非洲猪瘟病毒

摘要： 非洲猪瘟防控目前暂无安全有效疫苗可用,因此快速、可靠的检测方法对其防控至关重要.目前应用的非洲猪瘟诊断技术主要表现在病原、核酸、抗原与抗体四个方面:病原检测主要有红细胞吸附和病毒分离方法,核酸检测目前已开发出实时荧光定量PCR(qPCR)、多重PCR(mPCR)、微滴数字PCR(ddPCR)、巢氏PCR(nested-PCR)、环介导等温扩增技术(LAMP)、重组酶聚合酶扩增技术(RPA)、交叉引物扩增技术(CPA)、原位杂交技术(ISH)以及生物传感器技术等,抗原检测常用荧光抗体试验(FAT)、抗原ELISA、侧向流动免疫色谱分析(LFA)等,而抗体检测主要通过酶联免疫吸附试验(ELISA)、间接荧光抗体试验(IFA)、胶体金快速免疫层析法(GICA)、免疫印迹法(IBT)等方法.每种诊断技术都有其特点,从而为不同情况下的A SFV诊断提供了多种选择.未来,其他技术如CRISPR等与上述技术的结合应用,以及不同诊断技术的联合应用,将成为非洲猪瘟诊断技术发展的趋势.

摘要： 非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)感染家猪和野猪而引起的一种急性烈性、高度接触性传染病,到目前为止仍未研制出有效疫苗,因此病原的早发现对ASF防控尤为重要.ASFV的病原学检测主要包括活病毒检测、核酸检测和抗原检测.活病毒检测中,病毒分离和红细胞吸附试验均耗时较长,且对实验室要求较高,通常只有被参考实验室采用.病毒核酸检测中,普通PCR和实时荧光定量PCR(qPCR)是OIE推荐的首选诊断方法,其特异性和灵敏度均较高,但操作复杂、成本高;等温扩增技术操作简单、成本低,不需要特殊仪器,检测时间短、携带方便、灵敏度高,适用于屠宰场、养殖场现场检测,但因特异性不高,需要不断更新和改进;微流控芯片法具有样品消耗少、检测速度快、操作简便、便于携带等优点,但检测成本高,需要特定的设备,尚未被广泛使用.抗原检测技术中,荧光抗体检测(FAT)对实验室要求较高,不适合现场检测;夹心ELISA和胶体金免疫试纸条检测快速,操作简单,检测成本低,但敏感性和特异性还需改进.ASF病原学检测技术虽很成熟,但各有不足,所以应根据实际情况结合使用.

摘要： 为考察添加防冻剂(乙二醇)的浓戊二醛消毒剂防冻及消杀效果,对不同温度条件下添加不同量防冻剂的浓戊二醛消毒剂(防冻剂/浓戊二醛消毒剂体积分数分别为2％、3％、4％、8％、10％、12％、14％)进行了冻结试验,并对其抑菌及杀灭非洲猪瘟病毒效果进行了验证,利用硫酸滴定法检测防冻剂对浓戊二醛有效含量及稳定性的影响.结果显示:添加不同量防冻剂的浓戊二醛消毒剂在-10、-20°C条件下均有良好的防冻效果.添加防冻剂后的消毒液(体积分数10％、12％)进行100倍稀释后抑菌圈可达到标准要求,且抑菌圈平均大于不加防冻剂消毒液1 mm左右.5％ 稀释、12％ 体积分数的防冻消毒剂,在20°C条件下作用10 min,10°C作用30 min,0°C作用60 min,均能完全灭活非洲猪瘟病毒;10％ 稀释的防冻消毒剂-10°C条件下作用30 min,20％稀释的防冻消毒剂-20°C条件下作用30 min,均能完全灭活非洲猪瘟病毒.经硫酸滴定,该防冻剂理化性质稳定,首次检定与24、48 h后检定的结果并无太大差距,消毒剂有效含量分别为96.7％、96.2％ 和95.6％.结果表明,低温环境下添加体积分数12％的防冻消毒剂具有很好的防冻效果和贮存稳定性,并且能够有效杀灭细菌及非洲猪瘟病毒.本研究为东北地区冬季选择合适的防冻消毒剂提供了技术支撑.

摘要： 非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)感染导致的猪高死亡率的传染病,最早起源于非洲,是最复杂的猪传染性疾病之一。非洲猪瘟自首次报道至今已有1个世纪,但在没有疫苗和没有有效治疗方法的情况下,非洲猪瘟病毒的防控仍是一项巨大的挑战。当前,非洲猪瘟病毒已在我国“定殖”,该病毒的检测已经成为养猪企业的一项常规工作。实时荧光定量PCR是检测非洲猪瘟病毒最常用的方法,一些新型的核酸检测技术也被开发用于病毒检测,例如环介导等温扩增法、荧光重组酶介导等温扩增法等,均具有较好的特异性和灵敏度。本文阐述了非洲猪瘟的流行现状及不同病原学检测方法,对不同检测方法进行简单的比较,以期为非洲猪瘟病毒的检测提供参考。

摘要： 非洲猪瘟(ASF)是猪的一种高传染性、高致死性的接触性传染病,它是由非洲猪瘟病毒(ASFV)感染引起的,ASFV是一种双链DNA病毒,基因组庞大复杂,可编码170~190种蛋白。ASF自2018年传入我国以来,对我国的社会、经济等造成严重影响,但目前尚无可用的商品化疫苗,ASF的防控受到巨大挑战。目前ASF疫苗的研发主要包括灭活疫苗、亚单位疫苗、病毒活载体疫苗以及基因缺失活疫苗等,其中基因缺失活疫苗的研发被普遍认为是一种较为有效的方式。

摘要： 非洲猪瘟病毒(African Swine Fever Virus,ASFV)是一种大型DNA病毒,对家猪具有高度传染性和致病性,死亡率高达100%。然而,ASFV如何抑制JAK-STAT1信号传导以逃避免疫反应仍不清楚。在这项研究中,我们发现ASFV编码的蛋白MGF-505-7R抑制干扰素γ(Interferonγ,IFN-γ)介导的JAK-STAT1信号传导。从机制上讲,发现MGF-505-7R与JAK1和JAK2相互作用并介导二者的降解。进一步研究表明,MGF-505-7R分别通过上调E3泛素连接酶RNF125的表达和抑制Hes5的表达来促进JAK1和JAK2的降解。与野生型ASFV相比,缺失MGF-505-7R的ASFV始终诱导高水平的IRF1表达,并在原代猪肺泡巨噬细胞和猪中表现出复制受损。此外,缺失MGF-505-7R减弱了ASFV的毒力。因此,我们得出结论,敲除MGF-505-7R可作为开发针对ASFV的减毒疫苗的策略。

摘要： 非洲猪瘟(ASF)是猪的一种烈性病毒病,病死率可达100%。ASF的肆虐,给全球养猪业造成了巨大的经济损失。ASF的防控依旧是世界性难题,目前尚无有效的疫苗可用,ASF的有效诊断对于该病的防控显得至关重要。该病的致病病原是非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV),病毒表位信息是诊断试剂和疫苗的研发基础,论文对ASFV病毒蛋白p72、p30、p54蛋白B细胞表位的研究现状进行概述,了解表位的研究现状有助于ASFV感染机制的研究,同时有助于新型检测试剂及疫苗的研发。

摘要： 比较非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)全长p72与截短p72蛋白(p72s)的抗原性,为ASFV特异性抗体检测技术研究提供试验依据。应用大肠杆菌表达系统表达p72和p72s蛋白,应用Western blot和液相色谱-质谱联用(LC-MS/MS)技术鉴定表达的蛋白,分析蛋白的抗原表位;用纯化的重组全长和截短p72蛋白分别免疫小鼠,比较其免疫原性;通过ELISA和Western blot,评价重组p72和p72s蛋白与ASFV阳性血清的免疫反应性。结果:重组p72和p72s蛋白均以包涵体形式表达,相对分子质量分别约为76和42 ku,与预期大小相符;表达蛋白的酶解肽段对p72和p72s蛋白推测氨基酸序列的覆盖度分别为89.3%和88.39%,两者分别包含27和17个抗原表位;用p72与p72s蛋白免疫小鼠3次后,血清特异性抗体效价分别为1∶200~1∶25600和1∶12800~1∶409600;基于重组p72与p72s蛋白的ELISA从108份猪血清中分别检出78份(72.2%)和85份(78.7%)阳性血清,两者的检测结果具有很好的一致性(kappa=0.826,P=0.016);经Western blot检测的10份ASFV抗体阳性血清中有7份与p72蛋白反应,全部与p72s蛋白反应。截短p72蛋白比全长p72蛋白的抗原性好,更适合用于ASFV抗体检测。

摘要： 近日,中国农业科学院兰州兽医研究所口蹄疫与新发病流行病学创新团队在非洲猪瘟病毒免疫逃逸及致病机制方面研究取得新进展,该研究鉴定了非洲猪瘟病毒新的免疫抑制基因MGF360-9L,证实了MGF360-9L是非洲猪瘟病毒的主要毒力因子之一,系统解释了该基因拮抗宿主天然免疫应答的分子机制,相关研究成果发表在《mBio》。

摘要： 非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)感染家猪和野猪引起的一种急性、烈性传染病,高致病性病毒株感染的发病率和死亡率高达100%。ASF自2018年8月传入我国以来,对我国乃至世界养猪业造成了严重的经济损失。ASFV主要的靶细胞是巨噬细胞和单核细胞,其致病机制极其复杂。先天免疫是宿主防御病原感染的第一道防线,在抗病原感染过程中起着至关重要的作用。

摘要： 根据GenBank公布的非洲猪瘟病毒(ASFV)结构蛋白基因p72的序列,设计一对特异性检测引物及一条特异性探针建立了ASFV的Taqman荧光PCR方法.进一步测定该方法的最低检测限和方法特异性,并与OIE推荐的Taqman荧光PCR方法进行比较.结果表明,本研究建立的Taqman荧光PCR方法能很好地扩增质粒模板中的目标片段.提取猪不同组织的核酸进行检测,结果表明该方法不受组织的干扰.方法特异性研究显示,引物探针与一些常见猪病如猪蓝耳病病毒(PRRSV),猪瘟病毒(CSFV)和水疱性口炎病毒(VSV)病毒的核酸不反应.与OIE的Taqman荧光PCR进行比较,结果表明两种方法的最低检测限相当,但是本研究建立的方法,同样条件下检测的荧光值高于OIE的方法,更有利于阳性结果的判定.利用本研究建立的方法对边境省份采集到的软蜱进行检测,结果显示蜱中并没有检测到非洲猪瘟病毒的核酸.

摘要： 非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(Afi-ican swine fever virus,ASFV)引起的一种高致病率和死亡率的急性、烈性、接触性的传染病,强毒株感染后导致动物100％的死亡率,而目前对于非洲猪瘟的治疗和疫苗的防控还没有有效措施,现行对该病防控措施最主要的仍是检疫,一旦检测到该病存在,一律对动物进行严格扑杀并采取无害化处理.我国目前虽然尚无非洲猪瘟疫病的发生,但是随着日渐频繁的进出口贸易发展,以及人员流动的来往,该病传入我国的可能性也随之增大.为了能及时的检测出非洲猪瘟,预防该病传入我国,因此建立一种快速高效检测非洲猪瘟病毒的检测方法显得尤为重要. 环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplifcation,LAMF.)作为一种新型的核酸检测技术,在短短的十几年时间快速的发展,由于该方法具有快速灵敏,特异性好,操作简便,结果便于判定,并且不需要特殊检测仪器等特点,已经广泛应用于各种细菌、病毒和寄生虫的检测中,在动物的胚胎性别鉴别、食品卫生检疫、基因芯片的开发研究方向等也有应用,是最有发展前景的快速诊断方法之一. 本试验根据NCBI已登录的非洲猪瘟K205R基因序列,人工合成该基因质粒作为试验所需模板.通过在线软件,根据LAMP引物设计原理,针对非洲猪瘟病毒K205R基因序列设计了一套特异性引物,在进行反应条件优化后成功建立了非洲猪瘟病毒的LAMP检测方法.通过对反应产物的鉴定分析,灵敏度试验以及和常规PCR方法进行对比,结果表明所建立的非洲猪瘟LAMP检测方法可检出低于10拷贝数的非洲猪瘟病毒DNA,其灵敏度高于常规PCR方法100倍,且特异性和稳定性良好.此方法简单、快速,在恒温水浴锅中63°C反应45min即可完成.反应产物除通过琼脂糖凝胶电泳分析外,还可进行可视化检测,阳性反应管在自然光下变得浑浊,加入荧光染料在紫外灯照下有绿色荧光的出现.该试验成功建立了快速检测非洲猪瘟病毒环介导等温扩增的方法,是一种适用于实验室和现场快速检测的方法,本试验方法的建立为我国预防非洲猪瘟疫病的传入提供了参考.

摘要： 根据已发表的非洲猪瘟病毒(ASFV)序列，设计合成ASFV的P72基因，并将其克隆至原核表达载体pGEX-KG，得到重组质粒pKG-P72。将该质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)，经IPTG诱导后，Western Blot检测证实，P72蛋白以可溶性形式在大肠杆菌中获得了高效表达。以纯化的P72蛋白免疫BALB/c小鼠，并通过细胞融合和间接ELISA方法筛选，获得5株能稳定分泌特异性单抗的杂交瘤细胞株，分别命名为1E1、1F3、3F1、3D11、4F10,单抗亚类鉴定均属于IgG2a。经间接免疫荧光和Western Blot分析，获得的5株单抗均能与P72原核和真核表达蛋白发生特异性反应。本研究表达的P72蛋白及制备的单克隆抗体，为ASFV检测方法的建立奠定了基础。

摘要： 将人工合成的非洲猪瘟病毒(ASFV)VP73基因在大肠杆菌中进行融合表达。利用纯化的融合蛋白免疫4周龄BALB/c雌性小鼠制备单克隆抗体。通过间接ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞，并最终获得了5株稳定分泌VP73特异单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为1E6、1H3、2H11、3E12、4H5。经抗体亚类鉴定1H3、3E12为IgG1亚类，1E6、2H1、4H5为IgG2b亚类。经Western Blot分析，获得的5株单克隆抗体均能与VP73蛋白发生特异性反应，从而为非洲猪瘟免疫学检测技术的建立奠定了基础。

摘要： 将纳米PCR技术引入非洲猪瘟病毒(ASFV)检测，建立了ASFV的高效纳米PCR检测方法，该方法采用纳米金颗粒作为热导介子，提高了PCR反应效率，采用该方法同时检测ASFV、大肠杆菌、猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒II型、典型猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪捷申病毒、猪脑心肌炎病毒等，结果只有ASFV能够扩增出552bp的目的片段。敏感性试验表明纳米PCR检测技术是常规PCR检测技术敏感性的1000倍以上，最低核酸拷贝数检出量可以达到10 copy。采用该方法对中国黑龙江、吉林和河南3个省份的8个地区临床送检的69份样品进行检测，检测结果显示均为阴性，在以上3个地区均未发现ASFV病毒感染情况。

摘要： 为了研究P72蛋白主要抗原区域及其在诊断中的应用。综合分析蛋白的二级结构、亲水性、表面可及性和抗原性指数等，利用多种参数预测该蛋白的抗原表位。结果显示，P72蛋白抗原表位位于基因N端，筛选并克隆其优势抗原区域1 37～286。为建立无感染性的、快速、灵敏的血清学检测方法奠定了基础。

摘要： 非洲猪瘟与典型的猪瘟都是急性、热性、败血性传染病，临床诊断上很易把二者相混淆。。2007年4月.2008年7月先后有格鲁吉亚、俄罗斯、车臣共和国、赞比亚、阿塞拜疆、坦桑尼亚等国家暴发非洲猪瘟疫情。我国目前虽是无ASFV感染的国家，但是作为俄罗斯的邻国，时时刻刻都有被ASF波及的可能，因而对ASFV的及时排查诊断和实时监控显得尤其有重要意义.为了及时排查ASFV感染的可能性，本研究设计了该试验，在区分CSFV野毒和疫苗毒的复合PCR方法的基础上，建立了能同时鉴别ASFV和猪瘟强弱毒株的三重PCR方法，在有效区分猪瘟强毒和弱毒的同时，简便快捷的实时监控非洲猪瘟在我国的流行动态。试验排查结果表明，目前河南各地的猪瘟尽管发生不断，但不存在有ASFV的感染。

摘要： 本发明涉及病毒分析检测领域，具体涉及一种消除非洲猪瘟病毒检测假阳性的方法，是在提取待测样品DNA进行病毒粒子DNA检测之前，加入DNase I与待测样品共孵育。本发明利用Dnase I对样品进行预处理，有效区分了游离ASFV核酸和ASFV粒子，避免了实际检测中出现假阳性的现象，提高了检测的准确性。另外，本发明改善了PCR和qPCR的引物，进一步提高了对ASFV粒子的检测限。最后，本发明得到的PCR和qPCR试剂盒，能够快速采样检测，特异性灵敏，价格低廉，具有良好的应用前景。

摘要： 本发明公开了一种非洲猪瘟病毒、猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合症病毒的三重荧光RT‑PCR检测试剂及其制备方法与用途，设计合成了三套分别针对非洲猪瘟病毒CP530R基因、猪瘟病毒5’‑UTR基因和猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP2基因的特异性引物及Taqman探针和阳性对照，并利用这三套引物及探针建立了一种快速简便、特异性强、灵敏度高的三重荧光RT‑PCR检测体系，可在3～4小时内从被检样本中快速、准确、特异、安全、简便地同时检出非洲猪瘟病毒、猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒的核酸，可用于家猪及其相关样本中微量非洲猪瘟病毒、猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒的核酸的同时检测。

摘要： 本发明提供了非洲猪瘟病毒检测用生物材料、试剂盒和非诊断目的的非洲猪瘟病毒的检测方法，属于分子检测技术领域；所述非洲猪瘟病毒检测用生物材料，包括与非洲猪瘟病毒捕获探针化学结合的AuNPs@ZnFe2O4@COF材料以及负载有非洲猪瘟病毒标记探针和辅助探针的CuO2。本发明的非洲猪瘟病毒检测用生物材料能够特异性结合非洲猪瘟病毒并显色，能够用于检测非洲猪瘟病毒。

摘要： 本申请涉及病毒检测的技术领域，具体公开了一种非洲猪瘟病毒P32重组蛋白、及用于非洲猪瘟病毒间接ELISA抗体检测的试剂盒。该非洲猪瘟病毒P32重组蛋白用于特异性结合非洲猪瘟病毒抗体，其氨基酸序列如SEQ ID NO 1所示；该试剂盒包括所述非洲猪瘟病毒P32重组蛋白或包括包被所述非洲猪瘟病毒P32重组蛋白的酶标反应板；该试剂盒还包括酶结合物、标准阳性对照品、标准阴性对照品、样本稀释液、浓缩洗液、底物溶液、终止液；以及该试剂盒的检测方法、判定方法和用途。本申请提供的非洲猪瘟病毒P32重组蛋白及其试剂盒，能够用于非洲猪瘟病毒抗体的检测。

摘要： 本发明提供了一种检测非洲猪瘟病毒的试剂盒，包括含有ASFV结构蛋白基因VP73片段的质粒；VP73的上游引物，VP73的下游引物，β‑Actin的上游引物，β‑Actin的下游引物；VP73的探针，β‑Actin的探针。该试剂盒操作简便，价格低廉，耗时短，具有较高的灵敏性和特异性，具有广阔的市场前景和商业价值。本发明还提供了一种检测非洲猪瘟病毒方法，以含有ASFV结构蛋白基因VP73片段的质粒作为阳性对照，以猪肌动蛋白基因β‑Actin作为内参对照基因；从检测的最初阶段进行监控，能够监测整个病毒检测过程，完美的体现了内参质控的作用，增加了检测结果的准确性。

摘要： 本发明涉及病毒分析检测领域，具体涉及一种消除非洲猪瘟病毒检测假阳性的方法，是在提取待测样品DNA进行病毒粒子DNA检测之前，加入DNase I与待测样品共孵育。本发明利用Dnase I对样品进行预处理，有效区分了游离ASFV核酸和ASFV粒子，避免了实际检测中出现假阳性的现象，提高了检测的准确性。另外，本发明改善了PCR和qPCR的引物，进一步提高了对ASFV粒子的检测限。最后，本发明得到的PCR和qPCR试剂盒，能够快速采样检测，特异性灵敏，价格低廉，具有良好的应用前景。

摘要： 本发明公开了一种非洲猪瘟病毒、猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合症病毒的三重荧光RT-PCR检测试剂及其制备方法与用途，设计合成了三套分别针对非洲猪瘟病毒CP530R基因、猪瘟病毒5’-UTR基因和猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP2基因的特异性引物及Taqman探针和阳性对照，并利用这三套引物及探针建立了一种快速简便、特异性强、灵敏度高的三重荧光RT-PCR检测体系，可在3～4小时内从被检样本中快速、准确、特异、安全、简便地同时检出非洲猪瘟病毒、猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒的核酸，可用于家猪及其相关样本中微量非洲猪瘟病毒、猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒的核酸的同时检测。

摘要： 本发明公开了一种检测非洲猪瘟病毒和猪瘟病毒的引物组合物及应用。所述引物组合物含有核苷酸序列如SEQ ID NO:1～4所示的引物；所述应用为核苷酸序列如SEQ ID NO:1～4所示的引物在制备检测非洲猪瘟和/或猪瘟的试剂盒中的应用。本发明提供了检测非洲猪瘟病毒和猪瘟病毒的引物，并建立了非洲猪瘟病毒、猪瘟病毒双重RAA琼脂糖凝胶电泳法的检测方法。通过使用本发明提供的引物对待测样本的基因组DNA和/或cDNA进行重组酶介导的等温扩增，再进行琼脂糖凝胶电泳检测，可快速、准确地检测出是否存在非洲猪瘟病毒和/或猪瘟病毒，具有操作简便、检测效率高等优点，对防控非洲猪瘟和猪瘟以及促进养猪业的发展具有重要的应用价值。

摘要： 本发明提供了一种引物探针组及其应用和一种检测非洲猪瘟病毒、猪瘟病毒、猪丹毒丝菌的试剂盒。本发明提供的试剂盒同时含有非洲猪瘟病毒、猪瘟病毒、猪丹毒丝菌的引物探针组，6条引物及3条探针同时加入到一个反应体系中，且互不干扰，使用本发明的试剂盒检测非洲猪瘟病毒、猪瘟病毒、猪丹毒丝菌时，一次扩增反应可完成三种病原筛查。对非洲猪瘟病毒、猪丹毒丝菌、猪瘟病毒的最低检测限均为24.9copies/μL，具有很好的灵敏性，而且具有良好的特异性，稳定性好，且操作简便。

摘要： 本发明公开了一种用于猪瘟病毒和非洲猪瘟病毒双重一步直扩实时荧光定量RT‑PCR检测试剂盒及其应用。所述的试剂盒包含核酸提取液、2×Direct qRT‑PCR Mix、酶混合液、阴性对照，阳性对照以及引物和探针的混合物，其中所述的引物的核苷酸序列为SEQ ID NO.1至SEQ ID NO.4所示，所述的探针的核苷酸序列为SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示，SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示探针的5’端分别标记荧光报告基团HEX和FAM；所述探针的3’端标记小沟结合物(MGB)和荧光淬灭基团(BHQ‑1)。本发明可实现在一个反应中同时对猪瘟病毒与非洲猪瘟病毒进行快速鉴别检测，具有特异性高，稳定性好，操作简便的优点。不仅适用于科研单位定量分析，而且适合于各级防控单位，基层兽医站，大中型养殖场等的病原检测分析，具有较好的应用前景。