率达96％.

摘要： 小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)N蛋白是PPRV的主要抗原蛋白,在病毒中含量最高.为了建立一种血清PPRV抗体检测方法,将纯化的N蛋白作为包被抗原,建立检测PPRV抗体效价的间接ELISA方法.优化后的ELISA检测方法,检测35份临床血清样品,同时与法国ID.VET ELISA试剂盒检测结果进行比较,符合率达96％.

摘要： 小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)N蛋白是PPRV的主要抗原蛋白,在病毒中含量最高.为了建立一种血清PPRV抗体检测方法,将纯化的N蛋白作为包被抗原,建立检测PPRV抗体效价的间接ELISA方法.优化后的ELISA检测方法,检测35份临床血清样品,同时与法国ID.VET ELISA试剂盒检测结果进行比较,符合率达96％.

摘要： 小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)N蛋白是PPRV的主要抗原蛋白,在病毒中含量最高.为了建立一种血清PPRV抗体检测方法,将纯化的N蛋白作为包被抗原,建立检测PPRV抗体效价的间接ELISA方法.优化后的ELISA检测方法,检测35份临床血清样品,同时与法国ID.VET ELISA试剂盒检测结果进行比较,符合率达96％.

摘要： 小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)N蛋白是PPRV的主要抗原蛋白,在病毒中含量最高.为了建立一种血清PPRV抗体检测方法,将纯化的N蛋白作为包被抗原,建立检测PPRV抗体效价的间接ELISA方法.优化后的ELISA检测方法,检测35份临床血清样品,同时与法国ID.VET ELISA试剂盒检测结果进行比较,符合率达96％.

摘要： 目的：建立基于N与GP5蛋白抗原表位串联的猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)抗体ELISA检测方法,为开发准确、廉价的PRRSV抗体检测试剂盒的奠定基础. 方法：将PRRSV的N蛋白和GP5蛋白抗原表位串联优化后进行原核表达,以表达的目的蛋白为抗原,通过优化反应条件建立检测PRRSV抗体的ELISA方法,对其特异性、重复性进行检测.用建立的间接ELISA方法和商品化IDEXX试剂盒同时对临床送检的45份猪血清样品进行检测,计算其符合率. 结果：表达的目的蛋白经SDS-PAGE和Western Blot分析表明其分子量约为24.7ku,具有良好的生物学活性,且为可溶性表达.目的蛋白经纯化后作为抗原包被ELISA平板,建立检测PRRSV抗体的间接ELISA方法,优化后的ELISA条件如下:抗原(纯化后的目的蛋白)包被量为5μg/mL、一抗(猪血清)1∶80稀释、酶标二抗1∶5000稀释,,以含50g/L脱脂奶粉的PBST作为封闭液,37°C孵育60min,抗体(一抗和酶标二抗)均37°C孵育90min,TMB避光显色8min.间接ELISA的判定标准为OD450≥0.3452判为阳性,OD450＜0.3452为阴性.建立的间接ELISA方法特异性强,对猪常见病原(如猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒2型、猪瘟病毒和猪流行性乙型脑炎病毒)高免血清检测均为阴性;重复性好,组内变异系数和组间变异系数分别为1.02％～3.94％和1.38％～4.83％.建立的间接ELISA方法对临床送检45份猪血清样品的检测阳性率为84.44％(38/45),商品化IDEXX试剂盒检测的阳性率为80％(36/45),两种方法的符合率为94.73％(36/38). 结论：建立了基于N与GP5蛋白抗原表位串联的PRRSV抗体ELISA检测方法.

摘要： 目的：建立基于N与GP5蛋白抗原表位串联的猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)抗体ELISA检测方法,为开发准确、廉价的PRRSV抗体检测试剂盒的奠定基础. 方法：将PRRSV的N蛋白和GP5蛋白抗原表位串联优化后进行原核表达,以表达的目的蛋白为抗原,通过优化反应条件建立检测PRRSV抗体的ELISA方法,对其特异性、重复性进行检测.用建立的间接ELISA方法和商品化IDEXX试剂盒同时对临床送检的45份猪血清样品进行检测,计算其符合率. 结果：表达的目的蛋白经SDS-PAGE和Western Blot分析表明其分子量约为24.7ku,具有良好的生物学活性,且为可溶性表达.目的蛋白经纯化后作为抗原包被ELISA平板,建立检测PRRSV抗体的间接ELISA方法,优化后的ELISA条件如下:抗原(纯化后的目的蛋白)包被量为5μg/mL、一抗(猪血清)1∶80稀释、酶标二抗1∶5000稀释,,以含50g/L脱脂奶粉的PBST作为封闭液,37°C孵育60min,抗体(一抗和酶标二抗)均37°C孵育90min,TMB避光显色8min.间接ELISA的判定标准为OD450≥0.3452判为阳性,OD450＜0.3452为阴性.建立的间接ELISA方法特异性强,对猪常见病原(如猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒2型、猪瘟病毒和猪流行性乙型脑炎病毒)高免血清检测均为阴性;重复性好,组内变异系数和组间变异系数分别为1.02％～3.94％和1.38％～4.83％.建立的间接ELISA方法对临床送检45份猪血清样品的检测阳性率为84.44％(38/45),商品化IDEXX试剂盒检测的阳性率为80％(36/45),两种方法的符合率为94.73％(36/38). 结论：建立了基于N与GP5蛋白抗原表位串联的PRRSV抗体ELISA检测方法.

摘要： 目的：建立基于N与GP5蛋白抗原表位串联的猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)抗体ELISA检测方法,为开发准确、廉价的PRRSV抗体检测试剂盒的奠定基础. 方法：将PRRSV的N蛋白和GP5蛋白抗原表位串联优化后进行原核表达,以表达的目的蛋白为抗原,通过优化反应条件建立检测PRRSV抗体的ELISA方法,对其特异性、重复性进行检测.用建立的间接ELISA方法和商品化IDEXX试剂盒同时对临床送检的45份猪血清样品进行检测,计算其符合率. 结果：表达的目的蛋白经SDS-PAGE和Western Blot分析表明其分子量约为24.7ku,具有良好的生物学活性,且为可溶性表达.目的蛋白经纯化后作为抗原包被ELISA平板,建立检测PRRSV抗体的间接ELISA方法,优化后的ELISA条件如下:抗原(纯化后的目的蛋白)包被量为5μg/mL、一抗(猪血清)1∶80稀释、酶标二抗1∶5000稀释,,以含50g/L脱脂奶粉的PBST作为封闭液,37°C孵育60min,抗体(一抗和酶标二抗)均37°C孵育90min,TMB避光显色8min.间接ELISA的判定标准为OD450≥0.3452判为阳性,OD450＜0.3452为阴性.建立的间接ELISA方法特异性强,对猪常见病原(如猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒2型、猪瘟病毒和猪流行性乙型脑炎病毒)高免血清检测均为阴性;重复性好,组内变异系数和组间变异系数分别为1.02％～3.94％和1.38％～4.83％.建立的间接ELISA方法对临床送检45份猪血清样品的检测阳性率为84.44％(38/45),商品化IDEXX试剂盒检测的阳性率为80％(36/45),两种方法的符合率为94.73％(36/38). 结论：建立了基于N与GP5蛋白抗原表位串联的PRRSV抗体ELISA检测方法.

摘要： 目的：建立基于N与GP5蛋白抗原表位串联的猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)抗体ELISA检测方法,为开发准确、廉价的PRRSV抗体检测试剂盒的奠定基础. 方法：将PRRSV的N蛋白和GP5蛋白抗原表位串联优化后进行原核表达,以表达的目的蛋白为抗原,通过优化反应条件建立检测PRRSV抗体的ELISA方法,对其特异性、重复性进行检测.用建立的间接ELISA方法和商品化IDEXX试剂盒同时对临床送检的45份猪血清样品进行检测,计算其符合率. 结果：表达的目的蛋白经SDS-PAGE和Western Blot分析表明其分子量约为24.7ku,具有良好的生物学活性,且为可溶性表达.目的蛋白经纯化后作为抗原包被ELISA平板,建立检测PRRSV抗体的间接ELISA方法,优化后的ELISA条件如下:抗原(纯化后的目的蛋白)包被量为5μg/mL、一抗(猪血清)1∶80稀释、酶标二抗1∶5000稀释,,以含50g/L脱脂奶粉的PBST作为封闭液,37°C孵育60min,抗体(一抗和酶标二抗)均37°C孵育90min,TMB避光显色8min.间接ELISA的判定标准为OD450≥0.3452判为阳性,OD450＜0.3452为阴性.建立的间接ELISA方法特异性强,对猪常见病原(如猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒2型、猪瘟病毒和猪流行性乙型脑炎病毒)高免血清检测均为阴性;重复性好,组内变异系数和组间变异系数分别为1.02％～3.94％和1.38％～4.83％.建立的间接ELISA方法对临床送检45份猪血清样品的检测阳性率为84.44％(38/45),商品化IDEXX试剂盒检测的阳性率为80％(36/45),两种方法的符合率为94.73％(36/38). 结论：建立了基于N与GP5蛋白抗原表位串联的PRRSV抗体ELISA检测方法.

摘要： 目的：建立基于N与GP5蛋白抗原表位串联的猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)抗体ELISA检测方法,为开发准确、廉价的PRRSV抗体检测试剂盒的奠定基础. 方法：将PRRSV的N蛋白和GP5蛋白抗原表位串联优化后进行原核表达,以表达的目的蛋白为抗原,通过优化反应条件建立检测PRRSV抗体的ELISA方法,对其特异性、重复性进行检测.用建立的间接ELISA方法和商品化IDEXX试剂盒同时对临床送检的45份猪血清样品进行检测,计算其符合率. 结果：表达的目的蛋白经SDS-PAGE和Western Blot分析表明其分子量约为24.7ku,具有良好的生物学活性,且为可溶性表达.目的蛋白经纯化后作为抗原包被ELISA平板,建立检测PRRSV抗体的间接ELISA方法,优化后的ELISA条件如下:抗原(纯化后的目的蛋白)包被量为5μg/mL、一抗(猪血清)1∶80稀释、酶标二抗1∶5000稀释,,以含50g/L脱脂奶粉的PBST作为封闭液,37°C孵育60min,抗体(一抗和酶标二抗)均37°C孵育90min,TMB避光显色8min.间接ELISA的判定标准为OD450≥0.3452判为阳性,OD450＜0.3452为阴性.建立的间接ELISA方法特异性强,对猪常见病原(如猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒2型、猪瘟病毒和猪流行性乙型脑炎病毒)高免血清检测均为阴性;重复性好,组内变异系数和组间变异系数分别为1.02％～3.94％和1.38％～4.83％.建立的间接ELISA方法对临床送检45份猪血清样品的检测阳性率为84.44％(38/45),商品化IDEXX试剂盒检测的阳性率为80％(36/45),两种方法的符合率为94.73％(36/38). 结论：建立了基于N与GP5蛋白抗原表位串联的PRRSV抗体ELISA检测方法.

摘要： 本发明的目的在于，提供可抑制弹性蛋白‑抑弹性蛋白酶蛋白复合体形成的弹性蛋白‑抑弹性蛋白酶蛋白复合体形成抑制剂、弹性蛋白‑抑弹性蛋白酶蛋白复合体形成抑制用组合物、具有弹性蛋白‑抑弹性蛋白酶蛋白复合体形成抑制作用的物质的筛选方法、抑制弹性蛋白‑抑弹性蛋白酶蛋白复合体的形成的方法、抑制变性弹性蛋白的分解降低的方法及维持正常的弹性蛋白纤维的方法等。本发明涉及一种变性弹性蛋白的分解降低的抑制剂等，其特征在于，含有选自西番莲萃取物、金盏菊萃取物、白芥萃取物、药蜀葵萃取物、白柳萃取物、菖蒲萃取物、桃仁萃取物及大豆萃取物中的1种以上的植物萃取物作为有效成分。

摘要： 本发明涉及含有抑制纤维粘连蛋白与免疫抑制性受体LILRB4的结合的物质作为有效成分的免疫检查点抑制剂、免疫检查点相关疾病的治疗剂、含有活化免疫抑制性受体LILRB4的物质作为有效成分的免疫抑制剂、抗纤维粘连蛋白抗体或其衍生物、纤维粘连蛋白类似物、用于检测纤维粘连蛋白或其部分蛋白质的试剂盒和使用所述试剂盒检测生物样品中的纤维粘连蛋白或其部分蛋白质的方法。

摘要： 本发明提供一种糖化蛋白质测定试剂，其至少包含Trinder’s试剂、4‑氨基安替比林、蛋白酶、蛋白酶的稳定剂以及亚铁氰化物，其中，至少Trinder’s试剂包含在含有Trinder’s试剂的部分组合物中，至少4‑氨基安替比林包含在含有4‑氨基安替比林的部分组合物中，蛋白酶的稳定剂是使亚铁氰化物与该蛋白酶的稳定剂混合后的氧化还原电位大于0.058V的稳定剂，氧化还原电位是包含蛋白酶的稳定剂和亚铁氰化物、不包含糖化蛋白质的反应体系的氧化还原电位。

摘要： 本发明的目的在于提供可抑制弹性蛋白‑抑弹性蛋白酶蛋白复合体形成的弹性蛋白‑抑弹性蛋白酶蛋白复合体形成抑制剂及弹性蛋白‑抑弹性蛋白酶蛋白复合体形成抑制用组合物等。本发明涉及一种变性弹性蛋白的分解降低的抑制剂，其特征在于，含有下述通式(I)所表示的化合物及/或其衍生物作为有效成分。(式(I)中，R1～R4相同或不同，为氢原子或羟基，R1为氢原子时R2为羟基，R1为羟基时R2为氢原子，R3为氢原子时R4为羟基，R3为羟基时R4为氢原子。)

摘要： 由下述氟树脂形成了与蛋白质或包含蛋白质的组合物接触的表面的容器及用于制造蛋白质或包含蛋白质的组合物的器材具有显著的低蛋白质吸附性，其中，所述氟树脂为选自四氟乙烯‑六氟丙烯系共聚物及四氟乙烯‑全氟烷基乙烯基醚系共聚物中的至少1种氟树脂，并且，所述氟树脂的熔点为320°C以下，所述氟树脂中的相对于每1×10

摘要： 本发明提供能减小使用了特异性地结合的物质的测定中的由肝型脂肪酸结合蛋白质引起的测定值的变动幅度的肝型脂肪酸结合蛋白质制剂、评价该制剂的方法、制作肝型脂肪酸结合蛋白质的校准曲线的方法、以及定量该蛋白质的方法。一种用使用了用10mM的氧化剂在25°C下进行1小时的氧化处理的肝型脂肪酸结合蛋白质制剂的测定值与使用了未进行上述氧化处理的肝型脂肪酸结合蛋白质制剂的测定值的比表示的氧化变动系数设定为1.4以下的肝型脂肪酸结合蛋白质制剂、用于该制剂的肝型脂肪酸结合蛋白质、编码该蛋白质的DNA、由该DNA转化得到的细胞、该蛋白质的制造方法、评价该制剂的方法、抑制使用该制剂的测定中的测定值的变动幅度的方法、制作该蛋白质的校准曲线的方法、以及定量该蛋白质的方法。

摘要： 一种由使具有免疫球蛋白折叠结构的蛋白和能够形成亚单元结构的蛋白融合而得到的单体蛋白组成的多聚体蛋白的制备方法，该制备方法包括下述步骤：步骤(A)，准备在微生物的菌体内呈不溶性颗粒形态的蛋白，该蛋白为上述单体蛋白；步骤(B)，利用含有月桂酰-L-Glu的水溶液增溶步骤(A)中准备的单体蛋白；步骤(C)，在含有精氨酸盐酸盐的缓冲液中稀释步骤(B)中得到的溶液，降低月桂酰-L-Glu的浓度；以及步骤(D)，利用凝胶过滤层析等将步骤(C)中得到的溶液的溶剂置换成缓冲液。

摘要： 由具有糖蛋白生成抑制活性的序列表中序列1记载的氨基酸序列构成的蛋白质、其变异体蛋白质、由序列表中序列2记载的核苷酸序列组成的DNA、其DNA变异体以及使用上述蛋白质和DNA的糖蛋白异常症(例如囊性纤维化症)的包括基因治疗在内的治疗药。

摘要： 本发明提供检测血清中抗Rv1860抗体、抗RV3881c抗体、抗Rv2031c抗体和抗Rv3803c抗体水平的产品在制备区分或辅助区分活动性肺结核患者与潜伏性结核感染患者用途的产品中的应用。上述4种抗原的生物标志物组合，可有效区分ATB患者和LTBI人群。在验证阶段进一步用300多份血清样品用ELISA方法对生物标志物面板进行了验证，最终结果表明微阵列检测结果与ELISA检测结果基本一致。

摘要： 本发明涉及疾病诊断领域，具体涉及一种Rv1860蛋白、RV3881c蛋白、Rv2031c蛋白和Rv3803c蛋白在制备诊断活动性肺结核感染中的用途。本发明提供一种检测血清中抗Rv1860抗体、抗RV3881c抗体、抗Rv2031c抗体和抗Rv3803c抗体水平的产品在制备具有鉴别、诊断、辅助诊断、筛查和/或辅助筛查活动性肺结核感染患者用途的产品中的应用。实验证明得到含有4种抗原的生物标志物组合，可有效筛查活动性肺结核感染患者。