间接ELISA

摘要： 利用制备的猪源肠外致病性大肠杆菌(ExPEC)全菌体蛋白建立一种检测猪源ExPEC抗体的间接ELISA方法。将2株猪源ExPEC SDjie18-10(O;)、HByan18-2(O;)超声裂解的全菌体蛋白作为包被抗原,对反应条件进行优化,建立检测猪源ExPEC抗体的间接ELISA方法,并进行临床应用与评价。该方法的最佳条件:包被抗原浓度为15μg/m L,37°C1 h+4°C过夜;2%BSA于37°C封闭2 h;血清稀释度为1∶800,37°C孵育30 min;酶标二抗稀释度为1∶5 000,37°C作用30 min;显色时间为37°C15 min。该方法可特异性检测猪源ExPEC抗体,阳性血清稀释至1∶6 400仍可检出,与其他猪病原阳性血清均无交叉反应,批内及批间变异系数均小于10%。应用间接ELISA与MAT进行符合性比较及临床猪血清样品感染抗体的同步检测,两种方法的符合率分别为93.33%和94.50%且无显著性差异(P>0.05),具有较高的均一性,同时间接ELISA的感染抗体阳性检出率(19.00%)略高于MAT(17.50%),两者检测结果高度一致(K=0.816)。基于猪源ExPEC全菌体蛋白建立的猪源ExPEC抗体间接ELISA检测方法,具有良好的特异性、敏感性和重复性以及临床应用的可靠性,可用于猪源ExPEC的免疫监测和流行病学调查。

摘要： 本研究旨在分析绵羊痒螨兔亚种MMP2基因(PocMMP2)的虫体转录水平,及建立针对重组PocMMP2(rPocMMP2)蛋白抗体的间接ELISA检测方法(iELISA)。通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)测定PocMMP2在不同发育阶段虫体、饱食与饥饿虫体的转录水平,采用原核表达系统获得rPocMMP2,经方阵滴定法优化反应条件,建立rPocMMP2-iELISA,并用该方法检测成都地区有痒螨病流行病史兔场的86份兔血清。结果显示:PocMMP2在雌虫、雄虫、若虫和幼虫阶段均有表达,且在饥饿虫体的转录水平显著高于饱食虫体(P<0.05);rPocMMP2约72 ku,主要存在于包涵体中;rPocMMP2-iELISA临界值为0.223,敏感性和特异性分别为86.0%和83.3%,受试者工作曲线下面积(AUC)为0.876,批内与批间重复性变异系数均小于10.00%;该方法的临床检测呈现74.42%的血清阳性检出率(64/86),高于病原学检出率(10.47%,9/86)。PocMMP2可能参与了绵羊痒螨兔亚种发育和入侵宿主过程,且所建立的rPocMMP2-iELISA有良好的敏感性、特异性和较高的重复性,可用于兔痒螨病的血清抗体检测。

摘要： 为了实现非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)p54基因在大肠杆菌中的高效表达,同时建立以ASFV-p54重组蛋白为抗原的间接ELISA抗体检测方法,本试验根据GenBank(序列号:NC_044943.1)公布的ASFV p54的基因序列,设计一对特异性引物,扩增构建pGEX-6P-1-p54原核表达质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中进行复制,经IPTG诱导表达,对重组蛋白利用SDS-PAGE分析和免疫印迹鉴定正确后,进行表达条件优化,并纯化重组蛋白。随后用ASFV-p54重组蛋白为包被抗原,通过条件优化、特异性试验、敏感性试验和重复性试验,建立一种稳定的血清ASFV抗体检测方法。结果显示,ASFV p54基因成功克隆到pGEX-6P-1原核表达载体中,得到pGEX-6P-1-p54原核表达质粒;转化E.coli菌株BL21(DE3)中,经诱导表达得到重组蛋白,大小为46 kDa;成功建立测定ASFV抗体的间接ELISA方法,优化后确定最佳包被浓度为1.2μg/mL,待检血清最佳稀释倍数1∶100,最佳封闭液为1%BSA,酶标抗体最佳稀释度为1∶4000,经验证此方法具有良好的特异性、灵敏度和重复性,可初步应用于ASFV抗体的检测。

摘要： 为用原核系统表达鹅星状病毒(GAstV)的纤突蛋白,并以该蛋白作为包被抗原,建立鹅星状病毒血清抗体的间接ELISA检测方法。首先将构建成功的鹅星状病毒纤突蛋白基因导入原核表达载体pCold-TF中,利用大肠杆菌BL21菌株进行重组蛋白的表达。表达、纯化后的抗原包被ELISA酶标板,4°C过夜包被,包被抗原浓度1μg/mL,经1%BSA 37°C封闭2 h,待检血清倍比稀释后37°C孵育1 h,HRP-兔抗鹅酶标抗体倍比稀释,37°C孵育1 h,避光显色20 min加终止液后酶标仪读板,经进一步条件优化,建立检测血清学鹅星状病毒抗体的间接ELISA方法。结果表明:建立的间接ELISA检测方法具有良好的特异性、灵敏性、重复性,可为开展鹅星状病毒血清流行病学调查和鉴定提供方法。

摘要： 为建立一种诊断牛结核病的间接ELISA方法,以牛分枝杆菌Rv3403c、CFP10和ESAT6蛋白为靶标抗原,通过酶切连接和重叠延伸PCR方法,将3个抗原基因串联在pET-28a载体上,基因之间用Linker序列连接,构建出pET-28a-Rv3403c-CFP10-ESAT6并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,纯化目的蛋白并分析其反应原性。以纯化后的融合蛋白作为包被抗原建立间接ELISA抗体检测方法。结果显示:通过SDSPAGE和Western blot鉴定分析,成功表达并纯化出包涵体蛋白Rv3403c-CFP10-ESAT6,目的蛋白具有良好的反应原性;以融合蛋白为包被抗原建立的间接ELISA抗体检测方法具有良好的特异性、灵敏性和重复性,与其他牛病原体阳性血清不发生交叉反应。临床结果显示,本方法与商品化试剂盒阳性符合率为66.7%,阴性符合率99.3%,总符合率为99.3%。研究表明,成功串联表达了具有良好反应原性的融合蛋白Rv3403c-CFP10-ESAT6,并以此为包被抗原建立了一种牛分枝杆菌间接ELISA抗体检测方法,为检测和净化牛结核病提供了诊断工具。

摘要： 为建立一种布鲁氏菌病早期快速诊断的血清学方法,进一步加强对布鲁氏菌病的防控。对布鲁氏菌Dps蛋白进行生物信息学分析、原核表达,将纯化后的重组蛋白作为包被抗原,建立了布鲁氏菌病血清学间接ELISA检测方法并进行初步应用。结果显示,当重组蛋白Dps包被量为0.25μg,5%脱脂奶粉溶液封闭1.5 h,用稀释度为1∶1000的一抗孵育1 h,稀释度为1∶5000的二抗孵育0.5 h,显色20 min时建立的间接ELISA方法条件最优,该方法的临界值D_(450)为0.694,与凝集试验的总符合率达到91.1%(82/90),同时具有较好的特异性和重复性。应用本方法对新疆伊犁地区2个羊场的308份血清进行检测,布鲁氏菌抗体阳性率为2.27%(7/308)。结果表明,本研究建立了特异性高、重复性好的血清学间接ELISA检测方法,为布鲁氏菌病的诊断和流行病学调查提供了参考。

摘要： 为建立一种检测猫细小病毒抗体的间接ELISA方法,将猫细小病毒VP2蛋白共有的多个B细胞抗原表位进行串联表达为重组蛋白并纯化作为包被抗原。采用棋盘式方法优化反应的最佳血清稀释度和抗原包被量,同时比较了间接ELISA方法的其他反应条件。结果显示,抗原包被量为8μg/m L,血清最佳稀释度为1∶400,二抗的最佳工作稀释度为1∶10000;TMB底物显色液37°C避光显色反应15 min。特异性试验结果显示,同猫杯状病毒和猫疱疹病毒阳性血清均无交叉反应。此方法对猫细小病毒阳性血清的敏感性为1∶5120,组内、组间变异系数均小于10%。与包被全病毒的方法平行比较,显示其检测阴阳性血清的值高度一致。结果表明,基于猫细小病毒串联表达的VP2蛋白B细胞抗原表位建立的间接ELISA方法适合临床样本的检测,为猫瘟的防控工作提供了技术支撑。

摘要： 为建立非洲猪瘟病毒(ASFV)抗体的间接ELISA检测方法,将构建的GFP基因与CD2v基因串联的重组真核表达质粒pIRES-GFP-CD2v转染CHO-K1细胞,通过嘌呤霉素筛选并结合有限稀释法,筛选稳定表达CD2v的单细胞克隆株。转染细胞经过PCR鉴定后进行扩大培养,收集并纯化细胞培养液,获得目的蛋白,通过Western-blot验证其反应原性。结果表明,ASFV CD2v蛋白在CHO-K1细胞中被成功表达,并能与ASFV抗体阳性血清反应。以纯化的GFP-CD2v重组蛋白为包被抗原建立检测ASFV CD2v蛋白抗体的间接ELISA方法,通过方阵试验对间接ELISA方法进行优化,最终确定抗原最佳包被质量浓度为1.25μg/mL,待检血清最佳稀释度为1∶100,酶标抗体最佳稀释度为1∶50000,以此建立的ASFVCD2v蛋白的间接ELISA方法临界值为0.31;该方法仅与ASFV阳性血清发生特异性反应,而与猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、口蹄疫病毒、伪狂犬病病毒、猪圆环病毒2型及猪流行性腹泻病毒等病毒抗体阳性血清均无交叉反应,表明该方法的特异性较强;用该ELISA方法检测阳性血清敏感性可达1∶1600;批内和批间变异系数均小于10%。结果表明,本试验中建立的间接ELISA方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,可用于ASFV抗体的检测。

摘要： 为了建立猪繁殖与呼吸综合征病毒-2(PRRSV-2)抗体检测方法,试验采用原核表达猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP7蛋白,并以该蛋白为基础建立间接ELISA方法,对该方法的特异性、重复性、敏感性以及与爱德士商品化试剂盒符合率进行比较。试验结果表明,PRRSV-2 NSP7蛋白表达良好,可获得可溶蛋白,建立NSP7间接ELISA方法特异性、重复性、敏感性良好,与爱德士商品化试剂盒的符合率96.2%,说明PRRSV-2 NSP7间接ELISA检测方法建立成功。

摘要： 为了建立早期羊肝片吸虫病的血清学快速检测方法,本试验成功克隆并表达肝片吸虫GAPDH重组蛋白,Western blot结果显示,该重组蛋白具有良好的抗原活性。用肝片吸虫GAPDH重组抗原包被,建立肝片吸虫病血清抗体的间接ELISA方法;随后优化反应的最佳血清稀释度和抗原包被量,同时筛选其他反应条件。结果显示,间接ELISA方法批内和批间重复试验的最大变异系数均小于10%,GAPDH重组抗原与华枝睾吸虫、日本血吸虫和捻转血矛线虫阳性血清均无交叉反应。对来自黑龙江省各地区的96份羊血清进行检测,阳性率为16.67%(16/96)。结果表明本试验建立的方法具有良好的敏感性和特异性,能够为早期诊断羊肝片吸虫病提供参考。

摘要： 为了建立检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)IgA抗体的间接ELISA方法,为PEDV感染检测与免疫效果评价提供技术手段.以重组PEDV结构蛋白(S1蛋白)作为包被抗原,建立PEDV IgA抗体检测间接ELISA方法,评价方法的特异性、批内与批间重复性及其与国外试剂盒的符合率,分析ELISA的检测血清特异性IgA抗体水平与中和抗体的相关性.结果显示,当抗原包被浓度为1μg/mL,待检血清和酶标抗体的工作浓度分别为1∶40与1∶1500倍稀释时,建立的ELISA方法能够特异地检测PEDV抗体,与猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、伪狂犬病毒、猪圆环病毒2型等病毒的抗血清无交叉反应,批内和批间重复性试验的变异系数低于10％,与现有试剂盒的总符合率为94.8％,血清特异性IgA抗体水平与中和抗体呈正相关(r=0.69,P＜0.001).

摘要： 为了建立检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)IgA抗体的间接ELISA方法,为PEDV感染检测与免疫效果评价提供技术手段.以重组PEDV结构蛋白(S1蛋白)作为包被抗原,建立PEDV IgA抗体检测间接ELISA方法,评价方法的特异性、批内与批间重复性及其与国外试剂盒的符合率,分析ELISA的检测血清特异性IgA抗体水平与中和抗体的相关性.结果显示,当抗原包被浓度为1μg/mL,待检血清和酶标抗体的工作浓度分别为1∶40与1∶1500倍稀释时,建立的ELISA方法能够特异地检测PEDV抗体,与猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、伪狂犬病毒、猪圆环病毒2型等病毒的抗血清无交叉反应,批内和批间重复性试验的变异系数低于10％,与现有试剂盒的总符合率为94.8％,血清特异性IgA抗体水平与中和抗体呈正相关(r=0.69,P＜0.001).

摘要： 为了建立检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)IgA抗体的间接ELISA方法,为PEDV感染检测与免疫效果评价提供技术手段.以重组PEDV结构蛋白(S1蛋白)作为包被抗原,建立PEDV IgA抗体检测间接ELISA方法,评价方法的特异性、批内与批间重复性及其与国外试剂盒的符合率,分析ELISA的检测血清特异性IgA抗体水平与中和抗体的相关性.结果显示,当抗原包被浓度为1μg/mL,待检血清和酶标抗体的工作浓度分别为1∶40与1∶1500倍稀释时,建立的ELISA方法能够特异地检测PEDV抗体,与猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、伪狂犬病毒、猪圆环病毒2型等病毒的抗血清无交叉反应,批内和批间重复性试验的变异系数低于10％,与现有试剂盒的总符合率为94.8％,血清特异性IgA抗体水平与中和抗体呈正相关(r=0.69,P＜0.001).

摘要： 为了建立检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)IgA抗体的间接ELISA方法,为PEDV感染检测与免疫效果评价提供技术手段.以重组PEDV结构蛋白(S1蛋白)作为包被抗原,建立PEDV IgA抗体检测间接ELISA方法,评价方法的特异性、批内与批间重复性及其与国外试剂盒的符合率,分析ELISA的检测血清特异性IgA抗体水平与中和抗体的相关性.结果显示,当抗原包被浓度为1μg/mL,待检血清和酶标抗体的工作浓度分别为1∶40与1∶1500倍稀释时,建立的ELISA方法能够特异地检测PEDV抗体,与猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、伪狂犬病毒、猪圆环病毒2型等病毒的抗血清无交叉反应,批内和批间重复性试验的变异系数低于10％,与现有试剂盒的总符合率为94.8％,血清特异性IgA抗体水平与中和抗体呈正相关(r=0.69,P＜0.001).

摘要： 多杀性巴氏杆菌为多种家禽和野生动物的重要病原,可引起禽霍乱在内的多种疾病.本研究建立了一种基于重组外膜蛋白H(rOmpH)的间接ELISA方法,用于检测鸭多杀性巴氏杆菌抗体,以及监测鸭群多杀性巴氏杆菌的流行情况.将多杀性巴氏杆菌OmpH基因克隆到pET32a,并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达.Western blotting显示,纯化的重组OmpH(rOmpH)能被鸭多杀性巴氏杆菌阳性血清识别,之后将纯化的蛋白用于间接ELISA方法的建立.所建方法与凝集试验相比较,经115份标准血清检测及分析发现,该方法的特异性为95.0％,敏感性为100％,κ系数为92.0％(95％置信区间0.844-0.997).对2015年随机采自福建省6个鸭场的165份鸭血清进行检测,发现外观健康鸭群多杀性巴氏杆菌抗体平均阳性率为22.42％,其中麻鸭阳性率为27.8％,北京鸭阳性率为16.0％,番鸭阳性率为16％.综上所述,本研究表明rOmpH可作为鸭多杀性巴氏杆菌抗体的间接ELISA方法建立的理想候选抗原;同时表明,外观健康鸭群亦可潜伏感染多杀性巴氏杆菌.

摘要： 多杀性巴氏杆菌为多种家禽和野生动物的重要病原,可引起禽霍乱在内的多种疾病.本研究建立了一种基于重组外膜蛋白H(rOmpH)的间接ELISA方法,用于检测鸭多杀性巴氏杆菌抗体,以及监测鸭群多杀性巴氏杆菌的流行情况.将多杀性巴氏杆菌OmpH基因克隆到pET32a,并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达.Western blotting显示,纯化的重组OmpH(rOmpH)能被鸭多杀性巴氏杆菌阳性血清识别,之后将纯化的蛋白用于间接ELISA方法的建立.所建方法与凝集试验相比较,经115份标准血清检测及分析发现,该方法的特异性为95.0％,敏感性为100％,κ系数为92.0％(95％置信区间0.844-0.997).对2015年随机采自福建省6个鸭场的165份鸭血清进行检测,发现外观健康鸭群多杀性巴氏杆菌抗体平均阳性率为22.42％,其中麻鸭阳性率为27.8％,北京鸭阳性率为16.0％,番鸭阳性率为16％.综上所述,本研究表明rOmpH可作为鸭多杀性巴氏杆菌抗体的间接ELISA方法建立的理想候选抗原;同时表明,外观健康鸭群亦可潜伏感染多杀性巴氏杆菌.

摘要： 多杀性巴氏杆菌为多种家禽和野生动物的重要病原,可引起禽霍乱在内的多种疾病.本研究建立了一种基于重组外膜蛋白H(rOmpH)的间接ELISA方法,用于检测鸭多杀性巴氏杆菌抗体,以及监测鸭群多杀性巴氏杆菌的流行情况.将多杀性巴氏杆菌OmpH基因克隆到pET32a,并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达.Western blotting显示,纯化的重组OmpH(rOmpH)能被鸭多杀性巴氏杆菌阳性血清识别,之后将纯化的蛋白用于间接ELISA方法的建立.所建方法与凝集试验相比较,经115份标准血清检测及分析发现,该方法的特异性为95.0％,敏感性为100％,κ系数为92.0％(95％置信区间0.844-0.997).对2015年随机采自福建省6个鸭场的165份鸭血清进行检测,发现外观健康鸭群多杀性巴氏杆菌抗体平均阳性率为22.42％,其中麻鸭阳性率为27.8％,北京鸭阳性率为16.0％,番鸭阳性率为16％.综上所述,本研究表明rOmpH可作为鸭多杀性巴氏杆菌抗体的间接ELISA方法建立的理想候选抗原;同时表明,外观健康鸭群亦可潜伏感染多杀性巴氏杆菌.

摘要： 多杀性巴氏杆菌为多种家禽和野生动物的重要病原,可引起禽霍乱在内的多种疾病.本研究建立了一种基于重组外膜蛋白H(rOmpH)的间接ELISA方法,用于检测鸭多杀性巴氏杆菌抗体,以及监测鸭群多杀性巴氏杆菌的流行情况.将多杀性巴氏杆菌OmpH基因克隆到pET32a,并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达.Western blotting显示,纯化的重组OmpH(rOmpH)能被鸭多杀性巴氏杆菌阳性血清识别,之后将纯化的蛋白用于间接ELISA方法的建立.所建方法与凝集试验相比较,经115份标准血清检测及分析发现,该方法的特异性为95.0％,敏感性为100％,κ系数为92.0％(95％置信区间0.844-0.997).对2015年随机采自福建省6个鸭场的165份鸭血清进行检测,发现外观健康鸭群多杀性巴氏杆菌抗体平均阳性率为22.42％,其中麻鸭阳性率为27.8％,北京鸭阳性率为16.0％,番鸭阳性率为16％.综上所述,本研究表明rOmpH可作为鸭多杀性巴氏杆菌抗体的间接ELISA方法建立的理想候选抗原;同时表明,外观健康鸭群亦可潜伏感染多杀性巴氏杆菌.

摘要： 对布鲁菌Omp28基因进行大肠埃希菌表达,用表达的布鲁菌重组蛋白Omp28作为抗原包被酶标板,建立检测布鲁菌抗体间接ELISA方法,进一步研发试剂盒,用该试剂盒和IDEXX抗体检测试剂盒同时对540份临床牛血清样品进行检测,评价二者的符合率.反应条件优化后,该试剂盒的抗原包被浓度为1μg/mL,作用条件为37°C1h;封闭液为50g/L脱脂乳,作用时间为30min;血清稀释度为1∶200,作用时间为30min;酶标二抗稀释度为1∶3×104,作用时间为30min;与IDEXX抗体检测试剂盒的符合率达96.67％,证明该试剂盒可用于临床牛布鲁菌抗体的检测.

摘要： 对布鲁菌Omp28基因进行大肠埃希菌表达,用表达的布鲁菌重组蛋白Omp28作为抗原包被酶标板,建立检测布鲁菌抗体间接ELISA方法,进一步研发试剂盒,用该试剂盒和IDEXX抗体检测试剂盒同时对540份临床牛血清样品进行检测,评价二者的符合率.反应条件优化后,该试剂盒的抗原包被浓度为1μg/mL,作用条件为37°C1h;封闭液为50g/L脱脂乳,作用时间为30min;血清稀释度为1∶200,作用时间为30min;酶标二抗稀释度为1∶3×104,作用时间为30min;与IDEXX抗体检测试剂盒的符合率达96.67％,证明该试剂盒可用于临床牛布鲁菌抗体的检测.

摘要： 本发明涉及一种结核分枝杆菌MTB39A(PPE18)蛋白抗体间接ELISA检测方法及其试剂盒，该方法及试剂盒针对MTB39A(PPE18)蛋白抗体具有特异性强、灵敏度高、稳定性良好等优势。

摘要： 本发明公开了一种检测猫过敏原Fel d1卵黄抗体的间接ELISA方法，包括以下步骤：用包被缓冲液将猫过敏原Fel d1包被在所述包被缓冲液中；用封闭液封闭所述猫过敏原Fel d1的非特异性抗体结合位点；加入卵黄抗体进行孵育；加HRP标记的二抗进行孵育；加显色液进行显色后，加终止液终止反应；猫过敏原Fel d1的氨基酸序列如SEQ ID.NO.1所示。本发明的方法可以对猫主要过敏原Fel d1进行有效监测，为过敏原筛查、疾病诊断和疫苗免疫效果评价提供了快速、简便的工具。

摘要： 本发明公开了一种用于检测猪丁型冠状病毒的间接ELISA检测试剂盒。本发明以PDCoV的NS6蛋白作为包被抗原建立的ELISA检测试剂盒，可以准确检测临床样本中猪丁型冠状病毒抗体。同时，由于NS6蛋白作为猪丁型冠状病毒所特有的辅助蛋白，不存在与其他冠状病毒发生交叉反应，可用于PDCoV从猪传染至人或其他动物后抗体的检测。以该蛋白建立的ELISA试剂盒具有特异性强、灵敏度高、重复性好的特点，为PDCoV的快速诊断、免疫监测提供了新选择，对该病的防控与净化具有重要意义。

摘要： 本发明公开了一种检测鹅庚型肝炎病毒抗体的间接ELISA检测试剂盒，所述试剂盒包含包被有鹅庚型肝炎病毒E2蛋白重组抗原的酶标板；所述鹅庚型肝炎病毒E2蛋白重组抗原的制备方法如下：以鹅庚型肝炎病毒FV2毒株E2基因为模板，经密码子优化后合成获得E2基因片段，构建重组表达载体，通过原核表达系统表达鹅庚型肝炎病毒E2蛋白重组抗原，本发明的间接ELISA检测试剂盒可以对新现的庚型肝炎病毒抗体进行快速、有效的检测，以监测鹅群中庚型肝炎病毒的流行情况。

摘要： 本发明公开了基于非洲猪瘟p30和p22两种蛋白的间接ELISA检测试剂盒，涉及动物用生物制品制造技术领域。本发明提供一种非洲猪瘟的间接ELISA检测试剂盒，包括氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示的p30蛋白和氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示的p22蛋白。p30蛋白和p22蛋白都具有良好的反应原性；非洲猪瘟病毒(ASFV)阳性血清稀释12800次后，检测结果仍为阳性，灵敏度高；本发明的间接ELISA方法仅与ASF阳性血清反应，与猪圆环病毒病、伪狂犬、猪繁殖与呼吸综合征、猪瘟和猪格拉瑟病的阳性血清无交叉反应，特异性强；并且本发明的试剂盒具有良好的重复性。

摘要： 本发明公开了一种利用间接竞争ELISA高通量快速筛查多种内分泌干扰物的方法。本发明提供的方法，包括如下步骤：采用多孔板通过间接竞争ELISA检测双酚A、雌二醇和壬基酚；多孔板中，部分孔用于检测双酚A、部分孔用于检测雌二醇、部分孔用于检测壬基酚；作为包被原的双酚A抗原的包被浓度为0.18‑0.2μg/mL；作为一抗的双酚A抗体的工作浓度为0.8‑1μg/mL；作为包被原的雌二醇抗原的包被浓度为3.1‑3.2μg/mL；作为一抗的雌二醇抗体的工作浓度为9‑10μg/mL；作为包被原的壬基酚抗原的包被浓度为0.3‑0.4μg/mL；作为一抗的壬基酚抗体的工作浓度为2‑3μg/mL。本发明操作简便，无需对抗体进行标记，可以实现多种内分泌干扰物的同时检测。本发明非常适用于水环境中内分泌干扰物的快速检测。

摘要： 本发明提供了一种PEDV‑IgA抗体水平间接ELISA检测方法，该方法将PEDV‑NH‑TA2020病毒稀释后包被于96孔板中；封闭后，在包被后的96孔板的每个孔中加入100µL稀释样品,孵育后PBST清洗；将HRP Goat@Pig IgA(H+L)抗体用封闭液稀释后，每孔加入100µL，孵育40min，PBST清洗三次；之后，TMB显色10min后，加入50µL终止液终止反应，读取OD450nm吸光值；根据稀释样品的cut off值判断阴性样品和阳性样品。与商品化试剂盒相比，本发明所提供的方法在特异性、实用性上具有无法比拟的优势。

摘要： 本发明提供一种猪盖他病毒间接ELISA抗体检测方法及其试剂盒，属于病毒检测技术领域。鉴于现场检测过程中缺少快速检测GETV特异性抗体的方法，本发明建立一种盖他病毒间接ELISA抗体检测方法，其是将合成的E2基因克隆至原核表达载体pCold I中构建重组质粒pCold I‑E2，通过对重组质粒pCold I‑E2进行IPTG低温诱导蛋白表达，然后包被纯化好的E2蛋白即可用于GETV特异性抗体的快速检测。实验证实，本发明制备得到的重组E2蛋白具有良好抗原性，所建立的间接ELISA抗体检测方法具有灵敏、特异、稳定的特点，非常适宜于GETV抗体的现场检测。

摘要： 本发明公开了一种检测PRRSV PLP2抗体的间接ELISA方法，该方法针对PRRSV JXwn06PLP2(46～323)基因序列设计特异性引物，构建原核表达质粒pET28a(+)‑PLP2‑StrepⅡ，在E.coli BL21中实现了高效可溶性表达。经过亲和层析柱与Superdex75分子筛纯化，获得了高纯度PLP2重组蛋白，将其作为包被抗原，建立了检测PRRSV PLP2抗体的间接ELISA方法。本发明发现PLP2可作为一种新的PRRSV诊断抗原，应用其建立的抗体检测方法重复性和特异性好，能够在PRRSV感染仔猪后第3～5天检测到PLP2抗体，可用于PRRS抗体检测和早期诊断。

摘要： 本发明公开了重组猪肠病毒G型VP2、VP3蛋白，分别由序列表SEQ.ID.No.1、SEQ.ID.No.2的基因碱基序列编码或者具有SEQ.ID.No.3、SEQ.ID.No.4的氨基酸序列。据此，还制备了多克隆抗体，同时基于VP2、VP3蛋白建立了两种间接ELISA检测方法。所得重组蛋白具有抗原性好、免疫原性强的特点，ELISA检测方法操作简单，特异性强，重复性好，敏感度高，可用于检测并准确判断猪肠病毒G型的感染情况，应用前景良好。综上，本发明为猪肠病毒G型的流行病学调查提供技术手段，为猪肠病毒G型感染提供新型快速的血清学检测方法。