重组蛋白
重组蛋白的相关文献在1989年到2023年内共计2590篇,主要集中在基础医学、畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂、分子生物学
等领域,其中期刊论文913篇、会议论文96篇、专利文献130138篇;相关期刊386种,包括生物工程学报、生物技术通报、生物技术通讯等;
相关会议77种,包括中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十次学术研讨会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十九次学术研讨会、中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第七次代表大会暨第十二次学术研讨会、2012年中华医学会全国临床微生物学术交流大会等;重组蛋白的相关文献由6922位作者贡献,包括邹全明、汪铭书、程安春等。
重组蛋白—发文量
专利文献>
论文:130138篇
占比:99.23%
总计:131147篇
重组蛋白
-研究学者
- 邹全明
- 汪铭书
- 程安春
- 章金勇
- 顾江
- 宋林生
- 梁念慈
- 王玲玲
- 吴翼
- 陈孝跃
- 刘胜旺
- 敬海明
- 余铭恩
- 曾浩
- 马得莹
- 冯强
- 刘新光
- 王丽颖
- 李明松
- 杨乔
- 樊绍文
- 韩宗玺
- 于永利
- 卢陆
- 吴琼杉
- 孙黎
- 赵建民
- 朱德康
- 赵莉群
- 陈钢粮
- 郭刚
- 张峘
- 杨峰
- 杨茜
- 童坤
- 肖潇
- 董衍东
- 付宝权
- 张伟
- 鲁东水
- 吴移谋
- 孙国凤
- 孟继鸿
- 彭六生
- 曾建华
- 李文卉
- 李洪波
- 杨海泉
- 沈微
- 王天云
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张皓淳
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摘要:
为了实现非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)p54基因在大肠杆菌中的高效表达,同时建立以ASFV-p54重组蛋白为抗原的间接ELISA抗体检测方法,本试验根据GenBank(序列号:NC_044943.1)公布的ASFV p54的基因序列,设计一对特异性引物,扩增构建pGEX-6P-1-p54原核表达质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中进行复制,经IPTG诱导表达,对重组蛋白利用SDS-PAGE分析和免疫印迹鉴定正确后,进行表达条件优化,并纯化重组蛋白。随后用ASFV-p54重组蛋白为包被抗原,通过条件优化、特异性试验、敏感性试验和重复性试验,建立一种稳定的血清ASFV抗体检测方法。结果显示,ASFV p54基因成功克隆到pGEX-6P-1原核表达载体中,得到pGEX-6P-1-p54原核表达质粒;转化E.coli菌株BL21(DE3)中,经诱导表达得到重组蛋白,大小为46 kDa;成功建立测定ASFV抗体的间接ELISA方法,优化后确定最佳包被浓度为1.2μg/mL,待检血清最佳稀释倍数1∶100,最佳封闭液为1%BSA,酶标抗体最佳稀释度为1∶4000,经验证此方法具有良好的特异性、灵敏度和重复性,可初步应用于ASFV抗体的检测。
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柯吴坚;
冷欣颖;
刘雅慧;
陈嵘祎;
陈征宇;
张晓辉;
王柳苑;
廖玉英;
梁春梅;
陈慧茹;
龙海莹;
吴育娇;
杨立刚;
杨斌
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摘要:
目的探讨不同亚型梅毒螺旋体(Tp)黏附素蛋白TP0136在神经梅毒(NS)患者血液中的诊断价值。方法比较60例NS患者与120例非神经梅毒的梅毒患者(NNS)一般情况。通过分子克隆技术构建表达和纯化Nichols Seattle TP0136(NST)和Nichols Houston TP0136(NHT)重组蛋白,采用ELISA方法检查NS和NNS患者血清中NST和NHT抗体水平。结果NS和NNS患者两组之间年龄、性别、来源地、职业无统计学差异(均P>0.05),而婚姻状况、神经系统症状、血清或血浆TRUST和TPPA滴度、血清或血浆TP-IgM阳性率、脑脊液TRUST和TPPA滴度均有统计学差异(均P<0.05)。NST在NS组和NNS组血清或血浆中抗体水平无差异(t=0.15,P=0.920);NHT在NNS组血清或血浆中抗体水平高于NS患者,差异有统计学意义(t=3.68,P=0.021)。结论Tp黏附素蛋白TP0136重组蛋白NHT或可作为NS诊断的潜在血液学标志物。
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于恩远;
潘晨浩;
姜轩;
李颖;
赵瑞利;
张欣;
曾君;
荣睿璠;
金天明;
于晓雪
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摘要:
为了研制2、3、9型猪链球菌(SS)通用的重组亚单位疫苗,本研究通过生物信息学软件对SS分泌型核酸酶A(SsnA)、二氢硫辛酰胺脱氢酶(DLDH)、锌转运蛋白(ZnuA)3种毒力因子的蛋白质一级结构、B细胞及辅助T(Th)细胞抗原表位、亲疏水性及抗原性、二级结构进行综合分析后,预测获得了SsnA、DLDH和ZnuA具有亲水性和较好抗原性的B/Th细胞表位,将它们与12聚体树突状细胞靶向肽(DC3pep)序列串联后获得了重组氨基酸序列DC3pep-SDZ。经蛋白质理化分析DC3pep-SDZ分子质量约为44 ku,理论等电点(pI)为4.65,平均亲水性为-0.462,为亲水性蛋白。由生物公司构建重组原核表达载体pET28a-DC3pepSDZ,转化感受态细胞后经IPTG诱导表达后经western blot鉴定重组蛋白以可溶形式表达。表达产物利用亲和层析镍柱纯化,SDS-PAGE结果显示得到44 ku的纯化目的蛋白,纯化浓缩后经BCA蛋白浓度测定试剂盒检测,浓度为5.60 mg/mL。利用不同浓度纯化重组蛋白对2%猪红细胞悬液进行体外溶血试验,并对PK15、IPEC-J2细胞进行毒性试验,检测重组蛋白的生物安全性。体外溶血试验结果显示在5μg/mL~500μg/mL浓度范围内,DC3pep-SDZ蛋白对2%猪红细胞悬液溶血率低于5%;细胞毒性试验结果显示经500μg/mL DC3pep-SDZ蛋白孵育后,PK15与IPEC-J2细胞的相对增殖率(RGR)分别为98.5%和99.6%,与对照组RGR相比均无显著差异。表明,重组蛋白无明显毒性作用。本实验首次构建并表达了重组蛋白DC3pep-SDZ,该蛋白生物安全性良好,为后续分析其免疫保护效果、研发2、3、9型SS重组亚单位疫苗奠定基础。
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石博;
侯美佳;
孙思萌;
刘嘉利;
董秀梅;
杨巍;
张萍;
师东方
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摘要:
为探究影响产肠毒素大肠杆菌(ETEC)不耐热肠毒素2型(LT2)毒性的关键氨基酸及其突变重组蛋白的免疫原性,本研究扩增了LT2编码基因elt2,并采用重叠延伸PCR(SOE PCR)方法分别对其A亚基进行R5K、H42A、S59K、V95K、Y102K和E110K的单突变,将elt2及其6个突变基因分别双酶切后克隆于pET-30a中构建重组大肠杆菌pET-30a-elt2/BL21、pET-30a-R5K/BL21、pET-30a-H42A/BL21、pET-30a-S59K/BL21、pET-30a-V95K/BL21、pET-30a-Y102K/BL21、pET-30a-E110K/BL21,经IPTG诱导表达了重组LT2(rLT2)及其突变重组蛋白mrLT2-R5K、mrLT2-H42A、mrLT2-S59K、mrLT2-V95K、mrLT2-Y102K、mrLT2-E110K;利用细胞毒性试验和小鼠致病性试验比较了rLT2和突变重组蛋白对小鼠肾上腺皮质瘤(Y1)细胞的毒性作用及对小鼠的致病性,并将rLT2和mrLT2-V95K作为免疫原接种小鼠检测其对小鼠的免疫原性。结果显示,突变重组蛋白对Y1细胞的毒性作用均弱于rLT2,其中mrLT2-V95K对Y1细胞的毒性作用最弱为1.145×10^(1)TCID_(50)/0.1 mL;rLT2及该突变重组蛋白对小鼠均无致病性,表明小鼠也不适合用于LT2的致病性检测。mrLT2-V95K免疫BALB/c小鼠的血清特异性IgG抗体效价和对rLT2的中和抗体效价分别为1:102 400和1:32,与rLT2的免疫原性无显著差异。本研究首次证实LT2 A亚基的aa95对LT2细胞毒性作用的影响较明显,其突变重组蛋白具有良好的免疫原性,为大肠杆菌减毒疫苗研究提供了重要科学信息。
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缪士涛;
胡敏;
宫兴文
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摘要:
通过将乙醛脱氢酶2(acetaldehyde dehydrogenase 2,ALDH2)与NusA-tag融合表达,以获得能够在大肠杆菌中可溶性表达并且具有较好活性的重组蛋白。首先,根据Aldh2的基因序列设计引物,引入EcoRI和XhoI的酶切位点,聚合酶链式反应扩增出Aldh2基因片段,连接到pMD19-T-simple载体,并转化到大肠杆菌DH5α菌株。测序正确后,双酶切处理,将Aldh2基因片段克隆到表达载体pET44b(+)上NusA-tag下游的EcoRI和XhoI酶切位点之间,得到pET44b(+)-NusA-Aldh2重组载体,转化入大肠杆菌BL21(DE3)菌株。经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导,表达的融合蛋白具有良好的溶解性,主要存在于上清液中。融合蛋白的最优表达条件为IPTG浓度0.25 mmol/L、诱导温度37°C、诱导时间3 h。重组蛋白的最适反应温度为37°C,在pH 7.0时达到最好的催化效果。不同金属离子如Ca^(2+)、K^(+)、Na^(+)、Mg^(2+)、Mn^(2+)都对酶有激活作用,且Mg^(2+)效果最好,最佳的酶活性为1.64 U/mL。而野生型ALDH2在大肠杆菌中表达时完全以无活性的包涵体形式存在,复性后得到的酶活性为1.43 U/mL。本研究通过引入NusA进行融合表达,实现了ALDH2在大肠杆菌中的可溶性表达,且重组蛋白的活性优于包涵体复性蛋白。这些结果表明利用NusA进行融合表达是制备重组ALDH2的一个良好方法。
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刘靖松;
付京城;
温丙言;
杨彦宾;
郭爽;
焦显芹;
陈瑾;
黄若超;
王月影;
李和平
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摘要:
【目的】对猪黏膜保护因子——血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)基因进行克隆及原核表达,为研究高表达HO-1在肠黏膜损伤中的保护作用提供技术支持。【方法】根据GenBank中公布的HO-1序列(登录号:NM_001004027.1),利用Primer Premier 6.0设计1对特异性引物,利用RT-PCR方法扩增HO-1基因片段,将其与pMD19-T克隆载体连接,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,筛选阳性克隆进行PCR鉴定;将载体pNCMO2与重组载体pMD19-T-HO-1进行SalⅠ和KpnⅠ双酶切,使用T4 DNA连接酶连接,利用电击转化技术将重组表达载体pNCMO2-HO-1转入感受态短小芽孢杆菌,使用IPTG进行诱导表达,应用SDS-PAGE和Western blotting分析HO-1在短小芽孢杆菌中的融合表达情况。【结果】猪HO-1基因全长897 bp,编码298个氨基酸。双酶切后在约5200和897 bp处分别观察到pNCMO2载体片段和HO-1基因片段,证明成功构建基因表达载体pNCMO2-HO-1;电转后的双酶切结果表明,在相同的位置观察到pNCMO2和HO-1片段,证明重组表达载体pNCMO2-HO-1成功导入短小芽孢杆菌。SDS-PAGE和Western blotting鉴定结果发现,在36.5 ku处出现了明显的蛋白印迹,表明成功表达了HO-1的重组蛋白,且为胞外分泌。【结论】本研究成功构建了HO-1的重组原核表达载体,pNCMO2-HO-1重组载体可以在短小芽孢杆菌中诱导表达。
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李晶;
张慧;
李懿;
张孝明;
吕萍;
梁成罡
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摘要:
《中国药典》2020年版(三部)新增了人用聚乙二醇化重组蛋白及多肽制品总论。本文依照其总论体例,阐述了研究起草过程中所遵循的基本原则,重点详述了所关注的技术要点及相应研究结果,旨在为本领域内相关研发和质控人员更好地理解和应用总论提供参考。
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张超;
李小鹏;
张传宝
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摘要:
目的构建半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(CysC)原核表达载体,用以快速获取低成本、高浓度、高纯度的CysC纯化蛋白,为制备应用于临床实验室检测的CysC标准物质和质控品奠定基础。方法用Codon Adaptation Tool将人的CysC编码序列优化为大肠杆菌偏好的密码子序列,再将合成的DNA片段克隆至pET-28a(+)原核表达载体。将重组CysC表达质粒转化至E.coli BL21感受态中,优化诱导表达条件、确定最优表达条件组合及有效表达序列,并用融合标签对重组蛋白进行纯化。结果成功构建重组CysC原核表达质粒,明确CysC表达序列,确定异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白表达浓度、诱导温度等条件,纯化的CysC蛋白可通过临床检测,且稀释倍数与检测浓度间呈现线性关系。结论成功构建重组CysC的高效原核表达系统,重组CysC蛋白纯度大、浓度高、生产周期短,有望为CysC标准物质和质控品的制备提供物质基础。
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黄艳丽;
龚静芝;
吴云萍;
黄思扬
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摘要:
从我们前期实验获得的蛋白组学数据中筛选到1个新的诊断靶标Annexin(ANN),并从肝片吸虫cDNA中扩增Ann基因,将其在大肠杆菌中表达,通过亲和层析纯化后,以该重组蛋白为诊断抗原,建立间接ELISA方法,通过棋盘法优化反应条件,并计算其临界值,接着使用该ELISA方法检测来自河北省9个地区的312份绵羊血清样本。结果显示,成功获得了rANN蛋白,并成功建立临界值为1.145的间接ELISA方法,该方法的敏感性和特异性分别为95.00%和86.36%,河北这些地区片形吸虫病的平均感染率为43.27%。本实验成功筛选得到了一种新的片形吸虫病诊断靶标ANN,并建立了基于该重组蛋白的间接ELISA方法,该方法可初步用于绵羊片形吸虫病的诊断。
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李金泽;
汤菊芬;
黄瑜;
简纪常;
施钢;
蔡佳
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摘要:
为研究斜带石斑鱼Epinephelus coioides T细胞免疫球蛋白黏蛋白-4(T-cell immunoglobulin and mucin-domain-containing molecule 4,TIM-4)在免疫应答过程中的作用,通过聚合酶链式反应(PCR)获得斜带石斑鱼TIM-4的蛋白编码区(GenBank登录号:MZ465580),利用生物信息学分析其结构特征,采用荧光定量PCR(qPCR)分析TIM-4在健康鱼体中的组织分布,以及经LPS和Poly I:C刺激后的表达变化,并构建原核表达载体质粒TIM-4-4T,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行TIM-4重组蛋白诱导表达。结果表明:斜带石斑鱼TIM-4基因的蛋白编码区片段长度为702 bp,可编码234个氨基酸,含有V-Type(IGV)、BTK和PRY 3个功能结构域;qPCR显示,TIM-4基因在斜带石斑鱼10种组织中均有表达,在胃中的表达量最高(P<0.05),在脾脏中表达量最低;经LPS刺激后,脾脏细胞中的TIM-4表达量显著降低(P<0.05),而经Poly I:C刺激后,脾脏细胞中的TIM-4表达量显著升高(P<0.05);SDS-PAGE电泳显示,TIM-4重组蛋白相对分子质量约为25100,以包涵体形式表达,在0.4 mmol/L IPTG、37°C下诱导6 h时,TIM-4重组蛋白的表达量最大。研究表明,TIM-4基因可能参与了斜带石斑鱼抗感染免疫反应,本研究结果为深入了解TIM-4的生物学功能提供了理论基础。
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殷德辉;
宋秀玲;
李丽;
徐坤;
徐莉春;
李娟
- 《第一届布鲁氏菌病国际学术交流会》
| 2018年
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摘要:
背景:目前,布鲁氏菌病是一种人畜共患传染病,近年来其发病率不断上升.简单、快速、灵敏的布鲁氏菌病诊断方法对于其早期诊断和早期治疗具有非常重要的意义,可以减轻患者的医疗负担和经济损失.基于线性B细胞表位预测工具,构建了一种新型多表位重组蛋白.研究中,用重组蛋白作为抗原免疫小鼠以获得免疫应答,并使用感染布鲁氏菌病的山羊和人血清来检验其抗原性,判断其对布鲁氏菌病诊断的准确性. 结果:诱导接种疫苗的小鼠成功产生了抗体,通过分析血清抗体亚型,主要抗体是IgG.流式细胞术分析显示,小鼠脾细胞中CD4+、CD8+百分比以及CD4+/CD8+比率增加,表明重组蛋白在小鼠体内诱导产生了强烈的免疫应答,重组蛋白具有强免疫反应性.利用间接ELISA方法进行验证,结果表明重组蛋白可以正确区分阳性和阴性布鲁氏菌病血清样品,与全菌抗原相比,重组蛋白具有更强的灵敏度和特异性. 结论:在本研究中,动物实验表明构建的重组蛋白具有良好的抗原性,间接ELISA证明它可以作为抗原诊断布鲁氏菌病.因此,构建的重组蛋白是布鲁氏菌病疫苗和血清学诊断的潜在候选抗原.
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廉传江;
张园华;
张晓娜;
吴少莲;
文辉强;
陈洪岩;
韩凌霞
- 《第十二届中国北方实验动物科技年会》
| 2014年
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摘要:
为了制备鸡BLec蛋白的多克隆抗体,本实验采用RT-PCR技术从2月龄B15单倍型鸡的胸腺组织扩增了ChBLec基因,并以pET-30a(+)为原核表达载体成功构建重组质粒pET-30a-ChBLec,并在大肠杆菌BL21(DE3)中经IPTG(0.02mmol/L)诱导表达,获得大小约为17kDa以包涵体形式存在的ChBLec重组蛋白.把含有重组蛋白的SDS-PAGE胶研磨后制备免疫原,免疫新西兰兔,获得兔抗血清.Western blot检测显示,兔抗血清能检测到pET-30a-ChBLec外源蛋白.结果表明:ChBLec基因在大肠杆菌成功表达,且成功制备了兔抗ChBLec血清,该血清可进一步用于检测ChBLec蛋白在鸡体内的表达情况.
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刘梦茜;
李春燕;
陈仕怡;
袁晓琴;
星东;
王全溪
- 《福建省第十届猪病学术研讨会暨猪产业高峰论坛》
| 2017年
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摘要:
近年来,猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)给哺乳仔猪造成了严重的损失.M蛋白是PEDV重要的跨膜结构蛋白,是基因工程疫苗和诊断试剂的理想抗原.本实验设计M基因的特异性引物,扩增M基因,将鉴定正确的重组质粒转化致BL21感受态细胞,IPTG诱导表达及条件的优化.结果表明,重组表达的融合蛋白PET-32a-M大小约为43kD,与预期大小相符.SDS-PAGE电泳分析发现,在IPTG浓度为1.0mmoL/L,温度为37°C,诱导时间为6h时,蛋白表达效果最佳.Western-Blot结果进一步显示,重组蛋白PET-32a-M在体外可以被成功表达.
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ZHANG Xiao-juan;
张小娟;
贾广乐;
JIA Guang-le;
LIAO Juan-hong;
廖娟红;
MEI Lin;
梅琳;
WANG Hui-yu;
王慧煜;
LI Gui-lan;
李桂兰;
张映;
ZHANG Ying;
HAN Xue-qing;
韩雪清
- 《第三届全国检验检测检疫学术报告会》
| 2015年
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摘要:
对布鲁菌Omp28基因进行大肠埃希菌表达,用表达的布鲁菌重组蛋白Omp28作为抗原包被酶标板,建立检测布鲁菌抗体间接ELISA方法,进一步研发试剂盒,用该试剂盒和IDEXX抗体检测试剂盒同时对540份临床牛血清样品进行检测,评价二者的符合率.反应条件优化后,该试剂盒的抗原包被浓度为1μg/mL,作用条件为37°C1h;封闭液为50g/L脱脂乳,作用时间为30min;血清稀释度为1∶200,作用时间为30min;酶标二抗稀释度为1∶3×104,作用时间为30min;与IDEXX抗体检测试剂盒的符合率达96.67%,证明该试剂盒可用于临床牛布鲁菌抗体的检测.
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练玉银;
聂湘辉;
王家骥
- 《2015全国小儿泌尿外科学术会议》
| 2015年
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摘要:
目的:构建pPICZαA-EPF载体,电转入毕赤酵母GS115细胞中诱导表达rEPF蛋白,筛选能稳定分泌表达rEPF蛋白的毕赤酵母GS115细胞株,获取大量具有较高免疫原性的早孕因子(EPF)重组蛋白.rn 方法:优化EPF基因编码碱基序列,并在其末端融合6×His碱基序列,合成EPF-His基因,构建pPICZαA-EPF载体.将重组表达质粒pPICZαA-EPF转化大肠杆菌DH5αE.coli,提取pPICZαA-EPF质粒,经xhoI/NotI双酶切、测序鉴定.重组质粒经sacI限制性内切酶酶切线性化,并电转化入毕赤酵母GS115细胞,zeocin抗性培养基筛选重组酵母.接种重组酵母于BMGY/BMMY培养基,甲醇诱导分泌表达,筛选能稳定分泌表达的毕赤酵母GS115细胞株,表达产物经SDS-PAGE、Western-blot及Ea-RIT鉴定.rn 结果:成功合成EPF-His基因片段并构建pPICZαA-EPF载体.转化后的毕赤酵母GS115,经诱导后表达EPF重组蛋白;筛选出一株能稳定分泌表达EPF的毕赤酵母GS115细胞株3760-6.SDS-PAGE结果显示表明重组蛋白分子量为18kDa;Western blotting实验显示EPF重组蛋白与抗His标签单克隆抗体有特异性结合,经Ea-RIT结果表明其具有EPF样活性.rn 结论:成功构建了EPF的pPICZαA-EPF表达载体,筛选出能胞外稳定表达rEPF的GS115细胞株,并获得了具有生物学特性的EPF重组蛋白.
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冯培祥;
FENG Pei-xiang;
ZHU Mei-sheng;
朱梅胜;
YANG Li;
杨莉;
TAN Xue-jin;
檀学进;
PAN Fu-xing;
潘福星;
齐娟;
QI Juan;
郭妍妍;
GUO Yan-yan;
ZHANG Yi;
张毅;
YIN Yan-bo;
尹燕博
- 《中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十次学术研讨会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十九次学术研讨会》
| 2014年
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摘要:
本研究旨在克隆鸡 β-防御素 Gal-9基因,对其预测的成熟肽基因进行原核表达和对产物进行抑菌活性的检测.根据 GenBank 发表的鸡β-防御素基因Gal-9(NM_001001611.2)设计引物,采用RT-PCR方法从鸡食道中扩增得到鸡β-防御素Gal-9基因,将该成熟肽基因克隆到原核表达载体pET-32a(+)载体的EcoRI/XhoI双酶切位点上,构建重组原核表达质粒pET-32a-Gal-9.将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),于37°C 进行诱导表达.扩增出Gal-9其cDNA大小为204bp,成熟肽编码42个氨基酸.SDS-PAGE电泳表明,重组鸡Gal-9蛋白大小约为25ku,与预期大小一致,重组蛋白主要以包涵体形式存在.重组鸡Gal-9蛋白对金黄色葡萄球菌(ATCC 25923)、粪肠球菌(ATCC 29212)、大肠杆菌(ATCC 25922)、酵母菌(GS115)都能产生抑菌作用,最小抑菌浓度分别为62.50mg/L、31.75mg/L、125.00mg/L、31.75mg/L.成功获得了鸡β-防御素Gal-9成熟肽基因的表达产物,证实了重组鸡Gal-9蛋白具有广谱的抗菌活性,体外抑菌试验为其在家禽生产中应用提供了理论基础.
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Ji Xiang-bo;
姬向波;
Xu Qiu-liang;
徐秋良;
Feng Xiu-li;
冯秀丽;
Chen Pu-yan;
陈溥言
- 《中国畜牧兽医学会家禽学分会第十七次全国家禽学术研讨会》
| 2015年
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摘要:
为了探索制备囊素活性肽的有效方法,本实验以囊素五肽和三肽的氨基酸序列为基本单元,设计了3种不同串联方式的囊素肽片段,按照大肠杆菌偏爱密码子设计引物,利用SOE-PCR技术扩增了3种的囊素肽编码基因,分别构建重组质粒pET-32a-BS1、pET-32a-BS2和pET-32a-BS3,并转化于大肠杆菌OrigamiTMB中诱导表达.SDS-PAGE电泳和Western blot结果表明,3种重组囊素肽BS1、BS2和BS3均以可溶形式存在上清液中,与天然囊素肽有相似的免疫原性.免疫效果监测表明,3种重组囊素肽在大肠杆菌中成功表达,免疫效果检测结果表明,与单独免疫灭活抗原组相比,3种重组囊素肽均能明显促进鸡血清中抗体产生,提高外周血淋巴细胞增殖能力;有2种能提高血清中细胞因子的含量.本研究获得了3种高效表达的重组囊素肽,动物实验结果为其作为免疫增强剂提供了实验依据.表达产物与禽流感灭活抗原联合免疫鸡只,进行免疫效果监测.
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Ji Xiang-bo;
姬向波;
Xu Qiu-liang;
徐秋良;
Feng Xiu-li;
冯秀丽;
Chen Pu-yan;
陈溥言
- 《中国畜牧兽医学会家禽学分会第十七次全国家禽学术研讨会》
| 2015年
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摘要:
为了探索制备囊素活性肽的有效方法,本实验以囊素五肽和三肽的氨基酸序列为基本单元,设计了3种不同串联方式的囊素肽片段,按照大肠杆菌偏爱密码子设计引物,利用SOE-PCR技术扩增了3种的囊素肽编码基因,分别构建重组质粒pET-32a-BS1、pET-32a-BS2和pET-32a-BS3,并转化于大肠杆菌OrigamiTMB中诱导表达.SDS-PAGE电泳和Western blot结果表明,3种重组囊素肽BS1、BS2和BS3均以可溶形式存在上清液中,与天然囊素肽有相似的免疫原性.免疫效果监测表明,3种重组囊素肽在大肠杆菌中成功表达,免疫效果检测结果表明,与单独免疫灭活抗原组相比,3种重组囊素肽均能明显促进鸡血清中抗体产生,提高外周血淋巴细胞增殖能力;有2种能提高血清中细胞因子的含量.本研究获得了3种高效表达的重组囊素肽,动物实验结果为其作为免疫增强剂提供了实验依据.表达产物与禽流感灭活抗原联合免疫鸡只,进行免疫效果监测.